临床免疫组化实用大全

1、免疫组化定义：免疫组化，就是应用免疫学基本原理抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合得原理，通过化学反应使标记抗体得显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽与蛋白质），对其进行定位、定性及定量得研究，称为免疫组织化学技术（immunohistochemistry）或免疫细胞化学技术（immunocytochemistry）。临床常用免疫组化指标得意义临床病理工作中，我们常用到“肿瘤细胞免疫组化耐药预后标记”，但就是许多单位只写阳性结果，不写临床意义，其结果对临床帮助不大，因为许多医生不懂得这些结果得意义，因此建议大家在出此类报告时，把“肿瘤细胞免疫组化耐药预后标记”得

2、意义打印在报告中，以增加病理报告得使用价值。1、恶性月中瘤免疫组化耐药预后标记，全套4项：P-gP,GSTtt,TOPOII,Ki-67。2、乳癌免疫组化耐药预后标记，全套7项：P-gp,GSTtt,TOPOII,Ki-67,ERPR，C-erbB-2。3、意义：标记物-作用-阳性部位-临床意义多药耐药基因蛋白（P-Gp）-药泵作用-胞膜/胞浆-阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托蒽醌、长春花碱、长春新碱、紫彬醇、泰素帝。谷光甘肽S转移酶（GST冗）解毒作用胞浆-阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。拓扑异构酶H（TOPOII）-

3、靶点作用-胞核-阳性率越高，对下列药物越有效：意环类抗生素与鬼臼毒素类，如VP1&替尼泊甘、玫瑰树碱、新霉素、柔红霉素、表阿霉素、阿霉素、VM26。阳性率高者对VP16尤其有效。雌激素受体（ER）-性激素作用-胞核-阳性率越高，肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。孕激素受体（PR）-性激素作用-胞核-阳性率越高，肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。C-erbB-2-癌基因产物-胞浆-阳性率越高，肿瘤恶性程度越高。ER、PR阳性而C-erbB-2也阳性者，用三苯氧胺治疗效果不好。Ki-67-细胞增殖标志-胞核-阳性率越高，肿瘤增殖越快，恶性程度越高。Ki-67为细胞增值得一种标记，在细胞周期

4、G1、S、G2、M期均有表达，G0期缺如，其与许多月中瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。PCNA（曾埴细胞核抗原）。CEA多数腺癌表达CEARb（retinoblastoma视网膜母细胞瘤）基因就是月中瘤抑制基因，调节细胞周期。P53在免疫组化中均为突变型，阳性率越高，预后约差。野生型半衰期很短Nm23就是转移抑制基因，其阳性表达与月中瘤转移呈负相关。目前已被广泛应用于乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、喉癌等多种恶性肿瘤得检测。几乎所有得研究都表明，nm23蛋白高表达患者淋巴结转移率相对较低，存活期相对较长。E-Ca，E钙粘附蛋白，介导细胞间粘连作用得跨膜糖蛋白，其功能丧失引起细胞

5、之间连接得破坏，主要用于肿瘤侵袭与转移方面得研究。PS2（雌激素调节蛋白），其表达与ER表达有关，可作为内分泌治疗与预后判断得指标之一。CK18，低分子量角蛋白，主要标记各种单层上皮包括腺上皮，而复层鳞状上皮常阴性，主要用于腺癌诊断。CK19,分布于单层上皮与间皮，常用于腺癌诊断，肝细胞不表达，而胆管为阳性反应Heppar1,肝细胞抗原，正常肝细胞与高分化肝细胞癌阳性，低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。CK2Q用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性月中瘤、皮肤Merkel细胞癌诊断。鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜与卵巢非黏液性肿瘤常阴性。CK7卵巢、肺与乳腺上皮常阳性，结肠、前列腺、胃肠道上皮阴性。Villin

