热毒清胶囊质量标准研究

1、热毒清胶囊质量标准研究         【摘要】  目的研究并建立中药热毒清胶囊的质量标准。方法采用薄层色谱（TLC）法对方中的重楼 、南板蓝根和冰片进行了色谱鉴别，采用高效液相色谱（HPLC）法测定了重楼中重楼皂苷I（C51H82O20）的含量。结果鉴别方法重复性好，专属性强。当进样量在0.079 20.792 0 mg范围内时，重楼皂苷I进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系，平均回收率为98.49%，RSD =1.58%。结论所研究的方法可有效地控制热毒清胶囊的质量。 【关键词】  热毒清胶

2、囊 重楼 重楼皂苷 薄层色谱法 高效液相色谱法Abstract:ObjectiveTo study and establish the quality standard for Reduqing Capsules. MethodsThe TLC technology was used to identify Rhizoma Paridis, Baphicacanthus cusia (Nees) Bremek, and Borneol. HPLC was used to measure the content of Chonglou saponin （I）. ResultsThe TLC id

3、entification was highly specific and the spots were clear and concentrated. When injection value was in the range of 0.07920.792g, there was a good linear relationship between the injection value and measured peak area for Chonglou saponin (I). The average recovery rate was 98.49%, RSD =1.58%. 

4、 ConclusionThis standard is effective for the quality control of Reduqing capsules.Key words:Reduqing capsules;   Rhizoma Paridis;   Chonglou saponin(I);   TLC;   HPLC热毒清胶囊是由重楼 、南板蓝根、冰片、蒲公英、甘草组成的复方制剂，具有清热解毒，消肿散结的功能。用于热毒内盛所致的腮腺炎、扁桃腺炎、喉头炎、上呼吸道感染等症。为了有效地控制其药品的质量标

5、准，进行了定性及定量研究，采用薄层色谱法对方中的重楼 、南板蓝根和冰片进行了鉴别1，采用HPLC法对重楼中重楼皂苷I（C51H82O20）进行了含量测定。1  器材1  仪器Agilent  1100  HPLC高效液相色谱仪，Agilent  VWD检测器，HP二维化学工作站，Agilent  8453紫外可见分光光度计，德国赛多利斯BP211D十万之一电子天平。2  试剂甲醇为色谱纯，水为二重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。3  试药重楼皂苷I对照品购自中国药品生物制品检定所（批号111591-200402，供含量

6、测定用），热毒清胶囊10批成品（广西万寿堂药业有限公司提供）。2  方法与结果2.1  定性鉴别2.1.1  南板蓝根的薄层色谱鉴别 取本品粉末2 g，加氯仿10 ml，浸渍20 min，并时时振摇，滤过，滤液置水浴上挥干，残渣加氯仿0.5 ml使溶解，作为供试品溶液。另取靛玉红对照品，加氯仿制成每毫升含0.05 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各510 l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(6090)-醋酸乙酯(73)为展开剂，展开，取出晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图

7、1。2.1.2  冰片的薄层色谱鉴别  取本品粉末2 g，加乙醚10 ml，浸渍20 min，滤过，滤液挥干，残渣加氯仿0.5 ml使溶解，作为供试品溶液。另取冰片对照品，加氯仿制成每毫升含2 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各510 l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(6090)-醋酸乙酯(73)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图2。2.1.3  重楼的薄层色谱鉴别 取本品粉末2 g，加乙醚1

8、0 ml，浸渍20 min，取乙醚浸渍过的残渣挥干，加甲醇10 ml，超声处理30 min，滤过，滤液挥干，残渣加水4 ml使溶解，移入分液漏斗中，加水饱和的正丁醇8 ml，轻轻振摇3 min，静置30 min，取上层液加水4 ml，轻轻振摇3 min，静置30 min，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇4 ml使溶解，作为供试品溶液。另取重楼对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各51 0 l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(730.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105烘烤数分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对

