Elisa试剂盒常见问题讨论哪家的Elisa试剂盒好

1、生e网专业的生物成果转化、交易平台（）           2010.11.20    09:30简简单单2006: 您好,我现在准备用ELISA法夹心法测人血清中IL-1,IL-6,CRP,TNF,但是对具体操作还有些很低级的问题,请问:1.预实验时,标准品的浓度怎样确定?梯度做几个,需要做空白孔吗?复孔要做吗?2.样本的梯度作几个?稀释倍数确定的依据时什么?3.我测的样本中TNF量很低,国外有人用高敏试剂盒,国内有用化学发光法,您知道有没有更经济的方法?多谢!请

2、问简简单单2006：双抗夹心法中，最后TMB用硫酸终止，测量OD450的时候是用单波长450nm还是双波长测量？如果是后者，参考波长是哪个？630nm可以吗？我阴性阳性血清都是从1：50开始被比稀释，到1：25600，阳性OD值都在1.0以上，1.7以下。阴性值在0.3以下。0.2的不多，多数在0.1及其以下。我的血清效价这么高，但是怎么OD值到不了别人说的2或者3呢？简简单单2006：谢谢你的帮助我是用间接ELISA检测人补体C1q 抗体，还想请教简简单单2006我的预实验是这样的1、用pH9.6,0.05M的碳酸盐稀释抗原C1q,10ug/mL,5ug/mL,2.5ug/mL100uL/孔

3、，4度过夜，PBST洗板三次2、用10%的小牛血清（pH7.2的PBS），200uL/孔，37度3h,PBST洗板三次3、加入阴阳性血清100uL/孔，37度，2h，PBST洗板五次4、 PBST(含1%的小牛血清)稀释酶标记的羊抗人IgG1:10000,1:20000, 1:40000,100uL/孔 ,37度，半小时结果：   10ug/mL  5ug/mL  2.5ug/mL1:10000 +   0.983  0.740  0.7141:10000 - &#

4、160; 0.577  0.676  0.5761:10000空白 0.180  0.134  0.0971:20000 +   0.508  0.506  0.3671:20000 -   0.333  0.385  0.3131:20000空白 0.085  0.094  0.0781:40000 +   0.331 

5、60;0.379  0.2291:40000 -   0.233  0.303  0.2611:40000空白0.061  0.068  0.06请简简单单2006帮忙分析，谢谢。用Elisa试剂盒的时候我该怎么选择包被浓度，酶的浓度以及封闭的条件如何，多谢简简单单2006 :你好我们现在的实验是从肝组织匀浆中检测TNF-a,但好几次预试的结果,TNF-a的含量都超过了Elisa试剂盒的上限,我们的Elisa试剂盒是从晶美买的,肝匀浆的浓度从 1:10 1:20 1:40 到

6、1:100 1:200都没有很大的区别,匀浆用的是PBS,匀浆方法用的是先用匀浆器研碎,再在-86度冰箱反复冻融3次,其余均严格按Elisa试剂盒内说明操作,请问这可能是哪一步出了问题?或是肝匀浆本身也会导致假阳性结果?如何才能解决?谢谢了,在线等!简简单单2006 :你好能不能说一点点关于Elisa试剂盒保护液的配方。gsljz wrote:请问楼主：我想自己做某个抗原成份的elisa试剂，即自己包被酶标板，没有抗原做标准品怎么办？是否需要去买？做ELISA试剂一定要有标准品，没有的话就无法评价这个试剂的好坏。你的抗原成分是从什么来源的？想办法自己做一点可以吗？shunshun wrote:

7、简简单单2006: 您好,我现在准备用ELISA法夹心法测人血清中IL-1,IL-6,CRP,TNF,但是对具体操作还有些很低级的问题,请问:1.预实验时,标准品的浓度怎样确定?梯度做几个,需要做空白孔吗?复孔要做吗?2.样本的梯度作几个?稀释倍数确定的依据时什么?3.我测的样本中TNF量很低,国外有人用高敏试剂盒,国内有用化学发光法,您知道有没有更经济的方法?多谢!标准品最好是买国家标准品然后自己稀释，如果没有，可以自己稀释了以后找一些国际公认的定量试剂盒来定标。标准品最好做复孔，特别在试验初期，如果你的显色剂很稳定的话，空白孔可做可不作。在自己试验时标准品浓度可以不用太多，三个（高中低）即