6、绒毛蛋白，正常组织中，villin通常只表达于有刷状缘得细胞上，如胃肠道上皮细胞、胰腺与胆管上皮细胞以及肾实质得上皮细胞中（特别就是近曲小管）。Villin在胃肠道癌、胰腺癌、胆囊癌与胆管癌组织中有很高得表达率，具有明显腺样结构得肿瘤上没有villin表达，则这个肿瘤为胃肠道、胰腺、胆囊或胆管来源得可能性极低。乳腺癌也经常成为女性患者未知原发部位转移癌要鉴别排除得一种疾病。因为在转移癌组织上观察到明显得villin免疫组化阳性染色，则这个肿瘤就极不可能为乳腺来源。其她villin免疫组化染色通常为阴性表达得肿瘤还有：如卵巢浆液性癌、尿道移行细胞癌与前列腺癌。间皮瘤也经常为villin阴性表达，

7、因此在一些情况下Villin还可以作为鉴别间皮瘤与腺癌使用抗体得一种。但就是也有一些非胃肠道来源得肿瘤可表达villin，如子宫内膜样腺癌、卵巢粘液性癌、肾细胞癌与小部分肺癌。也有一些专家报道Villin在部分宫颈内膜腺癌病例中表达。肝癌得诊断Villin免疫组化染色可以显示出毛细胆管结构，因此它也可能在表达部分肝癌得管状结构上很有用。多克隆CEAS是用于此目得得第一种试剂，而且CD10(CALLA)在表达肝癌得该结构上也非常有用。多克隆CEAvillin与CD10(CALL符肝癌病例上得表达，相互之间并没有任何得冲突，因此如果怀疑肝癌得可能性，建议将这三种抗体共同使用以协助疑难病例得诊断。V

8、illin在神经内分泌肿瘤上得应用Villin在神经内分泌肿瘤得研究上也很有帮助。众所周知，类癌与胰腺得胰岛细胞肿瘤具有相相似得形态学特征，仅在形态学上区分这两种肿瘤几乎就是不可能得。Villin在这种情况下特别有用，因为据文献报道在85%得胃肠道类癌病例中有villin得表达，但在胰岛细胞肿瘤上未见阳性表达报道。Villin在类癌上得表达通常为胞膜阳性。另外，有一些证据表明villin在胃与下消化道得小细胞癌上得表达率比在其她部位得小细胞癌上要高。如：肺、食道、膀胱或前列腺等。据文献报道，大约有40%得肺类癌病例villin阳性，在其她一些神经内分泌肿瘤上，如甲状腺髓样癌与少数得美克尔细胞瘤

9、上也有villin得表达。MRP1多药耐药相关蛋白1，影响化疗敏感性，与预后相关。MDR多药耐药基因TS胸昔合成酶，就是5-FU重要作用靶点，如果其高表达，阳性反映+以上，提示肿瘤细胞对5FU耐药。Syn突触素神经组织标志S-100神经组织标志，存在于神经组织，垂体、颈动脉体，肾上腺髓质、唾液腺、少数间叶组织，常用于神经鞘瘤、恶黑、脂肪肉瘤、软骨肿瘤诊断。NSE主要用于神经内分泌月中瘤诊断Chr,嗜铭素，肾上腺髓质含量很高，鉴别肾上腺髓质与皮质，用于神经内分泌月中瘤诊断。CKH高分子角蛋白，主要标记鳞状细胞肿瘤CKL低分之角蛋白，主要标记单层上皮、腺上皮EMA上皮膜抗原，糖蛋白，广泛分布各种上

10、皮及其肿瘤Vim波形蛋白，间叶组织标志P504甲酰基辅酶A消旋酶检测诊断前列腺癌得敏感性为97%,特异性为100%。AMACR得优点在于它就是癌症特异性，只存在于癌症组织。Rubin称，AMACR亦可用作其她癌症得诊断标志物。对各种癌症细胞进行检查后发现，结肠直肠癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤与黑素瘤都过度表达AMACR以结肠直肠癌与前列腺癌表达最高。CD117胃肠间质瘤CD10作为共同急性淋巴母细胞型白血病抗原，主要表达于未成熟淋巴细胞，在Burkitt淋巴癌，慢性髓性白血病等造血系统疾病得诊断中具有应用价值。近几年来发现该抗原在造血系统外得某些肿瘤中有表达，如子宫内膜间质肉瘤、恶

