核酸蛋白检测中常见问题解析

1、实用技巧核酸蛋白检测中常见问题显示屏A230检测后，显示屏显示：浓度稀释度A260 > 0.05（最好在 0.1-1.0 范围内）A280A320 接近于 0.0比率 A260 /A280 1.8-2.0比率 A260 /A230 > 2.0A260 nm吸光值是否在 0.1-1.0 之间？核酸最高吸收峰的吸收波长如果不在此范围，稀释或浓缩样品，使之在此范围内。如果是高浓度样品，也可以使用 UVette 2 mm 光程长度（即最佳测量值的范围为 0.1 至 1.0将 UVette 比色皿旋转 90 o）。稀释溶液中吸光物质浓度的吸光度可用如果吸光度小于 0.05 ，检查是否定律表示

2、：A = log I0 = c dI-定律：A 吸光值I0 入射光强度I 透射光强度A = · c · d操作因素（如移液浮物等）影响。确，样品内有悬50 µl 样品中 DNA 的浓度必须大于2.5 µg / ml（ = 125 ng）双链 DNAc 吸光物质的浓度（mol/L）d 光通过的液层厚度（cm）吸光系数，（L mol-1 cm-1）（A= 1 相当于 50 µg / ml 双链DNA）2608No. 10实用技巧A280 nm蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长比值可进行核酸样品纯度评估：A260 / A280DNA 的比值是否在 1

3、.8 左右，RNA 的比值是否在 2.0 左右？如果比值低，表示可能被蛋白或酚类物质 污染，需要纯化样品。纯 DNA 的比值为 1.8，纯 RNA 为 2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香组）或酚类物质的污染。比值 =1.5 相当于 50 蛋白质 / DNA 溶液吸光度 蛋白 糖类波长 nm DNA，蛋白和碳水化合物的吸收值A230 nm碳水化合物最高吸收峰的吸收波长比值可进行核酸样品纯度评估：A260 / A230比值 >2.0 ？如果比值小于 2.0，样品被碳水化合物，盐类或污染，需要纯化样品。纯 DNA 和 RNA 的比值为 2.5。若比值小于 2.0 表明样品被糖类、盐类或有机

4、溶剂污染。A320 nm检测值是否接近 0.0 ？检测溶液样品的浊度如果该值不接近 0.0，样品中物，需要纯化样品。悬浮该值应该接近 0.0 。如果不是，表明溶液中有悬浮物。可将参数设定至 “Corr. with A320”，进行浊度校准。此外，在参数设置中，可激活 “A320correction”，进行校准。检测屏显示错误+吸光值大于 3.0 稀释样品 检查比色皿光程高度是否高于 8.5 mm 清洁比色皿检查比色皿的正确样品槽的方向是否!计算值不能显示（值过高）检查参数设置，可能参数值设置过高 不能计算比值，因为吸光值为 0.0 或大于 3.0适当稀释样品后，重新检测9实用技巧常见错误稀释空

5、白对照和样品应该在在同一比色推荐稀释率为 1:10 至差会导致稀释率过高仪器的参数值是否设置正确，发生杂样品混匀核酸样品在稀释前需要用 vortex 混匀，避免出现浓度梯度转样至比色皿前需再次用 vortex 混匀，以防止因样品存放时间过长造成的浓度变化中有气泡或其它悬mm对照， 石英比色DNA 或 RNA保不含样品检测核酸的吸光值受pH 值和缓冲液离子浓度影响。只有在一定的pH 值和低离子浓度的条件下（如 10 mM Tris - HCl，pH 8.0），才能得到精确的检测结果。水的 pH 值不检测误差如 Eppendorf 公使用次数为 5 次与一致推荐司的 UVette比色其它校准实验核酸蛋白测定仪是否水平摆放？ 比色皿检测面是否干净时无刮擦？移液器移液准确度？ 移液器活塞是否干净？dorf 的 UV-VIS 滤光片核酸标准品配制：缓冲液：10 mM Tris - HCl pH 8.0 或者 TE 缓冲液 pH 8.0 稀释：2 + 48 µ（l > 125 ng DNA / 50µl 样品） 空白对照和样品检测使用同一比色皿 在 Eppendorf 管中进