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文档简介

1、液氮研磨液氮研磨匀浆或液氮研磨匀浆或液氮研磨应用红细胞裂解液处理应用红细胞裂解液处理直接裂解或胰蛋白酶处理直接裂解或胰蛋白酶处理裂解裂解结合结合漂洗漂洗洗脱洗脱提取流程提取流程裂解裂解结合结合漂洗漂洗洗脱洗脱提取流程提取流程裂解裂解结合结合漂洗漂洗洗脱洗脱提取流程提取流程裂解裂解结合结合漂洗漂洗洗脱洗脱提取流程提取流程 按按1OD=40 g/ ml RNAg/ ml RNA计算计算RNARNA的产量。的产量。 OD260/OD280OD260/OD280在在1.8-2.01.8-2.0。 紫外吸收检测紫外吸收检测RNA的纯度的纯度mRNA53AAAAAAAAPoly(A)*尾T T T TOl

2、igo(dT)Super RnaseH-Reverse TranscriptaseT T T TAAAAAAAAmRNAcDNAT T T TcDNA3553PCR扩增两步法两步法RT-PCRSuper RnaseH-Reverse Transcriptase35T T T TcDNAT T T TcDNAPCR扩增53mRNAAAAAAAAAPoly(A)*尾3535两步法与一步法两步法与一步法RT-PCR比较比较 1.1.RNARNA降解或起始量少降解或起始量少2.2.RNARNA含抑制成分含抑制成分3.3.cDNAcDNA 5 5端不端不全全4.4.目的基因在组织中不目的基因在组织中不 表达或表达量太低表达或表达量太低 原因原因对对策策1.1.分离高质量的分离高质量的RNARNA2.2.使用高温逆转录酶,如使用高温逆转录酶,如RT007RT007(BioFluxBioFlux)3.3.

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