内参抗体和WB实验的关系

1、进口内参抗体在WB实验中为什么需要使用内参抗体?要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot 。虽然，顺利的时候 Western Blot 做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦一一做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦毕竟，作为一种有活性的生物大分子，抗体和抗原的反应毕竟不象1+1那么明确，而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的表达产物，确实是有一定的不确定性的。所以，严谨的 Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系，对实验结果分析是非常有用的。我们知道，要用Western Blot比较

2、不同条件下或者不同组织中，目的蛋白表达量的相对多少，前提条件是等量的细胞上样，才有比较的基础。 特别表达量不高时，上样量的差别就很可能影响结果的分析。艾美捷向您推荐使用内参抗体来检测您的实验系统，或者校准您的实验结果。内参即 是内部参照(Internal Control )，对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。在Western Blotting中使用内参其实就是在 WB过程中的另外用内参对应的抗体检测内参，这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达

3、，由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定，借助检测每个样品内参的 量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。此外使用内参可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否完全、整个Western Blot显色或者发光体系是否正常。实验结果分析其实很简单：如果样品蛋白量有限，只够进行一次电泳转膜实验时，分别检测样品的内参量和目的蛋白量。将各样品目的蛋白量 分别除以其内参含量，得到的数值即为内参校正后的各样品中目的蛋白相对含量，再用此数值进行样品间的比较和分析，得到目的蛋白含量在不同 样品间的实际变化结果。如果样品量充分，可以先检测内参，观测样品间内参显色条带是否一致，根据差异大小调整各样品的上样

4、量重新进行 Western Blotting 实验，至内参量一致为止；若内参一致，即可进行不同样品间目的蛋白表达变化分析。这样虽然麻烦一点，但是可以保证结果 更有说服力，更可信。毕竟我们的实验是一种严谨的工作。常用的细胞总蛋白质内参有 GAPDH (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)和细胞骨架蛋白 beta-actin 或 beta-tubulin ，这其中最近的国外文献报道中使用GAPDH内参的较多。对于一些植物的样本，则需要特别的植物 Actin蛋白作为内参；同样的，如果提取的样本是细胞核蛋白，那么PCNA或者组蛋白H3都是被经常使用的；而针

5、对一些研究线粒体的客户，那么Cox IV则被较多的文献引用作为线粒体总蛋白的内部参考。美国Abbkine品牌提供非常完整的内参产品解决方案，艾美捷公司向您推荐进口Abbkine全系列内参抗体产品，相关产品如下：内参抗体名称内参类型观察分子量品牌货号详情Beta-Actin mAb (1C7)细胞总蛋白42 kDAbbkineA01010小鼠源单克隆Beta-Actin mAb (1C7) , HRP细胞总蛋白42 kDAbbkineA01015小鼠源单克隆,HRP偶联GAPDH mAb (2B5)细胞总蛋白36 kDAbbkineA01020小鼠源单克隆GAPDH mAb (2B5) , HR

6、P细胞总蛋白36 kDAbbkineA01025小鼠源单克隆,HRP偶联Beta-Tubuline mAb (3G6)细胞总蛋白55 kDAbbkineA01030小鼠源单克隆Plant Actin mAb (3T3)植物细胞总蛋白42 kDAbbkineA01050小鼠源单克隆PCNA mAb (1D7)细胞核蛋白28 kDAbbkineA01040小鼠源单克隆COX IV mAb (14Y2)细胞线粒体总蛋白16 kDAbbkineA01060小鼠源单克隆Histone H3 mAb (2D10)细胞核蛋白18 kDAbbkineA01070小鼠源单克隆美国Abbkine品牌是一家提供高性价比免疫学和细胞学科研产品及解决方案的品牌，艾美捷将其 引入中国，作为其中国区域代理，将为客户提供最具性价比的常规免疫学试剂，如各种标签抗体、内参抗 体、常规一抗以及全系列二抗，抗体检