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文档简介

1、聚合酶链反应（聚合酶链反应（PCRPCR）技术体外扩增）技术体外扩增DNADNA基本原理基本原理聚合酶链式反应聚合酶链式反应 (Polymerase Chain Reaction, PCR) (Polymerase Chain Reaction, PCR) 是体外酶促合成特异是体外酶促合成特异DNADNA片段的一种技术。利用片段的一种技术。利用PCRPCR技术可在数小时之内大量扩增目的基因技术可在数小时之内大量扩增目的基因或或DNADNA片段，从而免除基因重组和分子克隆等一系列繁琐操作。由于这片段，从而免除基因重组和分子克隆等一系列繁琐操作。由于这种方法操作简单、实用性强、灵敏度高并可自动化，

2、因而在分子生物学、种方法操作简单、实用性强、灵敏度高并可自动化，因而在分子生物学、基因工程研究以及对遗传病、传染病和恶性肿瘤等基因诊断和研究中得基因工程研究以及对遗传病、传染病和恶性肿瘤等基因诊断和研究中得到广泛应用。到广泛应用。PCRPCR反应的基本条件包括反应的基本条件包括：（1 1）以）以 DNADNA为模板为模板 ( (在在RT-PCRRT-PCR中模板是中模板是RNA)RNA)；（2 2）以寡核苷酸为引物；）以寡核苷酸为引物；（3 3）需要）需要4 4种种dNTPdNTP作为底物；作为底物；（4 4）TaqTaq DNA DNA聚合酶。聚合酶。 1.1.在在0.5 ml Ep管中加入

3、下列物质，并混匀。管中加入下列物质，并混匀。 操作步骤操作步骤成分成分 50 50 l l反应总体系中反应总体系中 1010PCR buffer (PCR buffer (无无 Mg Mg +2+2) 5.00 ) 5.00 l l25 mM25 mM MgCl MgCl2 2 3.00 3.00 l l10 mM dNTP10 mM dNTP 4.00 4.00 l l引物引物1 0.50 1 0.50 l l引物引物2 0.50 2 0.50 l lTaqTaq (5U/ (5U/ l) 0.25 l) 0.25 l l模板模板 ( (基因组基因组DNA 0.1 DNA 0.1 g )5.00 g )5.00 l lddHddH2 2O 31.75 O 31.75 l l2 2将上述将上述PCRPCR反应混合物混匀放入反应混合物混匀放入PCRPCR扩增仪中。扩增仪中。3 3PCRPCR循环：循环： 94 5min 1循环循环94 45sec55 45sec72 45sec30个循环个循环727min 延伸延伸4PCR产物鉴定：取产物鉴定：取10 l PCR产物加产物加2 l上样缓冲液，用上样缓冲液，用1% 琼脂糖凝胶进行电泳。琼脂糖凝胶进行电泳。 1.PCR1.PCR反应的原理反应的

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