敦煌石室大宝胶囊对衰老大鼠脑组织钙稳态的影响

1、态 , 使红细胞膜血红蛋白糖基化 , 携氧能力下降 , 内皮细胞缺氧 损伤 , ET 生成增加 , NO 生成降低 , 引起微血管持久收缩 、 痉挛 , 血管平滑肌增生 , 血管狭窄 , 加速糖尿病血管并发症的发生发 展 。 因此 , ET 的升高在一定程度上反映了内皮细胞损伤的程 度 , 而内皮细胞损伤是导致糖尿病血管病变的主要原因 。 中医认为 , 糖尿病主要病机为气阴两虚 、 瘀血阻络 。益气 活血通络法方由黄芪 、 桂枝 、 元胡 、 水蛭 、 地龙 、 生地组成 。 具有 养阴益气 、 活血化瘀的功用 。 高血黏度导致低灌流状态以及内 皮功能损伤 , 从而导致循环障碍使血管并发症发生

2、 , 因此 , 改善 血液流变学对糖尿病并发症的防治 、 预后有深远的影响 6。 以往研究证实 , 活血化瘀中药能改善糖尿病大鼠血液流变学 、 降 低血小板聚集 、 改善血流 、 增加周围神经的供血和营养 、 抑制坐 骨神经的纤维脱髓鞘和轴索萎缩 、 提高传导速度 7切变率下血液表观黏度 、 降低血浆黏度 , 变性普遍趋于正常 8 。 实验结果表明 , 、 红细胞聚集及刚 性指数 、 NO 、 ET ; 益气活血通络方药能改善 血浆黏度 、 红细胞聚集及刚性指数 , 提高血清 NO 含量 、 降低血 浆 ET 含量 , 可以防治糖尿病及其并发症 。4 参考文献1 卫重娟 , 程 焱 1氧化应激

3、与糖尿病周围神经病变 J 1医学综述 ,2009; 15(16 :247828112 张文风 , 苏 鑫 , 赵书锋 1益气活血通络法防治糖尿病周围神经病变的实验研究 J 1中医药信息 , 2008; 25(6 :732413 张文风 1益气活血通络方对糖尿病大鼠血清胰岛素、 C 肽的影响 J 1湖南中医杂志 , 2008; 24(5 :982914 张文风 , 苏 鑫 , 粟 栗 1糖尿病大鼠坐骨神经 AGEs 的表达及益气活血通络方的干预研究 J 1上海中医药杂志 , 2010; 3:562815 张文风 , 朴今哲 , 苏 鑫 , 等 1J 1时珍国医国 , 2010; :2 , 糖尿病

4、血液流变1, 2002; 6(3 :167281, 李显筑 , 周亚滨 , 等 1九虫丹对糖尿病周围神经病变大鼠血液流变性的影响 J 1中医药信息 , 2004; 21(5 :322318 衡先培 , 王善慧 , 庞 明 , 等 1糖络通对糖尿病周围神经病变大鼠血液流变性的影响 J 1安徽中医学院学报 , 2002; 21(5 :42241 2010205230收稿 2010207210修回 (编辑 袁左鸣 敦煌石室大宝胶囊对衰老大鼠脑组织钙稳态的影响程 容 段永强 成映霞 梁玉杰 朱立鸣 (甘肃中医学院基础课部 , 甘肃 兰州 730020 摘 要 目的 探讨敦煌石室大宝胶囊对衰老模型大鼠脑

5、组织钙稳态的影响 。 方法 采用 D 2半 乳糖建立大鼠衰老模型 , 测定大脑组织内Na +2K +2ATPase 、 Ca 2+2ATPase 、 Ca 2+2Mg 2+2ATPase 活性和 Ca 2+含量 。 结果 模型组大鼠脑组织内 Na +2K +2ATPase 、 Ca 2+2ATPase 、 Ca 2+2Mg 2+2AT 2Pase 活性显著降低 , Ca 2+含量显著升高 (P <0101, P <0105 ; 应用敦煌石室大宝胶囊治疗后 , 治疗组大鼠脑组织内 Na +2K +2ATPase 、 Ca 2+2ATPase 、 Ca 2+2Mg 2+2ATPase