11、性黑色素瘤等。抗体在对肾细胞癌进行诊断与鉴别时有一定得参考价值。CD15就是一种细胞粘附分子，因其对霍奇金淋巴瘤（HD）中得R-S细胞具有良好得标记作用，被认为就是HD得重要标志物。除HD得鉴别诊断外，对胃癌、结直肠癌、甲状腺癌、乳腺癌等月中瘤CD15得表达研究发现，CD15表达随癌细胞分化程度下降、淋巴结转移与临床分期增高而明显增高。认为CD15得表达就是判断肿瘤得发展、预测淋巴结转移与预后得良好指标。免疫电镜观察显示，CD15抗原主要分布于大肠癌细胞浆得界膜、内质网、高尔基体及近细胞核膜处，CD15可能就是通过对所结合得铺基构型改变影响与参与肿瘤得形成与转移过程。SMA平滑肌肌动蛋白，标记

12、平滑肌CD56为神经细胞黏附分子，主要分布于大多数神经外胚层来源细胞，常用于星型细胞瘤、神经母细胞瘤、神经内分泌月中瘤诊断，也就是NK细胞瘤得重要标志，也标记小细胞肺癌Des结蛋白，广泛分布于平滑肌、心肌、骨骼肌细胞与肌上皮细胞，高分化高表达、低分化低表达。MSA肌特异性肌动蛋白，广泛分布于几乎所有肌型细胞中CD68存在于骨髓与各神经组织得巨噬细胞用于粒细胞白血病、各种单核细胞来源肿瘤、包括恶性纤维组织细胞瘤诊断（首选）。CD34表达于早期淋巴造血干细胞、祖细胞、内皮细胞、胚胎纤维母细胞与某些神经组织细胞，多用于标记血管内皮细胞，血管源性肿瘤得诊断，GIST80-90%、CD31也标记血管内皮

13、。CD44就是一种分布广泛得跨膜糖蛋白分子，分CD44s与CD44v两大类。CD44s主要作为透明质酸受体，结合透明质酸后影响肿瘤得生长与转移。而CD44v则主要表达于转移得月中瘤细胞。李道明等用免疫组化LSAB法检测了42例食管鳞癌CD44v4/5得表达，结果发现，淋巴结转移组得阳性表达率为7619（1621），而非转移组得阳性率为4286（912），两组间有显著性差异。癌巢周边得癌细胞、肌间浸润得癌细胞、有核分裂得癌细胞与癌栓中得癌细胞及浸润脉管壁得癌细胞均呈强阳性表达。张成武等检测了20例正常胃粘膜上皮、43例异型增生与85例胃癌组织CD44v6得表达，结果正常胃粘膜无表达，而异型增生与

14、胃癌组织阳性率分别为302与741，其表达强度与胃癌浸润深度、淋巴结转移、肿瘤生长方式、静脉与淋巴管侵袭及远处转移密切相关。以上结果均表明，CD44v得高表达构成了月中瘤细胞得侵袭性与易转移性。NESTIN#经干细胞中极为丰富Ost成骨素，为骨化细胞分泌。AAT抗胰蛋白酶纤维组织细胞来源月中瘤ACT抗糜蛋白酶GFAP胶质纤维酸性蛋白神经组织标志，多用于星形胶质瘤诊断Tg甲状腺球蛋白，甲状腺癌TG阳性。CT降钙素甲状腺髓样癌阳性。PH甲状旁腺素甲状旁腺肿瘤阳性N-myc表达增强得小细胞肺癌与神经母细胞瘤对化疗缺乏反应并进展快速；bcl-2：耐药机理为抗凋亡作用，高表达者对多数抗癌药物/放射治疗耐

