化妆品中甲氧基肉桂酸乙基己酯等16种紫外线吸收剂及二苯酮的检测

1、附件 3：化妆品中甲氧基肉桂酸乙基己酯等16 种紫外线吸收剂及二苯酮的检测方法（征求意见稿）1 适用范围本方法规定了化妆品中甲氧基肉桂酸乙基己酯等16种紫外线吸收剂及二苯酮测定的高效液相色谱法。本方法适用于膏霜类、乳液类、水剂类、唇膏等蜡基类、指甲油类、粉类等化妆品中甲氧基肉桂酸乙基己酯等16种紫外线吸收剂及二苯酮的含量测定。本方法的检出限、 定量下限及取 0.1g样品时的最低检出浓度、 最低定量浓度见表 1（PBSA和PABA 按稀释倍数折算的被测样液总体积为100mL，其它 15种目标物按稀释倍数折算的被测样液总体积为10mL）。表 1 方法的检出限、定量下限、最低检出浓度和最低定量浓度序

2、号防晒剂名称检出限定量下限检出限定量限（ g/mL ）（g/mL ）g/kgg/kg1苯基苯并咪唑磺酸 (PBSA)0.100.300.100.302对氨基苯甲酸 (PABA)0.200.600.200.603二苯酮 -4 和二苯酮 -5(Bp4/Bp5)0.0300.100.0300.104二苯酮0.0300.100.0300.105二苯酮 -3 (Bp3)0.0300.100.0300.106p-甲氧基肉桂酸异戊酯 (IAMC)0.0300.100.0300.1074-甲基苄亚基樟脑 (4MBC)0.0300.100.0300.108奥克利林 (OC)0.0300.100.0300.109

3、二乙氨基羟苯甲酰基苯甲酸己酯0.100.300.100.30(DHHB)0.0300.100.0300.1010甲氧基肉桂酸乙基己酯 (EHMC)11PABA 乙基己酯 (OD-PABA)0.0300.100.0300.1012水杨酸乙基己酯 (EHS)0.0300.100.0300.1013胡莫柳酯 (HMS)0.100.300.100.3014丁基甲氧基二苯酰基甲烷 (BMDBM)0.0300.100.0300.1015乙基己基三嗪酮 (EHT)0.0300.100.0300.1016亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚0.0300.100.0300.10(MBBT)17双-乙基己氧苯酚甲氧苯

4、基三嗪 (BEMT)0.0300.100.0300.102 方法提要1样品经过提取后，用高效液相色谱法测定。以目标物的色谱保留时间和紫外光谱图与标准物质一致进行定性，以色谱峰的峰面积用标准曲线外标法进行定量计算。必要时，采用高效液相色谱 -质谱方法（ HPLC-MS/MS ）进行确证。3. 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为一级实验用水。3.1 标准物质英文名称、 CAS号、分子式、分子结构式、分子量、纯度见附录A 。3.2甲醇：色谱纯。3.3甲酸：色谱纯。3.4异丙醇：色谱纯。3.5 标准储备溶液： 分别准确称取各标准物质 100 mg（以上质量均精确至 0.1 mg）于棕色容

5、量瓶中，苯基苯并咪唑磺酸用 1%氨水氨化甲醇溶解后定容至 10 mL，其他均用四氢呋喃溶解后定容至 10 mL，配置成浓度为 10 mg/mL的标准储备液于冷藏条件下保存，保存期限为 6个月。3.6 标准溶液的配置：准确移取标准储备液各100 L，用甲醇定容至 10 mL，配置成 100 g/mL的混合标准溶液，再用甲醇逐级稀释配置 50 g/mL，20 g/mL，10 g/mL， 5 g/mL，1 g/mL的系列混合标准溶液，用于高效液相色谱法的标准曲线的绘制。系列标准溶液于冷藏条件下的保存期限为 1个月。4 仪器和设备4.1 高效液相色谱仪二极管阵列检测器4.2 高效液相色谱串联四级杆质谱

