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文档简介

1、 植物植物DNADNA的提取与鉴定的提取与鉴定实验四实验四实验原理实验原理n真核生物的真核生物的DNADNA与组蛋白结合，以与组蛋白结合，以DNADNA核蛋白核蛋白的形式存在于细胞核内。的形式存在于细胞核内。n在提取在提取DNADNA时，通过研磨破坏细胞壁时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，释放出和细胞膜，释放出DNADNA核蛋白。核蛋白。实验原理实验原理n在在1.4 1.4 molmol/L /L NaClNaCl中，中，DNADNA核蛋白核蛋白的溶解度的溶解度大大，RNARNA核蛋白的溶解度核蛋白的溶解度小小。n在在0.14 0.14 molmol/L /L NaClNaCl中，中，DNADN

2、A核蛋白核蛋白溶解度小，溶解度小，RNARNA核蛋白溶解度大。核蛋白溶解度大。氯仿氯仿- -异戊醇异戊醇使蛋白质变性，离心除去变使蛋白质变性，离心除去变性蛋白。性蛋白。十二烷基硫酸钠（十二烷基硫酸钠（SDSSDS）使蛋白质变性，使蛋白质变性，与核酸分离，从材料中提取出与核酸分离，从材料中提取出DNADNA。苯酚苯酚使蛋白变性，离心分层，后者停留使蛋白变性，离心分层，后者停留在酚层内。在酚层内。去除蛋白质的方法去除蛋白质的方法化学因素：化学因素：pH4.0-11.0pH4.0-11.0稳定，否则变性稳定，否则变性降解。降解。物理因素：物理因素：DNADNA是长链线状分子，机械是长链线状分子，机械

3、剪切作用会使分子断裂。剪切作用会使分子断裂。酶的作用：酶的作用：DNADNA酶降解酶降解DNADNA分子。分子。破坏破坏DNADNA完整结构的因素完整结构的因素 紫外光吸收法鉴定紫外光吸收法鉴定DNADNA纯度和浓度纯度和浓度n核酸的紫外吸收核酸的紫外吸收260 nm,260 nm,蛋白质蛋白质280 nm280 nmnDNADNA的的A A260260/A/A280280约约1.81.8，RNARNA的约的约2.02.0n50 ug/mL DNA50 ug/mL DNA溶液，溶液，A A260 260 = 1.0= 1.0n40 ug/mL RNA40 ug/mL RNA溶液，溶液，A A2

4、60 260 = 1.0= 1.0 实验步骤实验步骤10 mL CTAB提取缓冲液加入提取缓冲液加入50 mL 离心管离心管中，中，65水浴中预热。水浴中预热。50-60 g植物叶片，置于预冷的研钵中，倒入植物叶片，置于预冷的研钵中，倒入液氮，充分研磨液氮，充分研磨10 分钟。（全班共用）分钟。（全班共用）每组取约每组取约2 g叶片粉末，加入预热的叶片粉末，加入预热的CTAB提提取缓冲液中，轻轻混匀，取缓冲液中，轻轻混匀，65保温保温30分钟。分钟。加加10 mL氯仿氯仿-异戊醇，振荡异戊醇，振荡2-3分钟。分钟。5000 rpm离心离心5分钟。分钟。吸入吸入干燥干燥试试 剂剂10 mmol/L

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