6、活性增高 , Ca 2+含量显著降低 (P <0101, P <0105 。 结论 敦煌石室大宝胶囊具有调节衰老大鼠脑组织钙稳态的作用 。 关键词 钙稳态 ; 衰老模型 ; 大鼠 ; 敦煌石室大宝胶囊 中图分类号 R28515 文献标识码 A 文章编号 100529202(2010 2323514203I nfluences of D unhuang Sh ish iDabao capsule (D HD B on ca lc i u m ho m eost a sis i n bra i n tissue of the ag i n g ra ts CHENG Rong, D U

7、AN Y ong 2Q i a ng, CHENG Y i n g 2X i a , et a l 1Gan su College of Trad iti ona l Ch i n ese M ed i c i n e, Lanzhou 730020, Gan su, Ch i n a【 Abstract 】 O bjecti ve To exp l ore the effect of Dunhuang Shishi Dabao (DHDB cap sule on calciu m homeostasis in brain tissue ofthe aging model rats 1M et

8、hods The subacute aging model rats were made by injecting D 2gal int o abdom inal cavity continually, and Na +2K +2ATPase, Ca 2+2ATPase, Ca 2+2M g 2+2ATPase and Ca 2+levels in brain tissue were evaluated 1Results The model gr oup hand the down 2regulated Na +2K +2ATPase, Ca 2+2ATPase and Ca 2+2M g 2

9、+2ATPase levels (P <0101, P <0105 , and the significantly increased Ca 2+levels(P <0105 1After treated with DHDB, Na +2K +2ATPase, Ca 2+2ATPase, Ca 2+2Mg 2+2ATPase levels were up regulated (P <0105, P <0101 , Ca 2+levels was reduced significantly (P <0105 1Conclusi on s DHDB can re

10、gulate calciu m homeostasis in aging rats brain 1【 Key words 】 Calciu m homeostasis; Aging model; Rats; Dunhuang Shishi Dabao (DHDB cap sule 基金项目 :甘肃省科技攻关计划项目 (2GS0642A432020222 ; 兰州市科技局计划项目 (0622287第一作者 :程 容 (19702 , 女 , 副教授 , 医学硕士 , 主要从事中医藏象学说和老年病的研究。 敦煌石室大宝胶囊 (Dunhuang Shishi D abao Cap sule, DHD

11、B 是由熟地 、 黄芪 、 当归 、 茯苓 、 大黄等药味经过提取 、 分离而组成 , 具有强肾填精 、 健脾益气 、 涤痰祛瘀 、 安和五脏的功效 。前 期研究表明 1, 2 DHDB 能 够降 低 衰 老 大 鼠 单 胺 氧 化 酶 B 型(MAO 2B 活性 , 提高钠钾 ATP 酶 (Na +2K +2ATPase 、 超氧化物歧化酶 (S OD 和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH 2Px 活性 , 降低丙 二醛 (MDA 含量 , 具有调节脑细胞能量代谢 、 拮抗自由基损伤 而保护脑细胞的功能 。 而衰老的钙假说认为 , 细胞内钙超载或 钙稳态失调可能是细胞损伤 、 衰老 、 死亡的最后

12、的共同途径 3 , 4153 为进一步探讨 DHDB 干预脑衰老的作用机制 , 本研究观察了该 制剂对衰老模型大鼠脑组织钙稳态失调的影响 。1 材料与方法111 动物与分组 SPF 级 W istar 大鼠 , 雌雄各半 , 3月龄 , 体重 (180±20 g, 由甘肃中医学院医学实验中心提供。 动物合格证号 :S CXK 甘 20042000620000201。 受试动物按体重编号 , 用随机 数字表法分为空白对照组、 模型组、 DHDB 大、 中、 小剂量组、 桂附地黄丸组 (为 “ 阳性对照组 ” , 每组 8只 , 雌雄各半分笼饲养。 112 造模及给药方法 亚急性衰老模型

