实验5淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测

1、实验2 2、溶液中的酶、溶液中的酶难回收难回收，不能被再次利用，不能被再次利用，提高了生产成本；提高了生产成本；1 1、通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂、通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件敏感，等条件敏感，易失活易失活；3 3、反应后混在产物中，影响产品质量。、反应后混在产物中，影响产品质量。( (难分离难分离）易失活、难回收、难分离易失活、难回收、难分离1 1、酶既能与反应物接触，又、酶既能与反应物接触，又能与产物分离能与产物分离；2 2、酶可以被、酶可以被反复利用反复利用。易分离、能反复利用易分离、能反复利用将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在

2、某种介质上，使之成为质上，使之成为不溶于水而又有酶活性不溶于水而又有酶活性的制剂。的制剂。共价偶连法共价偶连法(酶的基团与载体共价结合，酶的基团与载体共价结合，从而被固定从而被固定)吸附法吸附法(吸附在载体上吸附在载体上)交联法交联法( (氨乙基纤维为载体用戊氨乙基纤维为载体用戊二醛交联再与酶蛋白氨基相联二醛交联再与酶蛋白氨基相联) )包埋法包埋法( (将酶包埋在凝胶交联后的将酶包埋在凝胶交联后的“格子格子”中中) )将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为质上，使之成为不溶于水而又有酶活性不溶于水而又有酶活性的制剂。的制剂。吸附法、共

3、价偶联法、交联法、包埋法等吸附法、共价偶联法、交联法、包埋法等实验6 淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测1 1、制备固定化、制备固定化淀粉酶淀粉酶2 2、进行淀粉水解的测定、进行淀粉水解的测定用用吸附法吸附法将将a-a-淀粉酶淀粉酶固定在固定在石英砂石英砂上，一定浓度的上，一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后淀粉溶液经过固定化酶柱后, ,可使淀粉水解成糊精，可使淀粉水解成糊精，用淀粉指示剂溶液测试，用淀粉指示剂溶液测试，流出物呈红色流出物呈红色表明水解产表明水解产物糊精生成。物糊精生成。使用的是使用的是枯草杆菌的枯草杆菌的a-a-淀粉酶淀粉酶， 作用的最适温度为作用的最适温度为50755075；

4、 最适最适PHPH为为5.57.55.57.51.a-1.a-淀粉酶的固定化淀粉酶的固定化: :在烧杯中将在烧杯中将5mg-5mg-淀粉酶溶于淀粉酶溶于4ml4ml蒸馏水中蒸馏水中. .由由于酶不纯于酶不纯, ,可能有些不溶物可能有些不溶物. .再加入再加入5g5g石英砂石英砂, ,不时搅拌不时搅拌,30min,30min后装入后装入1 1支下端接有气门心并用夹子封住的支下端接有气门心并用夹子封住的注射器中注射器中( (石英砂体积约石英砂体积约4ml).4ml).用用1010倍体积的蒸馏水洗涤此注射器以除倍体积的蒸馏水洗涤此注射器以除去未吸附的游离淀粉酶去未吸附的游离淀粉酶, ,流速为流速为1

5、ml/min.1ml/min.5ml5ml塑料注射器塑料注射器50ml, 50ml, 自行车用气门心及夹子自行车用气门心及夹子, , 注射器架试管注射器架试管, ,微量离心管微量离心管3 3支支, ,烧杯烧杯, ,滴管滴管反应柱反应柱固定化酶固定化酶气门心气门心夹子夹子5ml注射器注射器-淀粉酶的固定化淀粉酶的固定化: :1.a-1.a-淀粉酶的固定化淀粉酶的固定化: :将将5mga-5mga-淀粉酶溶于淀粉酶溶于4ml4ml蒸蒸馏水中馏水中.再加入再加入5g5g石英砂石英砂, ,搅拌搅拌,30min,30min后装入注后装入注射器中射器中( (石英砂体积约石英砂体积约4ml).4ml).用用