8、可。你样本中TNF的量低到什么程度，一般好的ELISA可以测到ng级别，再小的话就不行了。化学发光法以及比较经济了，你还可以试试生物素亲和素放大的酶免法，可以提高很多灵敏度的。kcid wrote:请问简简单单2006：双抗夹心法中，最后TMB用硫酸终止，测量OD450的时候是用单波长450nm还是双波长测量？如果是后者，参考波长是哪个？630nm可以吗？如果有条件的话，就用双波长 450，630如果没有，单波长也可以crystal2006 wrote:我阴性阳性血清都是从1：50开始被比稀释，到1：25600，阳性OD值都在1.0以上，1.7以下。阴性值在0.3以下。0.2的不多，多数在0.

9、1及其以下。我的血清效价这么高，但是怎么OD值到不了别人说的2或者3呢？如果你的1：50 OD是1.7， 到了1：25600，OD还有1.0以上的话，这个结果或者你的系统有问题，你是用什么稀释的，稀释液的OD是多少？coloursofwind wrote:简简单单2006：谢谢你的帮助我是用间接ELISA检测人补体C1q 抗体，还想请教简简单单2006我的预实验是这样的1、用pH9.6,0.05M的碳酸盐稀释抗原C1q,10ug/mL,5ug/mL,2.5ug/mL100uL/孔，4度过夜，PBST洗板三次2、用10%的小牛血清（pH7.2的PBS），200uL/孔，37度3h,PBST洗板三

10、次3、加入阴阳性血清100uL/孔，37度，2h，PBST洗板五次4、 PBST(含1%的小牛血清)稀释酶标记的羊抗人IgG1:10000,1:20000, 1:40000,100uL/孔 ,37度，半小时结果： 10ug/mL 5ug/mL 2.5ug/mL1:10000 + 0.983 0.740 0.7141:10000 - 0.577 0.676 0.5761:10000空白 0.180 0.134 0.0971:20000 + 0.508 0.506 0.3671:20000 - 0.333 0.385 0.3131:20000空白 0.085 0.094 0.0781:40000

11、+ 0.331 0.379 0.2291:40000 - 0.233 0.303 0.2611:40000空白0.061 0.068 0.06请简简单单2006帮忙分析，谢谢。我该怎么选择包被浓度，酶的浓度以及封闭的条件如何，多谢1）在包被过程和封闭以后，洗1次就可以了2）你这个结果说明你的酶标抗体和包被的反应板有一些非特异性吸附，建议你将封闭换成1的BSA或者5的脱脂奶粉，在酶标抗体的稀释液中将小牛血清的浓度增加到20。3）间接法的话，血清需要稀释，你的阴性、阳性血清稀释了吗，如果没有的话，建议1：10到1：100，不同的稀释度你试试。如果你本来没有，要稀释后再做的话，根据你目前的结果，估计

12、你要提高包被浓度或者酶标抗体浓度。yangji wrote:简简单单2006 :你好我们现在的实验是从肝组织匀浆中检测TNF-a,但好几次预试的结果,TNF-a的含量都超过了试剂盒的上限,我们的试剂盒是从晶美买的,肝匀浆的浓度从 1:10 1:20 1:40 到1:100 1:200都没有很大的区别,匀浆用的是PBS,匀浆方法用的是先用匀浆器研碎,再在-86度冰箱反复冻融3次,其余均严格按试剂盒内说明操作,请问这可能是哪一步出了问题?或是肝匀浆本身也会导致假阳性结果?如何才能解决?谢谢了,在线等!这个我没有做过，不知道肝匀浆本身是否会导致假阳性结果，你可以试试看用1：200匀浆后得到的匀浆液再