6、仪配置 ESI 离子源（确证时使用）4.3 分析天平：感量0.0001 g4.4 分析天平：感量0.00001g。4.5 漩涡混合器。4.6 超声波清洗仪。4.7 离心机。4.8 移液枪或移液器5. 分析步骤5.1 样品预处理2称取约 0.1 g化妆品样品（精确至 1 mg）于 15 mL 具塞刻度试管中，首先向试管中加入 6 mL四氢呋喃（含 0.1%氨水），涡旋或超声使样品完全分散。若不能分散一般适当超声可解决问题，对超声 15 min仍无法分散的样品（例如唇膏样品），需用 60 水浴，振荡加热约 12分钟即可溶解分散。继续向试管中加入甲醇 /水（ 3:1）（含 0.1%氨水）定容至 10

7、 mL ，涡旋混合。于 5000 转/分离心 5 10 min ，取清液，聚丙烯微孔滤膜过滤，待用。涉及对氨基苯甲酸、苯基苯并咪唑磺酸的检测，需取上述待用清液 100 L用甲醇稀释至 1 mL，用聚丙烯微孔滤膜过滤后，方可上机测试。其他目标化合物的检测视情况可适当稀释后上机测试，也可无需稀释，将上述待用清液直接上机测试。5.2测定液相色谱分析参考条件色谱条件一：色谱柱： PFP(五氟苯基 )色谱柱， 4.6mm× 250 mm（I.D. ）， 5 m。柱温： 35流动相： A水溶液（含 0.1%甲酸）， B 异丙醇 :甲醇 =1:4（v/v, 含0.1%甲酸）。流速： 1.2 mL/

8、min 。检测波长： 311 nm和280 nm。进样量： 10 L。表 2 液相色谱分离条件时间， minA ， %B， %06832268322.130705158515109015.1010025010025.16832306832色谱条件二：（仅水杨酸乙基己酯与胡莫柳酯同时存在时使用）色谱柱： C18， 4.6mm×250 mm（I.D.）， 5 m。柱温： 35流动相： A水溶液（含 0.1%甲酸）， B 乙腈（含 0.1%甲酸）。流速： 1.5 mL/min 。检测波长： 311 nm。进样量： 10 L。梯度洗脱： 020min，线性改变 B相比例，从 75%增加至 1

9、00%。校准曲线的制备移取 10 L系列标准溶液（ 3.6）进行高效液相色谱分析。一般情况下，按照色谱条件一（）进行高效液相色谱分析，以系列标准溶液质量浓度为横坐标，峰面积3为纵坐标，制作校准曲线。对水杨酸乙基己酯和胡莫柳酯同时使用的情况，需按照色谱条件二（）进行高效液相色谱分析。样品测定将在相同的液相色谱条件下获得的样品溶液的液相色谱分离谱图与标准物质的液相色谱分离谱图进行比较，若样品谱图中存在保留时间与某标准物质的保留时间一致的色谱峰，并且其扣除背景后的紫外吸收图谱与该标准物质的紫外吸收图谱一致，则可确认样品中存在该物质。确证后，样品溶液中目标物的含量，用标准曲线外标法确定。若待测溶液中目

10、标物的质量浓度超过校准曲线线性范围的上限，须对待测液进行适当稀释后重新测定。化妆品样品中目标物的含量则按“7”项下计算公式计算。6 平行实验按以上步骤操作，对同一样品独立进行测定，获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算数平均值的10%。7 结果计算W (目标物含量， mg/g )DV10- 3m式中： 从标准曲线中计算出的样品溶液中目标物的质量浓度， g/mL； V 样品定容积， mL ；m 称取样品的质量， g。D 稀释倍数（不稀释则取1）计算结果保留三位有效数字。8. 回收率和精密度加标水平在 1.020 mg/g 范围内，乙基己基三嗪酮和双乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪的回收率在 8090

