耐头孢哌酮舒巴坦鲍曼不动杆菌的分子流行病学调查

1、耐头孢哌酮/舒巴坦鲍曼不动杆菌的分子流行病学调查         09-08-27 14:29:00     作者：卓超 杨青    编辑：studa20【摘要】  目的 调查重庆某三甲医院2004年11月至2005年9月显著增多的耐头孢哌酮/舒巴坦鲍曼不动杆菌之间的同源性，了解是否有该耐药株暴发流行。方法 用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对28株具有相同耐药模式的耐头孢哌酮/舒巴坦鲍曼不动杆菌进行分型，明确其是否为同一菌株的克隆

2、。结果 28株鲍曼不动杆菌PFGE图谱分为A(A1、A2、A3)、B(B1、B2)、C、D、E五型，其中主要流行型A1亚型11株，流行型B1亚型9株，剩余8株中A2亚型2株，A3亚型2株，B2亚型1株，C型2株，E型1株。A1亚型和B1亚型来源于呼吸科，并在外科病区的胸外科、脑外科、肝胆外科已存在9个月左右；A2亚型、A3亚型、B2亚型和C型2株于2005年6月开始出现于胸外科和肝胆外科。结论 2004年11月至2005年9月该院出现了由2个克隆株引起耐头孢哌酮/舒巴坦鲍曼不动杆菌的暴发流行，结合临床资料和科室地理位置分析，医务人员的手污染可能是引起本次暴发感染的重要感染源和感染途径。 【关键

3、词】  不动杆菌属； 头孢哌酮/舒巴坦； 耐药性； 脉冲场凝胶电泳    ABSTRACT  Objective  To learn an outbreak of Acinetobacer baumannii by investigating the homogeneity of the unusually increasing cefoperazone/sulbactam -resistant Acinetobacer baumannii isolates from November 2004 to September 2005 i

4、n a hospital in Chongqing.  Methods  The pulse-field gel electrophoresis (PFGE) was used for genotyping of 28 strains of Acinetobacer baumannii with the same resistance pattern and determining whether they derived from the same clone.  Results  Twenty eight strains were classifie

5、d into 5 types based on PFGE profiles, named type A (A1, A2 and A3), B (B1 and B2), C, type D and E. There were 11 strains typing A1 and 9 strains typing B1 respectively, and the rest were identified: two in type A2, two in type A3, one in type B2, two in type C and one in type E. Both type A1 and t

6、ype B1 originated from respira-tory department were transmitted to deparments of cerebral surgery, chest surgery and hepatobiliary surgery during 9 months, while type A2, type A3, type B1 and type C have existed in departments of chest surgery and hepatobiliary surgery since June 2005.  Conclus

7、ions  An outbreak of cefoperazone/sulbactam -resistant Acinetobacter baumannii infection occurred in our hospital from November 2004 to September 2005, which was caused by two major clones, type A and type B. Combined with clinical data and epidemic location, the investigation showed that conta

8、minated hands of staffs may be the infective origin and the route of transmission.    KEY WORDS  Acinetobacter;  cefoperazone/sulbactam;  Resistance;  PFGE    鲍曼不动杆菌是院内感染的重要病原菌，在医院环境中可长期存在，特别是机体抵抗力下降或免疫功能受损时更易出现相关的院内感染。由于存在多种耐药机制，临床常表现为多重耐药性。头孢哌酮/舒巴坦

9、对鲍曼不动杆菌有良好的体外抗菌活性，而且对近年出现的碳青霉烯类耐药株也部分敏感1，被认为是治疗鲍曼不动杆菌感染的优选药物。    2004年11月至2005年9月，重庆某三甲医院在执行细菌耐药监测计划研究中发现该院分离的鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦耐药率较其它单位明显偏高，敏感率仅为36.8%(25/68)，其中有28株菌表现为相同的耐药模式：仅对亚胺培南和美罗培南敏感，而对包括头孢哌酮/舒巴坦在内的第三代头孢菌素、氨基糖苷类和喹诺酮类耐药。为证实这些菌株之间可能存在医院内小范围的暴发，用公认的判断细菌同源性金标准-脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行基因分型，并结合