13、用PBS稀释，稀释的比例大一些，再用试剂盒测一下，会有什么结果？天天知道 wrote:简简单单2006 :你好能不能说一点点关于保护液的配方。这个比较不方便非常感谢！简简单单2006 :你好，向您请教几个我一直都没有弄明白的几个问题，谢谢！1、我看见有的夹心ELISA试剂盒中检测抗体和捕获抗体为一种抗体，而不是分别针对待测抗原的不同表位的一对抗体。我不理解的地方是：捕获抗体把抗原上的表位都结合完了，检测抗体怎么能与抗原结合呢？2、在网上可以搜索到有关夹心ELISA检测TNF、CEA、IL2、IL8等说明书（都是来源于第四军医大学的产品），我发现它们所用的稀释液配方都不一样，差别很大。TNF-a

14、的稀释液：PBS 100ml；BSA(牛血清白蛋白) 0.1g。IL-6的稀释液：洗涤液 100ml ; BSA(牛血清白蛋白) 0.1g。IL-8的稀释液：洗涤液 100 ml；PEG(聚乙二醇，MW6000) 3.0g。我想知道是根据什么原则来选择稀释液的组成？有没有可以通用的啊？谢谢！简简单单2006，你好！我是干临床的，对实验不熟悉，有几个简单的问题想请教一下：要测血清VEGF水平，采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法，试剂盒是96孔的，我要大概测5060个患者，收集病例需要时间，请问血清最长可以在冰箱里放置多长时间？另外分多少次做比较合适？谢谢！我用PBST加了1%BSA作为稀释液。稀释

15、液的OD值没有测过，但是用同样的稀释液作其他的样品就不是这样子的。八月桂花 wrote:简简单单2006 :你好，向您请教几个我一直都没有弄明白的几个问题，谢谢！1、我看见有的夹心ELISA试剂盒中检测抗体和捕获抗体为一种抗体，而不是分别针对待测抗原的不同表位的一对抗体。我不理解的地方是：捕获抗体把抗原上的表位都结合完了，检测抗体怎么能与抗原结合呢？2、在网上可以搜索到有关夹心ELISA检测TNF、CEA、IL2、IL8等说明书（都是来源于第四军医大学的产品），我发现它们所用的稀释液配方都不一样，差别很大。TNF-a的稀释液：PBS 100ml；BSA(牛血清白蛋白) 0.1g。IL-6的稀释

16、液：洗涤液 100ml ; BSA(牛血清白蛋白) 0.1g。IL-8的稀释液：洗涤液 100 ml；PEG(聚乙二醇，MW6000) 3.0g。我想知道是根据什么原则来选择稀释液的组成？有没有可以通用的啊？谢谢！1)正常情况下，双抗体夹心法中使用的包被抗体和酶标记抗体肯定不是同一个抗体，如果是同一个的话，会有很强的竞争，应该是无法做的。你是怎么知道别人试剂盒中使用的是同一个抗体的呢，这应该是无法了解的呀？2）稀释液基本上是和所使用的原料有关，不同的原料组成的检测相同物质的试剂盒所使用的稀释液就可能不同。从你提供的数据看，IL-6的稀释液应该只比TNF-a多了个Tween20而已，差别不是很大

17、。至于选BSA还是PEG那就和原料有很大关系了omphalos wrote:简简单单2006，你好！我是干临床的，对实验不熟悉，有几个简单的问题想请教一下：要测血清VEGF水平，采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法，试剂盒是96孔的，我要大概测5060个患者，收集病例需要时间，请问血清最长可以在冰箱里放置多长时间？另外分多少次做比较合适？谢谢！这要看你测的VEGF最血清中是否稳定了crystal2006 wrote:我用PBST加了1%BSA作为稀释液。稀释液的OD值没有测过，但是用同样的稀释液作其他的样品就不是这样子的。你这个结果重复过吗，有一个原则，就是你往低浓度稀释的话，OD值肯定应该会下降

18、，且如果系统工艺好的话，应该可以稀释到0.1以下的，因为低于试剂盒的灵敏度了，如果你怎么稀释都有1.0，那肯定是哪里出问题了我的这个结果重复过多次，不是永远稀释都降不下去，可以降下去的。我想问的就是为什么我效价这么高的血清1：50稀释的OD值都不是2以上呢？我从来没有做到2.0以上的值！还有一个问题，就是我配TMB时是用DMSO配成10mg/ml来用，但是最近两次配TMB时，配好放到4度后总是凝起来了，感觉像是温度太低冻住了，不知是什么原因？简简单单2006:您好我买的CRP的试剂盒灵敏度为1.6ng/ml, 文献中我所测的样本中crp的浓度大致在0.18-7.97mg/l,而试剂盒中标准品的

