2020版《中国药典》微生物限度计数—酵母菌及霉菌

1、2020版药典微生物限度计数一酵母菌及霉菌2020版本药典(1)菌液制备取白色念珠菌的新鲜培养物，用0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfii/m啲菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加5ml含0.05% (ml/ml)聚 山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液，将砲子洗脱。然后，使用移液枪 吸出砲子悬液至无菌试管内，用含0.05% (ml/m 1)聚山梨酯80的0.9% 无菌氣化钠溶液制成lOcfii/in啲黑曲霉孑包子悬液。菌液制备后保存 在2°C冰箱，在24小时内使用。(2) 计数培养基适用性检査接种不大于lOOcfii的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至胰酪大豆腺琼 脂培养基平板，35°

2、C条件下培养4天；接种不大于lOOcfii的白色念珠 菌和黑曲新的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，25°C条件下培养4 天。每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。同时，用相应的对照培 养基替代被检培养基进行上述试验。(3) 计数方法适用性试验1) 供试液制备取供试品10g,用胰酪大豆腺液体培养基制备成1:10供试液。2) 接种和稀释按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用 供试液。所加菌液的体积不超过供试液郊积的1%。1、试验组取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每hill供试液中含菌量不人于lOOcfii o2、供试品对照组取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试

3、验 组操作。3、菌液对照组取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液， 按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。3）供试品中微生物的回收取20ml温度不超过45°C的胰酪大豆腺琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培 养基，注人直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用无菌操作 台风干的方法使培养基表面干燥。每一平板表面接种上述照“供试 液的制备”和“接种和稀释”制备的供试液O.linl。胰酪大豆腺琼脂 培养基平板在35°C条件下培养3天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在25°C 条件下培养4天。同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。计算各 试验组的平均菌落数。（4）供试品检查沙

4、氏葡萄糖琼脂培养基用于测定霉菌和酵母菌总数。按方法适 用性试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定，每稀释级每种培 养基制备2个平板。胰酪大豆陈琼脂培养基平板在35°C培养3天，沙 氏葡萄糖琼脂培养基平板在25°C培养5天，观察菌落生长情况，点计 平板上生长的所有菌落数，计数并报告。阴性对照试验以稀释液代 替供试液进行阴性对照试验。（具体流程见下页）点击作者头像进入主页下载2020版本药典其它资料霉菌与酵母菌计数方法1试验菌液的制备和使用（以白色念珠菌为示例）白色念珠菌（0）代I传代培养I实验菌液的制备：沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基，培养温度2025°

5、C,培养时间23天I计数培养基适用性检査：胰酪大豆豚琼脂培养基，培养温度3035C,培养时间不超过5天，接种量不大于lOOcfuI计数方法适用性试验：胰酪大豆丿冻琼脂培养基（MPN法不适用），培养温度3035°C,培养时间不超过5天，接种量不大于lOOcfh注：当需用玫瑰红钠琼脂培养基测定雹菌和酵母菌总数时，应进行培养基适用性检查， 检查方法同沙氏葡萄糖琼脂培养基1.1菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌 种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学 特性。1.2菌液制备（按表1规定程序培养各试验菌株）取白色念珠菌的新鲜培养物I用pH7.0无菌氯化钠蛋白腺缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液収黑曲焉的新鲜培养物!加入35ml含0.05%聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠蛋白腺缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液