11、%之间，RSD小于 10%（n=6）。其他 15种目标物的回收率在 90105%之间， RSD小于 10 %（n=6）。9. 色谱图4吸收波长 311nm25015200）1506U17Am10 11（1005度238光5012131617吸49014-50051015202530保留时间（min ）吸收波长 280nm15021205）9016 7UA341015m60（813度11光图 1309141617标准物吸12质0液相色谱分离谱图-30对应峰051015202530号： 1、苯保留时间（ min）基苯并咪唑磺酸(PBSA) ；2、对氨基苯甲酸 (PABA) ；3、二苯酮 -4和二苯

12、酮 -5(Bp4/Bp5) ；4、二苯酮；5、二苯酮 -3(Bp3) ；6、p- 甲氧基肉桂酸异戊酯(IAMC) ；7、4-甲基苄亚基樟脑 (4MBC) ； 8、奥克利林 (OC)； 9、二乙氨基羟苯甲酰基苯甲酸己酯(DHHB) ；10、甲氧基肉桂酸乙基己酯 (EHMC) ； 11、 PABA 乙基己酯 (OD-PABA) ； 12、水杨酸乙基己酯(EHS) ； 13、胡莫柳酯 (HMS) ；14、丁基甲氧基二苯酰基甲烷 （ BMDBM ）；15、乙基己基三嗪酮 (EHT) ；16、亚甲基双 - 苯并三唑基四甲基丁基酚(MBBT) ；17、双 -乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪(BEMT)吸收波长31

13、1nm12）UAm（度光吸2图2 水杨酸051015205乙基己酯和胡莫柳酯液相色谱分离谱图对应峰号： 1、水杨酸乙基己酯(EHS) ；2、胡莫柳酯 (HMS) ；2、胡莫柳酯异构体10. 质谱确证10.1 液相色谱分离参考条件色谱柱： PFP(五氟苯基 )色谱柱， 4.6 mm×150 mm（ I.D.）， 3 m。流速： 0.5 mL/min进样量： 2 L。柱温： 25。流动相： A水溶液（正模式含 0.1%甲酸，负模式含 0.05%氨水），B 甲醇溶液（正模式含 0.1%甲酸，负模式含 0.05%氨水）。表 3 液相色谱分离条件ESI-ESI+时间， minA ， %B，%时

14、间， minA ， %B ， %0554502080355451312883.159513.1010065953001006.1010030.12080901003420809.1554513554510.2 质谱参考条件（参考质谱谱图见附录B）离子源；电喷雾电离源（ESI源）检测方式 :多反应监测（ MRM ）。雾化气：氮气， 35Psi。干燥气：氮气，流速 10 L/min ，温度 :350 。碰撞气 : 氮气。毛细管电压： 4000 V。其他质谱参数见表 4。表 4 17 种目标物的质谱分析参考参数（碎裂电压、定性离子、定量离子及其碰撞能量）序化合物名称母离子子离子碰撞能量碎 裂扫描模式

15、号（ m/z）（m/z）电 压1对氨基苯甲酸138.0120.01290ESI+94.2102苯基苯并咪唑磺酸272.8193.022160ESI-80.0563二苯酮 -4 和二苯酮 -5306.8211.034150ESI-80.0484二苯酮183.0105.010100ESI+77.0305二苯酮 -3229.0151.014100ESI+104.9176p-甲氧基肉桂酸异戊酯249.0161.01090ESI+179.1474- 甲基苄亚基樟脑255.1171.015100ESI+防晒剂 BL-20097.0158奥克利林362.1250.02.0100ESI+232.0159二乙氨

16、基羟苯甲酰基苯甲酸398.1149.014120ESI+己酯120.95410甲氧基肉桂酸乙基己酯291.1178.9285ESI+6161.01411PABA 乙基己酯278.1166.018110ESI+151.00312水杨酸乙基己酯249.0136.810130ESI-92.82013胡莫柳酯261.0136.910120ESI-93.02414丁基甲氧基二苯酰基甲烷311.0161.020100ESI+135.02015乙基己基三嗪酮823.5486.965200ESI+711.25016亚甲基双 -苯并三唑基四659.4336.030200ESI+甲基丁基酚264.96017双 -