10、临床资料和耐药模式，了解感染源头及感染途径。    1  材料与方法    1.1  材料    (1)菌株  收集2004年11月至2005年12月重庆某三甲医院临床分离的具有相同耐药模式的、头孢哌酮/舒巴坦耐药而亚胺培南和美罗培南敏感的鲍曼不动杆菌28株(排除同一患者同一部位重复分离的菌株)，以同一时期的对头孢哌酮/舒巴坦敏感的鲍曼不动杆菌301号为阴性对照株。菌种鉴定采用VITEK2系统(Bio-Merieux，法国)及常规生化方法。   

11、 (2)仪器与试剂  CHEF-Mapper XA型脉冲电泳仪购于美国Bio-Rad公司；蛋白酶K为GIBCOBRL公司产品；ApaI为Promega产品；所有药敏纸片购自BD公司。    (3)临床调查  回顾性分析了28例患者的病例资料，了解其基本情况、所患疾病、诊疗经过、细菌学检查等。    1.2  方法    脉冲场凝胶电泳(PFGE)操作过程参照Seifert报道方法2，略加改进。细菌DNA原位纯化：将细菌与等体积2%低熔点琼脂糖混匀后注模，成型凝胶块分别经蛋白酶

12、K溶液裂解、PMSF溶液处理后，置于4过夜；限制性内切酶原位消化：将原位纯化的凝胶块切成一定大小薄片，加入含50IU ApaI的孵育缓冲液37酶切过夜；上样：采用梳齿上样法，将消化好的样本凝胶块和条带标记物(CHEF DNA size standard，Bio-Rad)凝胶块上样于1%电泳琼脂糖凝胶；电泳：使用CHEF MapperXA电泳系统(Bio-Rad)。电泳条件：6v/cm，22h，脉冲时间520s，角度120°；染色及图像采集：凝胶于0.25mg/ml溴化乙锭中染色漂洗后，采用凝胶成像系统(Bio-Rad)采集凝胶DNA指纹图像；菌株DNA同源性判定标准：参照Tenove

13、r等3的肉眼判定标准：a)无法区分：0条带不同；b)紧密相关：23条带不同；c)有可能有关：46条带不同；d)不同：7条带不同。带型差异3条带的菌株被认为基因组高度同源，属同一克隆，在流行病学上密切相关。    2  结果    2.1  临床资料调查结果    28株耐头孢哌酮/舒巴坦鲍曼不动杆菌来源于三个不同的病区：外科病区16株，传染呼吸病区10株，内科病区2株；其中来自监护病房(ICU)13株，来自普通病房15株；23株来源于痰标本(含1份气管抽吸物)，2株来源于尿标本，2株来

14、源于脓液，1株来源于伤口分泌物。所有患者都存在以下一种以上严重的基础疾病：呼吸衰竭、慢性阻塞性肺气肿、肺癌、脑出血、脑挫裂伤、肝移植术后和胸腹腔大手术等。所有患者在药敏结果出来之前使用过头孢哌酮/舒巴坦。    2.2  PFGE结果    ApaI可将鲍曼不动杆菌DNA切成约15条以上条带。阴性对照301号有7条以上不同条带，故可断定与其余各株无关(图略)。28株鲍曼不动杆菌分为A(A1、A2、A3)型15株、B(B1、B2)型9株、C型2株、D型1株、E型1株，A型中有11株条带完全一致，为同一克隆株，定义为A1亚型；有

15、2株条带完全一样，与A1相差1个条带，定义为A2亚型；有2株菌与A1、A2相差23个条带，定义为A3亚型。按同样标准，B型有B1亚型8株，B2亚型1株(图1)。    2.3  菌株临床分布与基因分型的关系    由表1可见，在调查的11个月中，该院存在耐头孢哌酮/舒巴坦鲍曼不动杆菌的暴发流行。主要表现为两个大流行株：A型和B型，两者占调查菌株的85.7%，其中A1亚型和B1亚型占67.9%。A型和B型主要分布于传染呼吸病区的呼吸科和外科病区的脑外科、胸外科及肝胆外科。A1亚型主要出自于呼吸科监护病房(RICU)，存在时间达半