克隆载体表达载体(课件)_第1页
克隆载体表达载体(课件)_第2页
克隆载体表达载体(课件)_第3页
克隆载体表达载体(课件)_第4页
克隆载体表达载体(课件)_第5页
已阅读5页，还剩5页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、LOGO克隆载体克隆载体 表达载体表达载体 定义：定义：可携带插入的外源外源DNA片段片段并可转入受体细胞中大量扩增大量扩增的DNA分子。该分子中含有能够在受体细胞中自主复制的序列和自主复制的序列和筛选标记筛选标记，常用于外源基因的克隆，如噬菌体或质粒。 通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的外源DNA片段，并注意不能破坏载体注意不能破坏载体的自我复制性质的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。克隆载体克隆载体克隆载体必须具备什么条件克隆载体必须具备什么条件?具有使外源具有使外源DNA片段插入片段插入的限制性酶识的限

2、制性酶识别位点（外源别位点（外源性性DNA能组入）能组入）能将外源能将外源DNA导入到受体细导入到受体细胞并进行自我胞并进行自我复制（能繁殖）复制（能繁殖）必须具有选择必须具有选择标记（能筛选标记（能筛选出来）出来）A C B 常用的克隆载体常用的克隆载体 质粒载体质粒载体 病毒载体病毒载体( (噬菌体载体噬菌体载体) )混合载体（由以上三类中的两种以上相混合载体（由以上三类中的两种以上相互组合或与其他基因组互组合或与其他基因组DNADNA组合而成）组合而成）拷贝数不能太低，以保证转化效率应该有两个以上用来克隆外源DNA的单一的限制性内切酶识别位点；应该有一个或多个易于检出的选择标记基因123

3、专用载体专用载体 染色体定位整合载体染色体定位整合载体 启动子探针载体启动子探针载体 诱导型表达载体诱导型表达载体 组织特异性表达载体组织特异性表达载体 反义表达载体反义表达载体 v 定义：定义：在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件增加表达元件（如启动子、RBS、终止子等），使目的基因能够表达目的基因能够表达的载体。v 包括原核表达载体原核表达载体和真核表达载体真核表达载体，可以是质粒、噬菌体或病毒等。典型的表达载体带有能使基因表达的调控序列调控序列，并在适当位置有可插入外源基因的限制性内限制性内切酶位点切酶位点。表达载体表达载体LOGO常用细菌质粒进行构建，构建过程中运常用细菌质粒进行构建

4、，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端（多为黏性末端，也有平末相合的末端（多为黏性末端，也有平末端），采用端），采用DNA连接酶连接，导入生物连接酶连接，导入生物体实现表达。标记基因可帮助识别质粒体实现表达。标记基因可帮助识别质粒并检测是否成功整合到染色体并检测是否成功整合到染色体DNA中。中。 表达载体四部分：目的基因、启动子、终止子、标记基因 表达载体必须具备的条件：表达载体必须具备的条件： 1.载体能够独立的复制； 2.应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，以利于外源基因的克隆、鉴定和筛选； 3.应具有很强的启动子，能被RNA聚合酶所识别； 4.应具有阻遏子，使启动子受到控制，只有当诱导时才能进行转录； 5.应具有很强的终止子，以使RNA聚合酶集中力量转录克隆

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论