17、乙基己氧苯酚甲氧苯628.4135.960200ESI+基三嗪403.9457附录A（资料性附录）标准物质英文名称、 CAS 号、分子式、分子结构式、分子量、纯度序化合物号名称1 苯基苯并咪唑磺酸(PBSA)2 对氨基苯甲酸(PABA)3 二苯酮-4和二苯酮英文名称CAS号2-Phenylbenzimidazole-27503-85-sulphonic acid and its1-7potassium, sodium, andtriethanolamine salts4-Aminobenzoic acid150-30-02-Hydroxy-4-methoxybe4065-45-nzopheno

18、ne-5-sulfonic6分子式Structure分子量H274.29NOC13H10N2O3SSNHOOO137.14CHC7H7NO2OHNHOHO308.30纯度大于95%-5(Bp4/Bp5)4 二苯酮5 二苯酮 -3(Bp3)6 p- 甲氧基肉桂酸异戊酯(IAMC)7 4-甲基苄亚基樟脑防 晒 剂BL-200(4MBC)8 奥克利林(OC)9 二乙氨基羟苯甲酰基苯甲酸己酯(DHHB)10 甲氧基肉桂酸乙基己酯(EHMC)11 PABA 乙基己 酯 (OD-PABA)12 水杨酸乙基己酯(EHS)13 胡莫柳酯(HMS)acid and its sodium saltBenzophe

19、none119-61-9Oxybenzone (INN)131-57-7Isopentyl-4-methoxycinn71617-1amate0-23-(436861-4-Methylbenzylidene)- d-l7-9camphor2-Cyano-3,3-diphenyl6197-30-acrylic acid,42-ethylhexyl esterBenzoic acid,302776-2-(4-(diethylamino)68-7-2-hydyoxybenzoyl)-,hexyl ester2-Ethylhexyl5466-77-4-methoxycinnamate34-Dimeth

20、ylamino21245-0benzoate ofethyl-22-3-hexyl2-Ethylhexyl salicylate118-60-5Homosalate118-56-9C14H12O6SC13H 10OC14H 12O3C15H20O3C18H 22OC24H27NO 2C24H31NO 4C18H26O3C17H27NO 2C15H22O3C16H22O3OOSOOH182.22OOH228.24OOO248.32O254.37ON361.48OOOH397.51H3CO ONOH3CCH3O290.40OOO277.4NOHCH 3250.338HOH 3COO262.34大于

21、95%8序化合物号名称14 丁基甲氧基二苯酰基 甲 烷（ BMDBM ）15 乙基己基三 嗪 酮(EHT)16 亚甲基双- 苯 并 三唑基四甲基丁基酚(MBBT)17 双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪(BEMT)英文名称CAS号分子式Structure分子量纯度1-(4- Tert-butylphenyl)-370356-0OO310.39-(4-methoxyphenyl)9-1propane-1,3-dioneC20H22O3OUVT-15088122-9823.079-0C48H66N 6O6Ultraviolet Absorbent103597-658.8745-1C41H50N 6O2B

22、is-ethylhexyloxyphenol187393-OCH3627.82methoxyphenyl triazine00-6C38H49N 3O5OH NN OHNH3COOCH3H3CCH39附录B（资料性附录）质谱确证参考谱图ESI(+) MRM （138.0>120.0 ）ESI(+) MRM （183.0>105.0 ）ESI(+) MRM （229.0>151.0 ）ESI(+) MRM （249.0>161.0 ）ESI(+) MRM （255.1>171.0 ）ESI(+) MRM （362.1>250.0 ）ESI(+) MRM （39