13、造模方法 4:空白对照组每日皮下注射等量生理盐水外 , 其余各组受试动物颈部皮 下注射 D 2半 乳糖 (01125g/kg , 每日 1次 , 连续 40d 。空白对 照组 、 衰老虚证模型组给予同体积蒸馏水灌胃 ; 大 、 小剂量组分别予 018, 014和 0116g -1胃 , (10倍 、 5倍和 2倍 ; 1g kg-1 d -1桂附地黄丸药剂灌胃 (5倍 。 各组均以蒸馏水 、 标 准饲料喂养 。 连续灌胃 40d 。113 试剂与仪器 DHDB (甘肃中医学院附属医院内制剂 , 批号 040925, 市售 ; 桂附地黄丸 (阳性对照组 , 兰州佛慈制药厂 生产 , 批号 200

14、40925, 市售 ; Na +2K +2ATPase 试剂盒 (批号 :20071113 ; Ca2+2Mg 2+2ATPase, 试剂盒 (批号 :20071113 ; Ca 2+2ATPase, 试 剂 盒 (批 号 :20071113 ; Ca 2+测 试 盒 (批 号 :20071113 , 以上测试盒均购自南京建成生物工程研究所 。 722型分光光度计 (规格型号 :UV 29100, 北京瑞利分析仪器公司 ; 快速混匀器 (规格型号 :XK962A ; 数显恒温水浴锅 (规格型 号 :HH 24, 郑州杜甫仪器厂 。114 标本采集 各组动物最后 1次灌胃 , 禁食不禁水 24h

15、, 采血后断头处死 , 低温条件下快速取脑 , 以冰冷的生理盐水冲洗 , 滤纸吸干 , 称 重 后 置 于 匀 浆 器 中 用 9倍 生 理 盐 水 匀 浆 , 以3500r/min 离心 10m in, 取上清液置 4 冰箱保存 , 待测 。 115 统计学方法 采用 SPSS1310软件统计 , 数据以 ±s 表示 , 多组间比较用单因素方差分析 , 组间两两比较用 LS D 分析 , 方差不齐时用 Dunnett 方法分析 。2 结 果211 DHDB 对各组大鼠脑组织 Na +2K +2ATPase 、 Ca2+2M g 2+2ATPase 活性的影响 与空白对照组比较 ,

16、模型组大鼠脑组织 Na +2K +2ATPase 、 Ca2+2M g 2+2ATPase 显著降低 (P <0101 ; 与模型组比较 , DHDB 各组大鼠脑组织 Na +2K +2ATPase 、 Ca 2+2Mg2+2ATPase 显著升高 , 且以 DHDB 大剂量组作用为优 , 组间比较差异具有统计学意义 (P <0101 。 阳性对照组与模型组也 有显著差异 (P <0105, P <0101 , 见表 1。2 12 DHDB 对各组大鼠脑组织 Ca2+2ATPase 活性和 Ca 2+浓度的影响 与空白对照组比较 , 模型组大鼠脑组织 Ca 2+2ATP

17、ase 显著降低 , Ca 2+浓度计数水平显著升高 (P <0105 ; 与模型组比 较 , 大剂量 DHDB 组大鼠脑组织 Ca 2+2ATPase 计数水平显著升 高 , Ca 2+浓度显著降低 (P <0105 。 见表 2。表 1 D HD B 对各组大鼠脑组织 Na +2K +2ATPa se 、Ca2+2M g 2+2ATPa se 活性的影响 (n =8, ±s , U /mg组别 剂量 (g/kgNa +2K +2ATPase Ca 2+2Mg 2+2ATPase空白对照组 -16163±31719191±3112模型组-10194&

