抗菌药的体外抑菌作用及影响抗菌

1、抗菌药的体外抑菌作用及影响抗菌药作用的因素相关概念 抗菌药：是指在低微浓度下，即可特异性地抑制或杀灭某些微生物生命活动的微生物的次级代谢产物、半合成化学衍生物或全合成化合物。 抗生素微生物检定法：利用抗生素具有在低微浓度下能选择性地抑制或杀灭微生物机能的特点，以抗生素的抗菌活性为指标，衡量抗生素中有效成分效力的一种检测方法。抗生素微生物检定法的方法（管碟法被列为抗生素微生物检定的国际通用方法） 垂直扩散法 点滴法扩散法 根据总量 平面扩散法 纸片法 杯碟法 根据浓度 管碟法管碟法 是利用抗生素在固体培养基中的平面扩散作用，采用量反应平行线的设计原理，在相同试验条件下比较标准品与供试品两者对所接

2、种的试验菌产生的抑菌圈直径或面积的大小，来测定供试品的效价（含量）的一种方法。管碟法原理 在摊布试验菌的琼脂培养基平板上，安置不锈钢小管，当小管内加入抗生素溶液后，在适宜的温度下培养，琼脂培养基中便产生两种互动作用：一种是抗生素溶液向培养基内呈球面扩散作用，形成含有一定浓度抗生素球形区；另一种为试验菌的生长作用。抗生素在琼脂培养基的浓度，随离开小管的距离增大而降低，即离开小管越远，琼脂培养基中抗生素浓度越低。当抗生素扩散到一定时间，琼脂培 当抗生素扩散到一定时间，琼脂培养基中的两种互动作用达到动态平衡时，琼脂培养基中便形成透明的抑菌圈。即：在抑菌圈中因抗生素浓度高于抑菌浓度，试验菌生长受到抑制

3、，此处琼脂培养基成透明状；在抑菌边缘抗生素浓度恰好等于抗生素最低抑菌浓度。抗生素在琼脂培养基内扩散现象，可用两位微生物学者Hamphrey和Light Bown 推导出的管碟法球面扩散动力学公式表示：r=4D*tm-(4 D* t*H 式中 D抗生素扩散系数(mm/h) t抗生素扩散时间（h，细菌刚生长到 显示抑菌所需的时间） m小管中抗生素的总量（u或ug) m=co*A*L(co是小管中抗生素浓度，A是小管底面积，L是小管高度） H培养基的厚度（mm） 最低抑菌浓度（最低抑菌浓度（ug/mLug/mL） r r抑菌圈半径（抑菌圈半径（mmmm）上式经公式简化得到：Lgm=(1/9.21D*

4、t)r2+lg(*4*D*t*H)此公式相当于直线方程：Y=bXc式中 Ylgm（纵坐标） Xr2（横坐标） b1/9.21D*t(直线斜率） clg（*4*D*t*H)(截距） 由球面扩散动力学公式可知：抗生素总量对数lgm与所形成抑菌圈半径的平方（r2）呈直线关系，因此可由抑菌圈的大小来测定抗生素抗菌活性物质的量，这即为抗生素微生物检定的理论依据。 在测定抗生素效价时，为消除各种干扰因素的影响，采用标准品与供试品在相同试验条件下进行比较，应用量反应平行线原理，测得相对效价的比率。因标准品的效价是已知的，就可计算出供试品的效价。影响抑菌圈的大小的因素 1.抗生素量的多少。 2.抗生素最低抑菌

5、浓度c。 3.琼脂层厚度H。 4.抗生素在琼脂培养基内的扩散系数D。 5.细菌生长到显示抑菌圈的时间t。 影响抑菌圈质量的因素抑菌圈形状1.滴加抗生素溶液时药液溅出。2.毛细管碰到钢管使抑菌圈出现破裂不圆。3.菌层培养基厚薄不均。4.双碟、钢管放置器内有残留抗生素污染。5.抗生素溶液用的缓冲液 这pH过低（7.37.5）等。抑菌圈的边缘清晰度1.试验菌菌种放置时间过长。2.细菌的菌龄不一或部分变异。3.芽孢菌液中有部分细菌体对抗生素的敏感度不同。4.抗生素中有其它组分或杂质。制备方法 1. 双碟的制备： 肉琼脂培养基底层：将肉琼脂溶化，取20ml倒入灭菌平皿内，置水平台上使之凝固。 肉琼脂培养基菌层：吸取大肠杆菌和金黄色葡萄球菌液0.11ml分别与100ml冷却至45（注意：温度不能过高） 的肉琼脂培养基混匀，均匀摊在底层培养基上。2. 待培养基凝固后，在每碟中均匀立放小钢管（即牛津杯，内径6.0 0.1mm，高10.