23、8.1>149.0 ）ESI(+) MRM （291.1>161.0 ）ESI(+) MRM （278.1>151.0 ）ESI(+) MRM （311.0>161.0）ESI(+) MRM （823.5>486.9 ）ESI(+) MRM （659.4>336.0 ）ESI(+) MRM （628.4>135.9 ）B.1 标准物质总离子流质谱图（正模式）和提取离子质谱图对应峰号： 1、对氨基苯甲酸 (PABA) ； 2、二苯酮； 3、二苯酮 -3(Bp3) ；4、p-甲氧基肉桂酸异戊酯(IAMC) ；5、4-甲基苄亚基樟脑(4MBC) ； 6、奥克

24、利林 (OC) ；7、二乙氨基羟苯甲酰基苯甲酸己酯(DHHB) ； 8、甲氧基肉桂酸乙基己酯 (EHMC) ； 9、PABA 乙基己酯 (OD- PABA) ； 10、丁基甲氧基二苯酰基甲烷（BMDBM ）； 11、乙基己基三嗪酮 (EHT) ；12、亚甲基双 -苯并三唑基四甲基丁基酚(MBBT) ；13、双 -乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪(BEMT)胡莫柳酯 (HMS) ；10ESI(-) TIC总离子流质谱图2314ESI(-) MRM（272.8 >193.0）ESI(-) MRM （306.8>211.0）ESI(-) MRM （249.0>136.8 ）ESI(-) M

25、RM （261.0>136.9 ）024681012B.2 标准物质总离子流质谱图(负模式 )和提取离子质谱图对应峰号： 1、苯基苯并咪唑磺酸 (PBSA) ； 2、二苯酮 -4 和二苯酮 -5(Bp4/Bp5) ； 3、水杨酸乙基己酯 (EHS)；4、胡莫柳酯 (HMS) ；11化妆品中甲氧基肉桂酸乙基己酯等16 种紫外线吸收剂及二苯酮的检测方法起草说明为加强化妆品中限用物质的监督管理， 国家食品药品监督管理局委托辽宁省食品药品监督管理局开展化妆品中二苯酮和甲氧基肉桂酸乙基己酯（两种紫外线吸收剂）的检测方法建立和验证工作。考虑到方法的适用性及对化妆品监管的实际意义，我们根据情况将检测物

26、质的目标范围扩大到 16 种紫外线吸收剂以及二苯酮， 共计 17 种目标物质。现就起草工作有关情况说明如下：1 起草的必要性作为使用频率最高的限用防晒剂之一，二苯（甲）酮类防晒剂中无论是二苯酮 -3 还是二苯酮 -4 或二苯酮 -5，都可能带入二苯甲酮，而虽然二苯甲酮本身也有很好的防晒效果，但由于其稳定性和安全性的原因不得作为原料使用，因此对化妆品中因其他二苯甲酮类原料带入的二苯甲酮的含量的检测， 也应该成为对化妆品质量控制需要关注的问题之一。化妆品卫生规范 ( 2007 )给出化学防晒剂的检测方法，涉及了 15 种化学防晒剂的定量检测，成为目前防晒化妆品质量控制的重要技术手段。但是该方法在使

27、用中存在以下两方面的不足： 液相色谱分离的流动相中使用了高含量 （超过 40%）的四氢呋喃，这样流动相体系由于对于 PEEK 材料的腐蚀性，普通的液相色谱仪需要进行改造后才能使用。高氯酸作为酸性改性剂，因其强氧化性，也会损害色谱仪及色谱柱的使用寿命。以上两方面的不足，影响了该方法的适用性，对该方法进行改进并开发新的适用性更好的检测方法对于防晒化妆品的质量控制将具有十分重要的理论和现实意义。同时考虑到液相色谱法用于复杂体系中化合物的检测，在化合物定性方面存在难以避免的不足和缺陷，为应对日益复杂的检测需求，发展质谱确证方法已显得十分必要。2、起草的原则方法起草遵循四项原则： （ 1）检测方法应具备

