HPLC法测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量

1、描述：目的 测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量，为止咳定喘丸的质量研究提供依据。 方法 采用高相液相色谱（HPLC）法测定止咳平喘丸中苦杏仁的活性成分苦杏仁苷的含量；使用Agilent SB-C18（4.6 m.摘要 目的 测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量，为止咳定喘丸的质量研究提供依据。 方法 采用高相液相色谱（HPLC）法测定止咳平喘丸中苦杏仁的活性成分苦杏仁苷的含量；使用Agilent SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 m）色谱柱；以乙腈-0.1%磷酸（892）为流动相，流量1.0 

2、ml/min。 结果 建立了HPLC法测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量，苦杏仁苷进样量在0.08242.0600 g范围内，线性关系良好（r=0.9995），平均回收率为99.03%，RSD=2.25%（n=6）。 结论 该方法准确、重复性好，可用于止咳平喘丸的质量控制。 止咳平喘丸由苦杏仁（炒）、麻黄、石膏、紫苏子（炒）、厚朴（姜制）、陈皮、罂粟壳（蜜炙）、甘草、茶叶等中药材加工制成的复方纯中药制剂，收载于中华人民共和国卫生部药品标准中药方成制剂第三册。功能主治：清热宣肺，止咳平喘。用于咳嗽气喘，久咳不止。该药原标准过于简 

3、单，标准中只对其性状和检查项确定了检验标准，无其他检定方法，对其产品的内在质量无法控制。为控制止咳平喘丸的质量，本实验采用高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法拟建立止咳平喘丸的质量控制方法，为该制剂的质量控制提供方法，为定量指标提供依据。 1 材料与方法 1.1 实验仪器 岛津LC-2010A型高效液相色谱仪（包括LC-2010型紫外检测器）；LC Solution色谱工作站。 1.2 试剂与试药 乙腈为色谱

4、纯，其余试剂为分析纯，水为超纯水。苦杏仁苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110820-200403）；止咳定喘丸（东芝堂药业有限公司，批号：130203、130303、130403）。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱Agilent SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 m）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（892）；柱温：30；体积流量：1.0 ml/min；检测波长207 nm；进样量10 l。理论板数：按苦杏仁苷计算应不低于7000，外标法

5、计算含量。 2.2 溶液制备  对照品溶液 取苦杏仁苷对照品，加甲醇制成每毫升含80 g的溶液。  供试品溶液 取本品粉末3.5 g，精密称定，置塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，计算机网络设计摇匀，过滤，精密量取续滤液5 ml，置50 ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，用微孔滤膜（0.45 m）滤过，即得。  阴性对照液 

6、按处方及工艺制备不含苦杏仁的阴性样品，同供试品溶液的制备方法学考察阴性对照品溶液。 2.3 方法学考察  阴性干扰实验 取“2.2”项下3种溶液各10 l，分别注入高效液相色谱仪测定。结果色谱图中在苦杏仁苷峰相应的保留时间附近未检出干扰峰（图1）。   线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液1、5、10、15、20、25 l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以对照品进样量为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得回归方程为Y=117 632X-347 

7、;713，r=0.9995。结果表明，苦杏仁苷对照品进样量在0.08242.0600 g范围内与峰面积有良好的线性关系。  精密度试验 精密吸取对照品溶液10 l，重复进样6次，记录色谱图，按峰面积计算，结果RSD=0.18%，说明仪器精密度良好。  重现性试验 取同一批号样品6份，分别依法处理后测定。结果RSD=0.64%，表明该方法重复性良好。  稳定性试验 取同一批号样品溶液，在室温条件下放置，按上述色谱条件，分别于0、2、4、8、12、24 h进样，测得峰面积值RSD

8、=0.78%，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。  加样回收率试验 精密称取已知含量的供试品（批号：130203，苦杏仁苷含量为3.28 mg/g）6份，每份0.5 g，精密加入苦杏仁苷对照品溶液（0.1950 mg/ml）2 ml，按供试品溶液方法制备，依法测定含量并计算回收率（表1）。 2.4 样品含量的测定 取3批样品，按供试品溶液方法制备，分别进样10 l，依法测定，采用外标法计算样品中苦杏仁苷的含量（表2）。 3 讨论 本实验中，苦杏

9、仁苷在207 nm处有最大吸收，选用207 nm作检测波长，苦杏仁苷峰有最大峰面积，其他组分在此无干扰吸收。 苦杏仁苷的含量测定方法现多用HPLC法。在实验过程中，曾按照参考文献，用各种比例的甲醇-水、乙腈-水作流动相，发现系统的稳定性 太差，无法检测，且出现双齿峰，改用乙腈-水后，得到单峰，稳定性明显改善，且灵敏度也有所提高，苦杏仁苷色谱峰基本上达到了基线分离。经过反 复实验，最终建立了适合本品的含量测定方法，流动相比例为乙腈-0.1%磷酸（892）。 综合考虑提取分离中药有效成分常用的各种方法的优缺点，本实验以甲醇为溶剂，由于溶剂浸提法、回流提取法和索式提取法提取时间较长，超声提取法提取时间短，且无其他组分峰干扰，因此选择超声提取法作为止咳平喘丸中苦杏仁苷的提取方法。 经笔者调研发现，在气候变化明显的季节，尤其是秋冬季节，咳嗽气喘的患者很多。此药功能主治为清热宣肺，止咳平喘。用于咳嗽气喘，久咳不止。