抑菌论文毕业答辩

1、香薰中药消毒剂的抑菌活性研究 学号 ： 1003511113 班级：2011级中鉴3班 姓名：江华凤 指导老师：曾聪彦 目 录1234研究目的与意义实验材料实验方法及结果分析实验方法及结果分析结论结论一、研究目的及意义消毒剂广泛运用于医院、学校、公共交通、食品药品工业等场所, 对预防疾病传播、维护人民公共卫生事业健康发展起着相当大的作用。本课题研究的香薰中药消毒剂是针对医院病房而研发的一种新的中药消毒剂。在医院,消毒剂的使用需求相对较大并在防止医院感染发挥着至关重要的作用。现在病房消毒常用紫外线和过氧乙酸等化学消毒剂进行消毒，虽均有很好的消毒效果，但使用存在不便，消毒时均需要人员离开病房。并且

2、紫外线对人眼角膜、皮肤有损伤，过氧乙酸消毒后有较强的刺激味残留。理想的消毒剂应具备杀菌谱广、杀菌能力强、作用速度快、稳定性好、 无毒、无残留、无腐蚀、无刺激，易溶于水、对人和动物安全、对环境无污染等特点。 一、研究目的及意义1、目前中药消毒剂复方组成主要以清热、除湿、祛风为法则。故以芳香化湿、清热解毒两类为主。达到消毒灭菌效果，又有清新空气之效。2、为了解决在有人环境进行空气消毒问题，本课题采用气味芳香类和清热解毒类中药搭配组方，制成喷雾消毒剂。3、通过K-B纸片扩散法和平板涂布稀释法 对医院病房常见细菌的抑菌性能进行初步研究，以及对病房喷雾消毒，观察对医院病房消毒效果。4、为香薰中药消毒剂在

3、医院等公共场合的应用和推广提供了一定的理论依据。二、研究内容1、摸索香薰中药消毒剂的制备方法，确保使用过程达到安全、摸索香薰中药消毒剂的制备方法，确保使用过程达到安全、高效的程度。高效的程度。2、抑菌部分、抑菌部分（金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌大肠埃希菌、粪肠球菌、绿脓假单胞菌、肺炎球菌、肺炎克雷伯菌）粪肠球菌、绿脓假单胞菌、肺炎球菌、肺炎克雷伯菌） 通过通过K-B纸片扩散法纸片扩散法初步研究抑菌作用，初步研究抑菌作用， 平板涂布平板涂布稀释稀释法法定量研究最低抑菌浓度（定量研究最低抑菌浓度（MIC）。）。3、参考卫生部、参考卫生部消毒技术规范消毒技术规范，采用采用自然沉降法自然沉

4、降法观察香薰观察香薰中药消毒液对病房消毒效果中药消毒液对病房消毒效果1、香薰中药消毒剂的制备 组方：苍术、艾叶、桂枝、薰衣草组方：苍术、艾叶、桂枝、薰衣草 制备方法：制备方法： 组方比例组方比例1 1：1 1：1 1：1 1 ，各药味均打成细粉，混匀后加入，各药味均打成细粉，混匀后加入圆底烧瓶，按圆底烧瓶，按固液比固液比1:61:6蒸馏水，蒸馏水，冷水浸泡冷水浸泡2h2h，装入挥发，装入挥发油提取装置，油提取装置，提取挥发油，提取挥发油，提取至没有挥发油滴出，约提取至没有挥发油滴出，约6h6h。挥发油用挥发油用EPEP管收集，密封保存，收集挥发油。取适量管收集，密封保存，收集挥发油。取适量吐温

5、吐温-80-80，逐渐加入挥发油，边加入边朝一个方向搅匀乳化，逐渐加入挥发油，边加入边朝一个方向搅匀乳化，直至全部加完挥发油。搅均之后逐渐加入适量直至全部加完挥发油。搅均之后逐渐加入适量蒸馏水蒸馏水，边，边加边搅匀，呈均匀的乳化液，未见表面有油层。制成中药加边搅匀，呈均匀的乳化液，未见表面有油层。制成中药香薰消毒液，属香薰消毒液，属水包油型乳化剂（水包油型乳化剂（O/WO/W）。1、香薰中药消毒剂的制备1.组方（苍术、艾叶、桂枝、薰衣草、板蓝根、牛蒡子） 原设计方案双提法所得为部分挥发油及药物混合物，喷雾过程中，大颗粒粒子残存难以挥出，液滴的形式喷出，效果更为理想药液颜色较深可能对病房存在污染

6、，黑色药滴易沉积沾在病床上，难清洗。板蓝根、牛蒡子含挥发油极少，其抗病毒、抑菌作用多为内服，而本实验为香熏所以精简处方，保留另四味含挥发油较多的药物，并以混合提取挥发油的形式1、香薰中药消毒剂的制备2.2.雾化方法雾化方法：（电热香薰灯和超声喷雾仪）电热香薰灯和超声喷雾仪） 电热香薰灯加热较慢，最后有部分油斑残存。电热香薰灯加热较慢，最后有部分油斑残存。 超声喷雾仪超声喷雾仪雾化形式较好，香味更浓。雾化形式较好，香味更浓。3.3.乳化方法乳化方法：由取吐温：由取吐温-80-80加热溶解于蒸馏水中制成加热溶解于蒸馏水中制成0.5%0.5%吐温吐温-80-80再加入挥发油搅匀，改变为取再加入挥发油