28、先进性与可操作性强的特点 （ 2）检测方法应尽量覆盖所有防晒类化妆品（ 3）应尽量优化样品前处理及分析测试条12件，使方法对色谱柱及色谱仪的损害降到最低，方法具有可行性。（ 4）检测方法应兼顾日常检测和方法确证的需要。3、起草过程课题承担单位于 2010 年 7 月开始开展化妆品中二苯酮和甲氧基肉桂酸乙酸己酯检测方法的建立和验证工作。经过查阅国内外相关文献资料等调研工作后，开始了实验研究，并于 2011 年 5 月份基本完成方法开发工作。2011 年 10 月 17 日，国家食品药品监督管理局食品许可司在北京召开专家论证会，与会专家肯定了方法的可行性。但要求补充与卫生规范方法的比对数据及比较其

29、它厂家色谱柱的分离效果，同时修订方法文本的编写体例。会后根据专家意见，我们补充了与卫生规范方法的比对数据， 同时增加了对瓦里安公司 PFP 色谱柱的分离效果的考察数据以及菲罗门 PFP 色谱柱 2 个批次的色谱柱的分离效果的考察数据。结果显示不同厂家相同规格的 PFP 色谱柱的在相同色谱条件下对 17 种目标物的分离能力稍有差别， 但相差不大。 菲罗门 PFP色谱柱 2 个批次的分离效果虽也有些微差别，但对 17 种目标物的分离度基本相同。同时针对有专家对原方法与卫生规范方法相比分离时间较长可能影响方法的适用性问题，我们进一步优化了色谱分离条件将色谱分离时间由原来的 55 分钟缩短为 30 分

30、钟以内，进一步增强了方法的适用性。我们还补充了水包油体系和油包水体系化妆品空白加标回收率的比对试验以及粉类基质空白加标回收率试验。实验结果显示，无论是水包油体系还是油包水体系的化妆品， 17 种目标化合物的空白加标回收率相差不大， 均满足试验要求。 粉类基质中 17 种目标化合物的加标回收情况显示，回收率满意，说明该方法同样适用于粉类基质的化妆品中目标物的检测。2012 年 11 月 16 日，国家食品药品监督管理局保健食品化妆品监管司在北京召开专家论证会，与会专家再次对提交的文本进行审定。会议对方法的补充数据给予了肯定，但同时又提出了新的修改意见。除仍需对方法文本的编写体例及文字表述的严谨性

31、进行进一步修改和规范外，主要意见有： 1.对所提供与化妆品卫生规范（2007 版）中相应检测方法的比对数据中， 部分检测结果相差较大， 需进一步验证。2.要求提供相关质谱子离子选择相关质谱图以确证所选质谱条件的科学性。3.建议方法名称由“化妆品中二苯酮及甲氧基肉桂酸乙基己酯等17 种紫外线吸收剂的测13定”修改为“化妆品中甲氧基肉桂酸已基己酯等16 种紫外线吸收剂及二苯酮的测定”。方法起草单位认真按照专家意见对文本重新进行了补充和修改。尤其是针对所提供与化妆品卫生规范 （2007 版）中相应检测方法的比对数据中，部分检测结果相差较大，做了进一步验证。证实原来按照卫生规范方法所测结果偏低的原因是

32、，样品前处理中样品未能很好的分散造成目标物未能提取充分。在保证样品分散的条件下，再次按照卫生规范方法进行试验，所测数据与本方法给出的数据一致。4 重点说明的问题（1）关于体例。本检测方法的体例主要参照化妆品卫生规范 （2007 年版）的卫生化学检验方法的体例，便于化妆品检验领域相关人员的阅读和实际操作。（2）关于检测方法的建立和验证。通过对色谱分离条件的优化研究，以及样品前处理方法的研究，建立了化妆品中的 1 化妆品中甲氧基肉桂酸已基己酯等 16 种紫外线吸收剂及二苯酮的测定方法。方法简单、实用性较强，有利于方法的推广应用。加标水平在1.020 mg/g 范围内，乙基己基三嗪酮和双乙基己氧苯酚