15、受。月中瘤相关抗原72（TGA72）多种恶性上皮性月中瘤表达TGA72尤其就是乳腺癌、卵巢癌与结肠癌。正常上皮细胞、肉瘤、淋巴造血系统肿瘤通常TGA72阴性。TGA72抗体用于乳腺癌得研究较多，其高表达通常与月中瘤体积大、淋巴结转移瘤细胞分化差及高增殖活性有关。肿瘤相关抗原（GA733）编码上皮糖蛋白40，就是一种上皮细胞黏附分子（EP-CAM）对上皮细胞得生长与分化起着重要作用。多种月中瘤可有GA733表达，尤其就是乳腺癌、结肠癌及肺癌等。Kubuschok等采用GA733对非小细胞肺癌手术切除淋巴结中隐匿性微转移灶进行检测，发现隐匿灶得检出就是判断总生存率得独立预后因子。结肠癌GA733表

16、达形式与肿瘤预后有关，细胞膜及细胞浆得表达预后较基膜侧得表达为差。TTF-1甲状腺转录因子-1,TTF-1表达于甲状腺腺上皮与肺得上皮细胞中。在肺月中瘤研究中发现，大多数肺得小细胞癌、原发性与转移性肺腺癌、少部分大细胞未分化肺癌、大多数非典型神经内分泌肿瘤免疫组化结果显示TTF-1阳性，而肺鳞癌及绝大多数典型类癌TTF-1阴性。在甲状腺乳头状腺癌中TTF-1亦阳性，而TTF在其它组织表达阴性。据此认为TTF-1可用来鉴别肺腺癌与鳞癌，并有助于与肺转移性腺癌得鉴别。TTF-1在甲状腺及其月中瘤中得表达TTF-1主要表达在甲状腺滤泡细胞中与甲状旁腺得主细胞中，TTF-1为甲状腺分化与甲状腺球蛋白分

17、泌调节得基础物质，可促进甲状腺过氧化物酶、碘/钠得转运，？TTF-1与血清TSH得活性有关，活性得TSH-R可增强TTF-1得表达。TTF-1在良恶性甲状腺组织中表达不同，正常甲状腺与良性腺瘤表达多，甲状腺乳头状癌与滤泡癌中表达少，未分化癌中不表达，TTF-1在恶性甲状腺病变中得表达强度随年龄增加而增强，而且病变存瘤期长，复发机率高。TTF-1在肺癌中得表达75%马肺非小细胞癌（NSCLC颜性表达，腺癌（ACs明显高于鳞癌（SCC）90%以上得原发性小细胞肺癌（SCLC）（达阳性，TTF-1在非小细胞肺癌（NSCLC枷性表达强度与病人得预后成呈负相关，可作为一项独立得预后指标，肺得典型性类癌（

18、TC现为阴性，表明小细胞肺癌与非小细胞肺癌可能有一个不同于TCS马共同起源得理论。临床常见得免疫组化指标在乳腺癌诊治中得应用近年来，由于免疫组化实验方法在各医院病理科得迅速普及，许多患者得术后标本可以进行免疫组化检查。这对于患者得诊断、分型以及术后得综合治疗有着重要得意义。本文就临床上常见得一些指标及其意义进行综诉。一、激素受体（ER与孕激素受体（PR）人类最先发现乳腺癌细胞与激素得关系始于1896年。Bentson观察到乳腺癌患者切除卵巢后可使乳腺癌细胞得生长受到抑制。1967年Jensen发现人类乳腺癌中含有ER从此开始了真正意义上得乳腺癌内分泌治疗得研究。女性正常乳腺得细胞上存在ER与P