18、#177;31281 5133±11271 DHDB 大剂量组 018016115±410339116±21963DHDB 中剂量组 014015100±51099136±21113 DHDB 小剂量组 011613126±317176±3137阳性对照组 01401512119148±31273 :P 01; :2 P <0105, 3 P <表 2 D HD B 对各组大鼠脑组织 Ca 2+2ATPa se活性和 Ca 2+浓度的影响 (n =8, ±s 组别 剂量 (g/kgCa 2+2

19、ATPase ( Ca 2+( 空白对照组 -7135±11570112±0103模型组-5179±114810119±01091DHDB 大剂量组 01807131±11432 0113±01052 DHDB 中剂量组 01406118±11290115±0107DHDB 小剂量组01167113±11740116±0105阳性对照组01407121±11300114±0106 与空白对照组比较 :1 P <0105; 与模型组比较 :2 P <01053 讨

20、论 同时衰老的钙假说认为 , 细胞内钙超载可能是细胞损伤 、 衰老 、 死亡的最后的共同途径 。文献结果显示 3 , 机体正常代 谢过程中 , 细胞外 Ca 2+浓度是细胞内 Ca 2+浓度的 2万倍 , 细胞 内低钙 , 细胞外高钙 , 即钙稳态是维持细胞正常生命活动的基 础 , 钙稳态通常靠以下诸方面来维持 。 细胞膜对 Ca 2+极低的 通透性 。 钙泵即 Ca 2+2ATPase:分解 1个 ATP 分子可将 12个 Ca 2+跨膜转移到细胞外 , 同时以 1 2比例将 H +转移至胞内 。 Na +2Ca 2+交换系统 :主要存在于神经细胞和肌细胞 , 利用细胞内外 Na +浓度梯度

21、将 Ca 2+转移至细胞外 , 而 Na +浓度梯度是靠 Na +2K +2ATPase 维持的 。研究表明 6随着年龄的增长 ,体内多种酶活性下降 , 细胞内 Ca 2+浓度升高 , 引起 Ca 2+超载 , 导致钙稳态失调 , 最终使细胞死亡 , 其主要机制为衰老过程中 机体抗氧化能力减弱 , 导致自由基大量堆积 , 一方面损伤生物膜 , 使膜对 Ca 2+通透性增大 , 一方面 Na +2K +2ATPase 、 Ca 2+2AT 2Pase 、 Ca2+2Mg 2+2ATPase 活性降低 , 细胞外排 Ca 2+的能力减弱 ,最终导致脑神经细胞损伤 , 表现学习记忆障碍 , 形成衰老

22、样的 行为学和生化学方面的改变 。 现代药理学证明熟地黄 、 黄芪 、 当归等药物有效成分均对 神经系统功能具有调节作用 79 。本实验结果证实衰老过程 中 , 由于维持钙稳态的调节机制被破坏 , 导致细胞内 Ca 2+浓度 升高 , 钙稳态失调 。 而 DHDB 可显著提高衰老模型大鼠脑组织Ca2+2ATPase 、 Na +2K +2ATPase 、 Ca 2+2Mg 2+2ATPase 的活性 , 降低脑组织中 Ca 2+的浓度 , 从而改善 D 2半 乳糖引起的氧化应激损5153伤 , 并减低脑神经细胞内 Ca 2+含量 , 阻止 D 2半 乳糖引起氧化应激 2Ca 2+超载 2氧 化

23、应激的恶性循环 , 起到了维持衰老大鼠脑组织钙稳态的作用 , 保护脑细胞结构和功能的完整性 , 由此揭示 调节钙稳态是 DHDB 干预脑衰老的作用机制之一 。4 参考文献1 段永强 , 程 容 , 成映霞 , 等 1敦煌石室大宝胶囊对衰老大鼠血清 MDA 含量 、 S OD 和脑组织 GSH 2Px 活性的影响 J 1兰州大学学报 (医学版 , 2005; 31(2 :2022212 段永强 , 成映霞 1敦煌石室大宝胶囊对衰老大鼠脑组织 MAO 2B 、 Na +2K +2ATP 酶活性的影响 J 1甘肃中医学院学报 , 2005; 22(3 :262913 王建光 , 杨新宇 , 叶 辉