33、甲氧苯基三嗪的回收率在8090%之间， RSD 小于10%（ n=6），其他 15 种目标物的回收率在90105%之间， RSD 小于 10 %（n=6）。苯基苯并咪唑磺酸，二乙氨基羟苯甲酰基甲酸己酯和胡莫柳酯在5 g/mL 100 g/mL的浓度范围内线性关系良好，其他目标物在1 g/mL 100 g/mL的浓度范围内线性关系良好。线性相关系数（ r）均大于 0.99，基本满足分析检测要求。14化妆品中甲氧基肉桂酸乙基己酯等16 种紫外线吸收剂及二苯酮的检测方法编制说明1 任务来源为加强化妆品中限用物质的监督管理，国家食品药品监督管理局委托辽宁省食品药品监督管理局开展化妆品中二苯酮和甲氧基肉

34、桂酸乙基己酯的检测方法建立和验证工作。考虑到方法的适用性及对化妆品监管的实际意义，我们根据情况将检测物质的目标范围扩大到 16种紫外线吸收剂以及二苯酮，共计 17种目标物质。2 研究背景化学防晒剂局部用于皮肤， 浓度较高可能引发接触致敏和光接触致敏等不良反应。目前我国化妆品卫生规范( 2007 ) 等同采用了欧盟允许使用的防晒剂的品种及其限量的相关规定。限用的防晒剂包括甲氧基肉桂酸乙基己酯、二苯-3、二苯酮-4 和二苯酮 -5 等 26 种化学防晒剂以及二氧化钛和氧化锌 2 种物理防晒剂。鉴于物理防晒剂的相对安全性，人们更关注化学防晒剂的安全限量问题。作为使用频率最高的限用防晒剂之一，二苯（甲

35、）酮类防晒剂中无论是二苯酮-3 还是二苯酮 -4 或二苯酮 -5，都可能带入二苯甲酮，而虽然二苯甲酮本身也有很好的防晒效果，但由于其稳定性和安全性的原因不得作为原料使用， 因此对化妆品中因其他二苯甲酮类原料带入的二苯甲酮的含量的检测， 也应该成为对化妆品质量控制需要关注的问题之一。防晒化妆品中的防晒剂是作为限用原料添加的， 对防晒剂的含量检测是保证防晒化妆品的安全性的重要手段。 化妆品卫生规范 ( 2007 )给出化学防晒剂的检测方法，涉及了 15 种化学防晒剂的定量检测，成为目前防晒化妆品质量控制的重要技术手段。但是鉴于该方法存在的一些不足，影响了该方法的适用性。同时，新型防晒剂的使用，也对

36、防晒剂检测方法提出了新的要求。为此，通过优化色谱条件，开发新的色谱分离方法，以避免使用四氢呋喃和高氯酸这样高腐蚀性的溶剂，在普通液相色谱上实现多种限用防晒剂目标化合物的定量分析方法显得非常必要。3 研究现状15目前，国内外文献中对化妆品中防晒剂的检测涉及的检测方法包括：液相色谱法、薄层色谱法、气相色谱法以及气相色谱质谱联用等方法。其中高效液相色谱法的使用频率最高。文献中涉及的防晒剂的种类少则 1 种多则 10 几种不等，多为限用防晒剂的定量或定性检测，很少涉及禁用防晒剂的检测。我国的标准体系中涉及化妆品中防晒剂的检测的有QB/T 2333-1997 防晒化妆品中紫外线吸收剂定量测定高效液相色谱

37、法，标准采用了3 种液相色谱条件，覆盖了 14 种限用防晒剂和 5 种目前不允许使用（禁用）的防晒剂的检测，是目前所见文献中涉及防晒剂种类最多的检测方法。但该标准方法存在如下几点不足：标准采用等度洗脱的方法， 在标准提供的液相色谱条件下多数的化合物未能获得基线分离，给准确定量带来一定的困难。液相色谱分离的流动相中使用了高含量（超过 40%）的四氢呋喃，这样流动相体系由于对于PEEK 材料的腐蚀性，普通的液相色谱仪需要进行改造后才能使用。高氯酸作为酸性改性剂，因其强氧化性，也会损害色谱仪及色谱柱的使用寿命。化妆品卫生规范中规定的限用防晒剂的检测方法， 采用一种液相条件分离了 15 种限用防晒剂。

