血清学实验教学

1、血清学实验原理及应用血清学实验原理及应用血清学实验的建立及概念血清学实验的建立及概念1883年 俄国动物学家 发现白细胞吞噬作用1890年 德国医师、日本学者 发现白喉抗毒素1894年 比利时血清学家 发现补体1896年 H. Durham 发现凝集反应1897年 R. Kraus 发现沉淀反应1900年 K. Landsteiner 发现ABO血型1900年 J. Bordet 发现补体结合反应1900s 英国医师 发现调理素1945年 R.Owen 同卵双生的两只小牛的不同血型可以相互耐受1948年 C.Snell 发现组织相容性抗原1953年 R.Billingham 成功进行了人工耐受

2、试验1956年 Witebsky 建立自身免疫动物模型1980s 发现众多细胞因子， 受体、基因及其生物活性研究 建立细胞免疫学说建立细胞免疫学说免疫学（抗感染免疫）免疫学（抗感染免疫）血清学实验血清学实验建立体液免疫学说建立体液免疫学说免疫学免疫学免疫学（分子免疫学）免疫学（分子免疫学）抗原抗体结合反应 血清学反应的实质血清学反应的实质血清学实验的基本原理血清学实验的基本原理n分子表面结合（非共价键结合）n亲水胶体转化为疏水胶体水化膜电荷血清学反应的特点血清学反应的特点n特异性n可逆性n比例性n反应的阶段性特异性结合阶段可见反应阶段影响血清学反应的因素影响血清学反应的因素n抗原抗体本身的性质

3、n电解质n酸碱度n温度血清学反应的优缺点n不需要特殊仪器设备，操作简便。n灵敏度低，绝大多数为定性测定。血清学试验的应用n传染病、寄生虫病、肿瘤、自身免疫病、变态反应性疾病的确诊 n疫苗免疫效果监测 n人群免疫水平监测n生物活性物质的超微定量、物种及微生物鉴定和分型 n基因分离，克隆筛选，表达产物的定性、定量分析和纯化等，已经成为现代分子生物学研究的重要手段 抗原抗体反应类型反应类型实验技术判断方法凝集反应直接凝集试验间接凝集试验凝集抑制试验肉眼或放大镜或显微镜观察出现的凝集现象协同凝集试验抗球蛋白试验冷凝集素试验液相沉淀试验观察沉淀环沉淀反应琼脂扩散试验观察沉淀线或沉淀环琼脂电泳技术观察沉淀

4、峰或沉淀弧补体参与的反应补体溶血试验观察或测定溶血现象补体结合试验中和反应病毒中和试验观察毒性丧失情况毒素中和试验荧光免疫技术检测荧光放射免疫技术检测放射性强弱免疫标记技术酶标记免疫技术检测酶催化的显色反应发光免疫技术检测发光强度金标免疫技术检测金颗粒沉淀抗原抗体反应类型反应类型实验技术判断方法凝集反应直接凝集试验间接凝集试验凝集抑制试验肉眼或放大镜或显微镜观察出现的凝集现象协同凝集试验抗球蛋白试验冷凝集素试验液相沉淀试验观察沉淀环沉淀反应琼脂扩散试验观察沉淀线或沉淀环琼脂电泳技术观察沉淀峰或沉淀弧补体参与的反应补体溶血试验观察或测定溶血现象补体结合试验中和反应病毒中和试验观察毒性丧失情况毒素

5、中和试验荧光免疫技术检测荧光放射免疫技术检测放射性强弱免疫标记技术酶标记免疫技术检测酶催化的显色反应发光免疫技术检测发光强度金标免疫技术检测金颗粒沉淀ELISA的基本原理 ELISA-enzyme-linked-immunosorbent assay 以酶作为标记指示物、以抗原抗体反应为基础的固相吸附测定方法。 固相支持物及包被的抗原或抗体、 酶标记的抗体或抗原、 酶反应底物。ELISA原理示意图原理示意图ELISA测定常用模式n双抗体夹心法测抗原n双抗原夹心法测抗体n竞争法测抗原n竞争法测抗体n间接法测抗体n固相捕获法酶免疫试验的优点和局限性n优点1.特异性高2.灵敏性强3.操作简便4.试剂稳定5.对环境无污染n局限性1.影响及干扰试验因素多2.定性ELISA试验中cutoff值3.“灰区”样本的确定血清学试验的发展趋向n反应的微量化和自动化 n方法的标准化和试剂的商品化n技术的敏感、特异和精密化n检测技术的系列化n方法简便快速 参考文