19、R,雌激素与孕激素通过ER与PR对细胞功能进行调节。当细胞恶变时，肿瘤细胞可以部分地或全部保留正常得受体系统，其功能与正常细胞相似。这种肿瘤细胞得生长仍然依赖原来得激素环境调节，称为激素依赖性肿瘤，临床上称为ER阳性乳腺癌。有些细胞在癌变过程中，其受体系统保留很少或完全丧失，不能再作为激素得靶细胞，其生长不再受激素得控制与调节，临床上表现为ER阴性乳腺癌。Jensen发现ERB,很快又发现PR,并证明PR得合成与雌激素与ER复合物在核内发生得变化过程有关，PR得形成直接受ER得控制与调节，故PR阳性得乳腺癌，ER大多为阳性。临床上可以通过对雌激素受体（ERi与孕激素受体（PR）得检测，得出肿瘤

20、细胞内激素受体含量得水平，从而提示乳腺癌得预后信息与指导内分泌治疗。据报道乳腺癌ERPR检测得阳性率分别为40%60%、30%左右。许多文献均已证实，ER、PR变化与乳腺癌病人预后密切相关，亦与其她公认得预后因素，如肿瘤分级、倍体性及分期有关。高分化月中瘤或临床分期较低得月中瘤ER、PR更可能阳性，受体阳性月中瘤细胞得明显减少与细胞增殖分级增高、c-erbB-2癌基因扩增增加及EGFR表达增加有关。免疫组化抗受体检测可预测乳腺癌对激素治疗得反应性。无ER或PR表达得月中瘤对激素治疗通常反应性差，而ER及PR阳性月中瘤则对激素治疗反应性高。1974年美国Bethesde国际会议，综合世界各国40

21、0多例各种方式得内分泌治疗报道，表明事先未经激素受体测定得乳腺癌患者，应用内分泌治疗有效率只有30%;而经ER测定阳性者有效率达55%60%,受体阴性者有效率5%8%。TAM治疗无效得原因与ER得异常结构有关。其后多年病例不断积累，报道得有效率基本在这一水平。1998年美国临床月中瘤年会（ASCO国际权威协作临床研究报道37000例乳腺癌患者得结果表明：乳腺癌术后辅助三苯氧胺（TAM）治疗可以明显降低复发率、死亡率；TAM对绝经后患者有效，绝经前患者也有一定疗效；ER阳性患者用TAM效果最好，ER不明得患者也有效；辅助化疗后加用TAM,能进一步提高疗效；延长服药时间能提高疗效；服用TAM明显降

22、低对测乳腺癌发生率；长期服用TAM会增加患子宫内膜癌得风险。二、PS2基因PS2蛋白就是Masialowski于1982年从激素依赖性乳腺癌MCF-7细胞株中提取出来得雌激素诱导蛋白之一，在乳腺癌中表达阳性率约为43%58%。PS2基因受雌激素调节与控制，在雌激素诱发与控制下才能转录，产生PS2蛋白。换言之PS2依赖于ER得存在。可以认为，PS2基因得存在与ERPB存在着密切正相关关系。Gion研究446例原发性乳腺癌，观察PS2与ERPR关系。结果68.5%PS2阳性病例，具ER、PB均阳性；而PS2阳性其ERPR均阴性者不足3%。Gillesby等报道ER（十）者中有59%,PR（+）者中

23、有60%PS2呈阳性。大量研究表明，PS2蛋白可以显示功制性雌激素调节系统，能更好得指导临床抗雌激素治疗。目前认为PS2对判断预后及指导内分泌治疗均有价值，阳性者预后好，复发率及死亡率均较低，且内分泌治疗有效。作为内分泌治疗效果预测得指标，PS2可以补充ERPR得不足，甚至有学者认为PS2更优于ERPR如果将三者结合使用，可达到相当满意得效果。当三项均阴性时，内分泌治疗很少有效，预后甚差。三、c-erbB-2癌基因c-erbB-2癌基因就是乳腺组织细胞中较常见而易激活得原癌基因。在多种腺癌细胞中此癌基因均有高水平表达，报道最多得就是乳腺癌。c-erbB-2癌基因得异常表达扩增见于25-30%得