38、 涉及防晒剂的种类与 QB/T 2333-1997 相比，虽然总数少了 4 种，但是涉及了 4 种 QB/T 2333-1997 未涉及的限用防晒剂。将等度洗脱改进为梯度洗脱，使得色谱的分离度有了很大的改进， 在方法提供的液相色谱条件下大多数的化合物可以获得基线分离，有利于化合物的准确定量。但是仍然采用高含量的四氢呋喃为流动相，而且流动相中仍然使用高氯酸作为酸性改性剂，是该方法的不足之处。而这些不足，也影响了方法的适用性。目前，液相色谱因其适用范围宽，逐渐成为定量分析的重要手段。但是普通液相色谱仅以化合物的色谱保留时间和紫外特征吸收作为定性手段，用于化妆品中防晒剂的定量检测难免受到复杂化妆品体

39、系中其他组分的干扰，这是液相色谱法用于复杂体系中化合物的定量检测方面难以避免的不足和缺陷。而质谱作为重要的定性确证工具，已经在复杂体系的定量分析中发挥着越来越重要的作用。为维护法规的权威性，有必要进一步加强对目标化合物的定性确证手段。这就使得与质谱尤其是串联质谱联用成为必然的选择。4、项目完成情况（1）发展了化妆品中甲氧基肉桂酸乙基己酯等16 种紫外线吸收剂及二苯酮测定16的高效液相色谱法。加标水平在 1.020 mg/g 范围内，乙基己基三嗪酮和双乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪的回收率在 8090%之间， RSD 小于 10%（ n=6），其他 15 种目标物的回收率在 90105%之间， RSD

40、 小于 10 %（n=6）。苯基苯并咪唑磺酸，二乙氨基羟苯甲酰基甲酸己酯和胡莫柳酯在 5 g/mL 100 g/mL的浓度范围内线性关系良好，其他目标物在 1 g/mL 100 g/mL的浓度范围内线性关系良好。线性相关系数（ r）均大于 0.99，基本满足分析检测要求。（2）本方法负责起草单位为大连市产品质量监督检验所，参与验证单位分别是国家环境监测中心，中科院大连化学物理研究所和大连疾病预防控制中心。本方法主要起草人为毛希琴、边海涛、曲宝成。验证结果满足化妆品及其原料中禁限用物质检测方法验证技术规范 。5、方法概述5.1 仪器Agilent 公司 Agilent1260 高效液相色谱仪。超

41、声波清洗器。蜗旋混合器。离心机。5.2 试剂标准物质：苯基苯并咪唑磺酸 (PBSA)、二苯酮、二苯酮 -3(Bp3)、p-甲氧基肉桂酸异戊酯 (IAMC) 购自百灵威公司，对氨基苯甲酸 (PABA) 、4-甲基苄亚基樟脑 (4MBC) 购自 Accustandard 公司，二苯酮 -4 和二苯酮 -5(Bp4/Bp5) 、PABA 乙基己酯 (OD- PABA) 、水杨酸乙基己酯 (EHS)、胡莫柳酯 (HMS) 购自 TCI 公司，奥克利林 (OC)、二乙氨基羟苯甲酰基苯甲酸己酯 (DHHB) 、甲氧基肉桂酸乙基己酯 (EHMC) 、丁基甲氧基二苯酰基甲烷（BMDBM ）、乙基己基三嗪酮 (EHT) 、亚甲基双 -苯并三唑基四甲基丁基酚 (MBBT) 、双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪 (BEMT) ，购自 Dr. Ehrenstorefer GmbH 公司，标准物质纯度均大于 95%。5.3 方法色谱条件一：色谱柱： PFP(五氟苯基 )色谱柱， 4.6mm× 250 mm（I.D. ）， 5 m。柱温：