24、, 等 1姜枣合用对 D 2半 影响的实验研究 J 1黑龙江医药科学 , 2005; 28(2 :344 徐 智 , 吴国明 , 钱桂生 , 等 1 1医大学学报 , 2003; 25(4 :3122515 陈 奇 1中药药理研究方法学 M 1北京 :人民卫生出版社 , 1993:332416 王建光 , 杨新宇 , 叶 辉 , 等 1山楂对 D 2半 乳糖致衰小鼠抗氧化系统及钙稳态影响的实验研究 J 1中国老年学杂志 , 2003; 23(9 :60921017 蔡 晶 1地黄的药理作用实验研究进展 J 1国际中医中药杂志 ,2007; 29(3 :1642518 吴发宝 , 陈希元 1黄芪

25、药理作用研究综述 J 1中药材 , 2004; 27(3 :2322419 钟小明 , , 余 鸿 1J 1四川解剖, (1 607227收稿 2010205224修回 (编辑 袁左鸣 沉默 G RP78SK OV3细胞侵袭力的抑制作用范丽梅 魏 敏 杨淑丽 崔松花 崔满华 张丽波 1 (吉林大学第二医院妇产科 , 吉林 长春 130041 摘 要 目的 探讨 RNA 干涉技术 (RNA i 沉默葡萄糖调节蛋白 78(GRP78 基因对人卵巢癌 SK OV3细胞侵袭力的影响 , 阐明 GRP78基因 沉默对 SK OV3细胞侵袭力抑制作用的生物学机制 。 方法 设计并构建 pSilencer

26、T M 3102H12GRP78si RNA 重组质粒 , 脂质体介导转染至 SK OV3细胞。RT 2PCR 和 W estern 印迹法检测 GRP78基因表达 ; RT 2PCR 检测 MMP 22、 MMP 29mRNA 表达 ; Trans well 小室侵袭实验检测细胞侵袭力 ; Trans well 小室迁移实验检测细胞迁移率。 结果 RT 2PCR 及 W estern 印迹检测转染 GRP78si RNA 重组质粒 SK OV3细胞 GRP78基因表达抑制 ; RT 2PCR 结果显示与对 照组相比转染 GRP78si RNA 重组质粒 SK OV3细胞 MMP 22、 MM

27、P 29mRNA 表达降低 ; Trans well 小室侵袭实验和迁移实验结果显示转染 GRP78si RNA 重组质粒 SK OV3细胞穿透细胞数 (P <0105 和迁移率均明显降低 (P <0105 。 结论 转染 GRP78si RNA 重组质粒有效抑制 SK OV3细胞 GRP78基因表达 ; 抑制 GRP78基因表达能降低 SK OV3细胞的侵袭力和迁移力 , 有望为抑制卵巢癌转移基因治疗提供新的靶点。 关键词 葡萄糖调节蛋白 78; 人卵巢癌 SK OV3细胞 ; RNA 干扰 ; 侵袭 中图分类号 R363 文献标识码 A 文章编号 100529202(2010

28、2323516204基金项目 :吉林省科技发展计划项目 (20070526271 通榆县生殖保健院电诊科通讯作者 :崔松花 (19652 , 女 , 副主任医师 , 主要从事妇科肿瘤和相关疾病的研究 。第一作者 :范丽梅 (19712 , 女 , 博士 , 副主任医师 , 主要从事妇科肿瘤和相关疾病的研究 。 卵巢癌具有早期容易发生腹腔广泛转移和播散的特性 , 故 侵袭和转移是影响预后的最主要因素之一 1 。葡萄糖调节蛋 白 78(GRP78 在蛋白质的折叠和转运中有重要作用 , 是促进正 常状态下细胞蛋白质成熟 、 维系细胞机能和生命的重要调节物 质 2。 已有研究证明 GRP78在转移瘤高表达 , 且 GRP78表达水平与淋巴结转移程度密切相关 , 说明 GRP78在肿瘤的侵袭