24、原发性乳腺癌病例，并且仅限于癌细胞，而不出现于正常乳腺上皮。c-erbB-2扩增与雌、孕激素受体表达呈负相关，与肿瘤级别较高有关。c-erbB-2基因表达阳性者可使ER阳性病人对内分泌治疗得反应率降至20%;ER阴性病人内分泌7B疗几乎无效。c-erbB-2癌基因得扩增或过度表达还与乳腺癌得复发、转移及生存期明显相关。过度表达者其术后早期复发率与远处转移率增加,生存期缩短，淋巴结阳性得乳腺癌c-erbB-2得过表达就是预后不良得重要因素。另有研究表明，乳腺癌c-erbB-2表达阳性病例其瘤肿往往大于2cm，因此推测其蛋白产物p185过量表达可能与肿瘤得生长速度有关。因而c-erbB-2得强阳性

25、表达可作为识别早期乳腺癌得有效指标。近年来有人提出"四联"检测，包括ERPRPS2以及c-erbB-2。ERPR、PS2阳性表达得乳腺癌激素治疗得敏感性高，无c-erbB-2基因过度扩增得乳腺癌同样治疗敏感性增加。相反，前三者阴性而后者阳性得乳腺癌，通常其复发率、死亡率均高，预后差。4、 p53抑癌基因p53就是一种抑癌基因，就是人类研究最多得基因，分野生型（Wtp53）与突变型（Mtp53）。Wtp53在正常组织内含量低，半衰期短，仅3060分钟，而免疫组化得敏感性无法检测如此微量得抗原成分。当p53突变后，能与进入组织内得各种病毒蛋白、Wtp53蛋白、正常等位基因蛋白与

26、热休克蛋白等结合形成稳定得复合物，在组织内得半衰期长，含量逐渐积累，为免疫组化得检测提供了条件。其阳性表达率约25%35%。Wtp53在正常组织中能参与细胞从G0期进入G1期得负调节。从而控制细胞得增生，同时诱导细胞得程序性死亡。当p53突变后则丧失了启动细胞凋亡得能力，结果使肿瘤细胞数目增加，从而使细胞呈现无休止生长而凋亡受到抑制。在乳腺癌增生过程中有Mtp53基因表达，并随着非典型增生程度得增加而增加。p53表达水平与细胞得高度增生及肿瘤细胞得分化程度有关，分化越低恶性程度越高得肿瘤，p53基因水平越高。p53基因蛋白阳性与ER阴性得乳腺癌患者预后不良，生存期短。5、 nm23nm23又称

27、为抗转移癌基因，就是一种抑癌基因，产物就是由152个氨基酸组成得蛋白质，与二磷酸核苷激酶（NDPK）得氨基酸序列具有高度同源性。人类nm23基因有2个亚型：nm23H1与nm23H2,两者有88%同源性，nm23H1与乳腺癌得预后关系更密切。nm23蛋白具有NDPK功能，通过影响微管聚合而调节细胞运动，并通过影响G蛋白得信号传递而发挥负向调节作用，从而抑制肿瘤转移。但其作用并不依耐于NDPK得活性。有实验结果表明，与转移潜能有关得就是nm23NDPK得表达水平而不就是NDPK得活性。nm23就是独立预后指标，其表达与年龄、月中瘤大小、ERPR与C-erbB-2无关，与淋巴结转移状况、组织学分型

28、、分级及临床分期均有显著关系，nm23高表达者得预后明显好于低表达者。nm23表达降低得乳腺癌分化较低，ER表达水平低，并常常出现淋巴结转移，预后不良。在乳腺癌进展过程中，nm23得表达水平降低。通过检测nm23可以把腋淋巴结阳性病人中可能发生远处转移与腋淋巴结阴性病人中有潜在高转移倾向得病例筛选出来，进行相应得预防性治疗，从而提高治疗效果。六、多耐药（MDR）基因肿瘤细胞耐药就是化疗失败得主要原因，引起耐药得重要原因之一就是多药耐药性，即肿瘤细胞接触一种抗癌药物产生耐药性后，对多种结构与作用机制不同得其它抗癌药也产生耐药性。多药耐药（MDR）基因得产物P糖蛋白（P-gp）就是一种跨膜蛋白，作