6、1010倍体积的蒸馏倍体积的蒸馏水洗涤此注射器以除去未吸附的游离淀粉酶水洗涤此注射器以除去未吸附的游离淀粉酶, ,流流速为速为1ml/min.1ml/min.2.2.可溶性淀粉溶液可溶性淀粉溶液: :取取50ml50ml可溶性淀粉溶于可溶性淀粉溶于100ml100ml热水中热水中, ,搅拌均匀搅拌均匀. .3. 5mmol/L KI-I3. 5mmol/L KI-I2 2溶液：溶液：称取称取0.127g0.127g碘和碘和0.83g0.83g碘化钾。加蒸馏水碘化钾。加蒸馏水100ml100ml完全溶解后装入滴瓶中完全溶解后装入滴瓶中5ml5ml塑料注射器塑料注射器50ml, 50ml, 自行车

7、用气门心及夹子自行车用气门心及夹子, , 注射器架试管注射器架试管, ,微量离心管微量离心管3 3支支, ,烧杯烧杯, ,滴管滴管1.1.将灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上将灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上, ,用滴用滴管滴加淀粉溶液管滴加淀粉溶液, ,使淀粉溶液以使淀粉溶液以0.3ml/min0.3ml/min的流速过柱的流速过柱. .在流出在流出5ml5ml后接收后接收0.5ml0.5ml流出液流出液, ,加入加入1212滴滴KI-IKI-I2 2溶液溶液, ,观察颜色观察颜色. .用水稀释用水稀释1 1倍后再观察颜色倍后再观察颜色. .滴加淀粉滴加淀粉1.将灌注了固定化酶的将灌注

8、了固定化酶的注射器放在注射器架上注射器放在注射器架上,用滴管滴加淀粉溶液用滴管滴加淀粉溶液,使使淀粉溶液以淀粉溶液以0.3ml/min的的流速过柱流速过柱.在流出在流出5ml后后接收接收0.5ml流出液流出液,加入加入12滴滴KI-I2溶液溶液,观察颜观察颜色色.用水稀释用水稀释1倍后再观倍后再观察颜色察颜色.反应柱反应柱固定化酶固定化酶气门心气门心夹子夹子5ml注射器注射器淀粉淀粉2.实验后实验后,用用10倍柱体积的蒸馏水洗涤此柱倍柱体积的蒸馏水洗涤此柱,放置在放置在4冰箱中冰箱中,几天后再重复上述实验几天后再重复上述实验,看是否有相同的结果看是否有相同的结果.1.1.如何证明洗涤固定化酶柱

9、的流出液中如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀粉酶没有淀粉酶? ?2.2.耐高温的淀粉酶有哪些可能的用途耐高温的淀粉酶有哪些可能的用途? ?在试管中加入在试管中加入1ml1ml可溶性淀粉，再加几滴淀可溶性淀粉，再加几滴淀粉酶柱流出液，保温几分钟后用碘液检验。粉酶柱流出液，保温几分钟后用碘液检验。 如显蓝色，则流出液中没有淀粉酶了。如显蓝色，则流出液中没有淀粉酶了。可以在高温下使淀粉水解快，而且酶不会因可以在高温下使淀粉水解快，而且酶不会因高温上而失活，所以可在一些需要高温加热高温上而失活，所以可在一些需要高温加热同时又要水解淀粉的反应中使用。同时又要水解淀粉的反应中使用。1 1、研究认为，用

10、固定化酶技术处理污、研究认为，用固定化酶技术处理污染物是很有前途的。如将从大肠杆菌得染物是很有前途的。如将从大肠杆菌得到的磷酸三酯酶固定到尼龙膜上制成制到的磷酸三酯酶固定到尼龙膜上制成制剂，可以用来降解残留在土壤中的有机剂，可以用来降解残留在土壤中的有机磷农药，与用微生物降解相比，其作用磷农药，与用微生物降解相比，其作用不需要适宜的（不需要适宜的（ ）A A、温度、温度 B B、PHPHC C、水分、水分 D D、营养、营养D2 2、目前，日用化工厂大量生产的酶、目前，日用化工厂大量生产的酶制剂，其中的酶大都来自制剂，其中的酶大都来自A A、化学合成、化学合成 B B、动物体内、动物体内 C C、植物体内、植物体内 D D、微生物体内、微生物体内 D3.3.酶的固定方法不包括酶的固定方法不包括( )( )。A. A. 将酶吸附在固体表面上将酶吸附在固体表面上 B B将酶相互连接起来将酶相互连接起来C C将酶包埋在细微网格里将酶包埋在细微网格里 D D将酶制成固体酶制剂，如加酶洗衣粉将酶制成固体