9、照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图3。2.2  定量测定2.2.1  测定成分的选择与依据热毒清胶囊以重楼、南板蓝根、冰片、蒲公英、甘草等药材经加工制成的中药制剂，具有清热解毒，消肿散结之功，用于热毒内盛所致的腮腺炎、扁桃腺炎、喉头炎、上呼吸道感染等症。重楼为方中的君药，具有清热解毒，消肿止痛，凉肝定惊之功，其所含有效成分重楼皂苷I（C51H82O20）和重楼皂苷II（C44H70O16），因此我们选择方中君药重楼进行含量测定研究，为控制该产品的质量提供保障，以重楼皂I为对照品用高效液相色谱法测定本品中重楼皂苷I的含量。   &

10、#160;     2.2.2  色谱条件与系统适用性实验 用十八烷基键合硅胶为填充剂；乙腈-水（4258）为流动相2；检测波长为210 nm。理论板数按重楼皂苷I峰计算应不低于4 000。2.2.3  对照品溶液的制备精密称取在40减压干燥2 h的重楼皂苷I对照品19.80 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每毫升中含重楼皂苷为0.792 mg）。2.2.4  供试品溶液的制备取本品1 g，精密称定，置50 ml具塞锥形瓶中，精密加入乙醇溶液25 ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理30 min

11、，取出，放冷，再称定重量，用乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，取上清液，用微孔滤膜（0.45 m）滤过，即得。2.2.5  含量测定方法学考察实验2.2.5.1  标准曲线及线性范围考察分别精密吸取上述对照品溶液0.5，1，2.5，4，5 ml，置5 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。按“2.2.2”项下的色谱条件分别进样10l测定。以重楼皂苷I对照品进样量(mg)为横坐标(X)，峰面积积分值为纵坐标(Y)绘制标准曲线，见图4。回归方程y = 1.528 5×103X - 3.800 7(r=0.999 9)。结果表明：当进样量在0.079 20.792

12、 0 mg范围内时，重楼皂苷进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。2.2.5.2  精密度实验 取热毒清胶囊（040905批），按“2.2.2”项下的色谱条件，进样量10 l，连续测定5次。结果表明5次测定峰面积平均值为：453.17，RSD为0.64%（n=5）。实验表明，本法的精密度良好。2.2.5.3  稳定性实验  对同一供试品溶液（040905批），每隔一定时间测定1次，共测定5次，每次进样10 l，5次测定的蜂面积平均值为464.89，RSD为0.84%（n=5），结果供试品在8 h内测定结果无明显变化，表明供试品在8 h内，被测物稳定。2.

13、2.5.4  阴性对照实验取缺重楼的阴性对照样品，约1 g，精密称定，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液，“2.2.2”项下的色谱条件测定。结果，阴性对照品在重楼皂苷I峰位置无色谱峰出现，表明处方中其它成分对测定无干扰，结果见图5。2.2.5.5  重复性实验  对同一批样品（040905批），平行测定5份， 5份测定结果的平均值为：3.8622 mg/g，RSD =1.15%（n=10），结果表明，本法的重复性较好。2.2.5.6  加样回收率测定 取本品（批号040905，重楼皂苷I含量3.8622 mg/g）约0.5 g，取5份，精密

14、称定，置50 ml具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品溶液（含重楼皂苷10.792 mg/ml）2.5 ml，混匀，烘干（80），精密加入乙醇溶液25 ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理30 min，取出，放冷，再称定重量，用乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，取上清液，用微孔滤膜（0.45m）滤过，滤液置量瓶中作为回收率的供试品溶液，同法制备5份，各进样10 l，测定，按下式计算回收率，结果平均回收率为98.49%，RSD=1.58%（n=5），符合定量分析的要求。2.2.5.7  样品测定 按样品项下的含量测定方法，测定了本品10批样品中的重楼皂苷含量。结果见表1。表1  样品测定结果（略）本品每粒含重楼以重楼皂苷（C51H82O20）计，不得少于1.0 mg。3  结果通过上述研究提供了热毒清胶囊定性和定量的测定方法，为全面控制产品质量建立了方法。实验对超声法与回流法提取进行了比较，结果发现超声法与回流法提取的重楼皂苷量相差不大，而超声法操作简便，因此选择超声提取法。对无水乙醇和50%乙醇进行了比较，实验结果表明无水乙醇溶液提取率较50%乙醇提取率高，且杂质较