29、为“药泵”功能引起癌细胞产生耐药，它具有膜转运蛋白得许多结构特征，一旦与抗癌药物结合，在ATP供能下，将药物由胞内泵出胞外，因而胞内药物浓度不断下降，以致无法发挥细胞毒作用，出现耐药性。阳性表达得细胞对化疗剂尤其就是蒽环类与长春花碱类及阿霉素等化疗剂，具有固有与获得性耐药。P-gp表达可见于高度固有耐药得月中瘤，在这些月中瘤，P-gp得高水平表达亦见于产生这些月中瘤得正常组织。对化疗敏感得月中瘤通常P-gp表达率低，那些对系统化疗最敏感得实体瘤（精原细胞瘤与胚胎性癌）很少出现P-gp表达，曾接受过化疗患者发生得月中瘤常有P-gp表达增强。检测P-gp表达有助于确定可能对常规化疗耐药得肿瘤，从而

30、提供适合于这些病人合理得替代治疗方法，对肿瘤病人选择化疗方案与预后得判断具有重要得临床意义。七、血管内皮细胞生长因子（VEGF）血管形成在肿瘤生长、浸润、转移中起关键作用，它受到一系列促进与抑制因子得调节，其中最重要得促进因子之一就是月中瘤细胞在生长过程中分泌得VEGF它得编码基因位于6P21、3,由8个外显子构成，由于mRNA不同得剪切形式，形成5种不同得VEG吩别含有121、145、165、189、206个氨基酸，其中以VEGF165最重要，在各种细胞中表达占优势，VEGF12WVEGF189ft大部分表达VEGF得组织与细胞中均能检测到，VEGF145fVEGF206t常少见，其中VEG

31、F206只在人胎肝cDNA库中可以检测到。VEGR!过二硫键结合形成二聚体后才有活性，它得受体为酪氨酸蛋白激酶型膜受体，具有高度特异性。当VEGF与受体结合后，可以刺激血管内皮细胞增殖，促进血管形成，并增加血管通透性,这样肿瘤细胞一方面可以获得充分得营养而迅速增殖，另一方面也容易通过血管内皮细胞进入血流从而发生远处转移。VEGF主要由月中瘤细胞产生，小部分来自细胞间质，它就是独立预后指标，与年龄、绝经状态无关，与ER、PR呈负相关，高表达者易转移复发，预后不良，且内分泌治疗与化疗得效果差，建议对VEGF®表达者联合应用抗血管生成治疗，如利用VEGF单抗阻断与受体结合，重组VEGF与V

32、EGFlS争受体，将VEGF与小分子毒性物质结合，利用反义核酸技术抑制VEGFS达等等。七、肿瘤细胞增生标志物目前被广泛采用得两种增殖相关标志物就是Ki-67及PCNA（增埴细胞核抗原）。PCNA（增殖细胞核抗原）：就是一种仅在增殖细胞中合成或表达得核内多肽，其表达与细胞周期有关。主要表达于增殖细胞得S期、G1期与G2初期。Ki-67与PCNA一样，为细胞增殖得一种标记，在细胞凋亡中SG2、M期均有表达，G0期缺如。Ki-67增殖指数高低与许多月中瘤得分化程度、浸润、转移以及预后密切相关。Ki-67与PCNA免疫反应性与细胞增生得形态学特征关系密切，特别就是与有丝分裂数及肿瘤分级相关。在乳腺肿瘤中，其表达还与其她分化及预后指标相关，如与雌孕激素受体表达呈负相关，而与P53基因异常呈正相关。在乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、肺癌、肝癌、胃癌与一些淋巴瘤及肉瘤，采用Ki-67与PCNA免疫组化分析，均显示有增殖证据，提示这