7、搅匀，改变为取吐温吐温-80-80逐渐加入挥逐渐加入挥发油，边加入边朝一个方向搅匀乳化，直至全部加完挥发发油，边加入边朝一个方向搅匀乳化，直至全部加完挥发油。搅均之后逐渐加入油。搅均之后逐渐加入蒸馏水蒸馏水，边加边搅匀，呈均匀的乳，边加边搅匀，呈均匀的乳化液，未见表面有油层化液，未见表面有油层2、抑菌活性试验(K-B纸片扩散法)香薰消毒液液制香薰消毒液液制备备指示菌菌悬液制指示菌菌悬液制备备药敏纸片接种与药敏纸片接种与培养培养结果数据与记录水蒸气蒸馏法收集挥发油，水蒸气蒸馏法收集挥发油，1%1%吐温吐温-80-80无菌无菌液稀释，配成液稀释，配成100%100%、75%75%、50%50%、2

8、5%25%浓度香浓度香薰消毒液薰消毒液活化后，无菌条件下分别挑取一环放入装有活化后，无菌条件下分别挑取一环放入装有无菌水的离心管中，浊度仪校正浓度至无菌水的离心管中，浊度仪校正浓度至0 0.5.5麦氏标准液麦氏标准液，1.51.5108108细菌数细菌数/ml/ml先于平板涂布菌液，不同浓度香薰消毒液先于平板涂布菌液，不同浓度香薰消毒液均匀均匀涂布涂布于无菌空白药敏纸片，于无菌空白药敏纸片，1%的吐温的吐温80水溶液的滤纸片为水溶液的滤纸片为空白对照空白对照。相应位置。相应位置贴好后，恒温培养箱中培养贴好后，恒温培养箱中培养游标卡尺测量抑菌圈直径游标卡尺测量抑菌圈直径 (包括贴片包括贴片)结果

9、取结果取平均值平均值 sd，计算抑菌率（计算抑菌率（%）2、抑菌活性试验、抑菌活性试验实验结果如大肠杆菌2.香薰100% 3.香薰75% 4.香薰50% 5.香薰25% 6.空白图1 图2 图32、抑菌活性试验结果数据分析香薰中药消毒液对金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌有较好的抑制作用，尤其对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌最为敏感，25%的浓度下抑制率仍达100%以上。对粪肠球菌和肺炎链球菌没有抑制作用。3、最低抑菌浓度(MIC)的测定（平板涂布稀释法）1 、供试液的制备 水蒸气蒸馏法收集挥发油，用1%的吐温80水溶液作稀释剂制成不同体积比(150.00、100.00、60.00

10、、40.00、20.00、10.00、5.00、2.50、1.20 mL/L)的香薰液稀释液。各浓度配制3.5ml。 2、菌悬液的配置3、菌悬液接种与培养 菌悬液+各浓度稀释液 混合液，于平板培养基用涂布环涂布均匀以稀释剂1%的吐温80水溶液作对照，恒温培养箱中培养4、 结果判读与记录 接种点内有1个以上菌落或呈菌苔状为生长；接种点内无任何菌落或呈薄雾印迹为无生长。记录（+）表示生长，（-）表示无生长。以不生长菌体的挥发油的最低浓度为挥发油的最低抑菌浓度(MIC)。3、最低抑菌浓度(MIC)的测定 实验结果如大肠杆菌图1 空白 图2 图3 图4 MIC 3、最低抑菌浓度(MIC)的测定 结果数

11、据分析随着挥发油浓度的增加，其抑菌活性也逐渐增强。香薰中药消毒剂对四种供试菌的抑制能力最强的是金黄色葡萄球菌，抑制能力最弱的是绿脓假单胞菌，其总的抑菌活性顺序：金黄色葡萄球菌大肠杆菌肺炎克雷伯菌绿脓假单胞菌。它们的最低抑制浓度金黄色葡萄球菌为2.50ml/L、大肠杆菌5.00ml/L、绿脓假单胞菌为40 ml/L、肺炎克雷伯菌为20ml/L。4、病房消毒试验香薰中药消毒剂的制备 水蒸气蒸馏法EP管收集挥发油，取吐温-80放入研钵中，边加挥发油边匀速研匀乳化，直至全部加完挥发油。搅均之后逐渐加入蒸馏水，边加边搅匀，呈均匀的乳化液，制成1g/ml香薰消毒液。消毒室选择和分组 综合科病房 （类) 1

12、g/ml香薰消毒液组和3%过氧化氢组（对照组），各10间4、病房消毒试验检测方法 采用平板空气暴露法，消毒前30 min 及消毒后1h 和通风后1h 分别取样,在每间病房以对角线的中点和两端各距内墙1 处取一点（共5点），各放置1个灭菌琼脂培养基平皿,距地面lm高度,开盖后暴露在空气中30min,每个时间段各采集到空气标本5个平皿，收集于37电恒温培养箱培养48。然后后进行菌落记数，算出平均菌落数，并计算出杀菌率。判断标准 参考卫生部消毒技术规范（2012），空气细菌菌落总数I类区域10 cfu/m3；II类区域200 cfu/m3；III类区域500 cfu/m3。数据处理 统计学处理采用SPSS 19.0统计软件进行分析,对消毒前后空气中细菌总数的差异进行重复测量方差分析,P 0.05为有统计学意义。4、病房消毒试验 实验结果与分析实验结果显示香薰中药消毒液与