ELISA双抗体夹心法_第1页
ELISA双抗体夹心法_第2页
ELISA双抗体夹心法_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、ELISA双抗体夹心法点击次数： 320  作者：百奥迈科 发表于：2009-03-13 16:18转载请注明来自丁香园 1、原理ELISA 的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。加入酶标记的抗原或抗体，通过反应也结合在固相载体上。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，根据呈色的深浅进行定性或定量分析。酶的催化效率很高

2、，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。2、特点某些分泌型蛋白，用siRNA 干扰后可以用ELISA 进行检测。3、ELISA 实验流程示图（以双抗体夹心法为例） 4、试剂与耗材（1） 包被缓冲液 （pH 9.6 0.05 M 碳酸盐缓冲液）：（2）洗涤缓冲液 （pH 7.4，0.15 M PBS）：（3）稀释液：（4）终止液（2 M H2SO4）：（5）底物缓冲液 （pH 5.0）：（6）四甲基联苯胺（TMB）使用液：（7）2，2-连氮基-双-3-乙基-苯丙噻唑啉磺胺（ABTS）使用液：（8）抗原、抗体和酶标记抗体：按说明书处理。（9）标准品：用稀释液稀释成梯度浓

3、度溶液。（10）96 孔聚苯乙烯塑料板 （酶标板）。2、实验步骤（双抗体夹心法）：（1）包被：用包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1-10 g/mL。在酶标板反应孔中加0.1 mL，4过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗板3 次，每次3 min。（2）加样：加一定浓度稀释的待检样品（同时做空白对照，阴性对照孔及阳性对照）0.1 mL 于上述已包被的反应孔中，置湿盒中，37， 1 hr。用洗涤缓冲液洗板3 次，每次3 min。（3）加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体 （经滴定后的稀释度） 0.1ml。37，0.5 - 1 hr，用洗涤缓冲液洗板3 次，每次3 min。（4）加底物液显色：于各反应孔中加入现配的TMB 底物溶液0.1 mL，37 ，10 - 30min。（5）终止反应：于各反应孔中加入终止液0.05 mL。（6）结果判定：将酶标板在酶标仪上，于450 nm （若ABTS 显色，读410 nm），读数，输出到Excel 中。（

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论