19、浓度是配好的,分别为:10,30,100,250,500ng /ml,这样我预试验时标准品应该怎样选择呢,做几个梯度呢?样本我想用原浓度,还需要再做稀释吗?同样的IL-6试剂盒灵敏度为2pg/ml,而文献中浓度范围在0.92-2.85pg/ml, 试剂盒推荐标准品的浓度为:250pg/ml,125, 62.5, 31.5, 15.625, 7.8pg/ml,预试验应该怎样选择标准品和样本的呢?简简单单2006:您好我们实验室有做 Western用的一抗和二抗，请问可以用来做ELISA吗？（一抗是鼠单抗，二抗羊抗鼠抗体HRP）步骤：1、蛋白包被到板上；2、一抗孵育3、二抗孵育4、显色请问可以这样

20、做吗？简简单单2006:您好!我前段时间做了ELISA，测的是小鼠星形胶质细胞培养上清液内NGF和BDNF的值，参考国外文献用ELISA是可以测的。我买的是美国MARKET公司的用于测小鼠血清的成品试剂盒，是双抗夹心法。我按产品说明书上的方法步骤做了两遍，结果都差不多。所测样本的OD值都近似于标准品为0 pg/ml孔的值。我所测的标准品的值与说明书上提供的还比较接近，且近成直线。我所收集的样本也是参考国外文献用的是无血清培养基培养两天后收集的是我的样本的问题还是试剂盒 的问题？还是我的实验方法？。让人郁闷，请指教一二。crystal2006 wrote:我的这个结果重复过多次，不是永远稀释都降

21、不下去，可以降下去的。我想问的就是为什么我效价这么高的血清1：50稀释的OD值都不是2以上呢？我从来没有做到2.0以上的值！还有一个问题，就是我配TMB时是用DMSO配成10mg/ml来用，但是最近两次配TMB时，配好放到4度后总是凝起来了，感觉像是温度太低冻住了，不知是什么原因？如果一直都达不到2.0以上的结果，可能和你的原料有关。shunshun wrote:简简单单2006:您好我买的CRP的试剂盒灵敏度为1.6ng/ml, 文献中我所测的样本中crp的浓度大致在0.18-7.97mg/l,而试剂盒中标准品的浓度是配好的,分别为:10,30,100,250,500ng /ml,这样我预试

22、验时标准品应该怎样选择呢,做几个梯度呢?样本我想用原浓度,还需要再做稀释吗?同样的IL-6试剂盒灵敏度为2pg/ml,而文献中浓度范围在0.92-2.85pg/ml, 试剂盒推荐标准品的浓度为:250pg/ml,125, 62.5, 31.5, 15.625, 7.8pg/ml,预试验应该怎样选择标准品和样本的呢?0.18-7.97mg/l相当于0.18-7.97ug/ml，做定量试验的时候标准品都是要做的，这样才能够得到准确的结果，你要估计一下样品的浓度稀释到100250ng/ml左右，如果估计不出，就按你的范围的上下限分别稀释到大概这个浓度。同样的IL-6试剂盒灵敏度为2pg/ml，而你的

23、标本浓度在0.92-2.85pg/ml，这说明你的这个试剂盒不太能满足你这个标本的检测需要，灵敏度偏低，你可能需要更灵敏的试剂盒才能得到准确的结果healthlee wrote:简简单单2006:您好我们实验室有做 Western用的一抗和二抗，请问可以用来做ELISA吗？（一抗是鼠单抗，二抗羊抗鼠抗体HRP）步骤：1、蛋白包被到板上；2、一抗孵育3、二抗孵育4、显色请问可以这样做吗？一抗包被，蛋白是被测物，加入二抗（酶标记抗体）即双抗体夹心法，你可以看看相关资料yjwjxxw wrote:简简单单2006:您好!我前段时间做了ELISA，测的是小鼠星形胶质细胞培养上清液内NGF和BDNF的值

24、，参考国外文献用ELISA是可以测的。我买的是美国MARKET公司的用于测小鼠血清的成品试剂盒，是双抗夹心法。我按产品说明书上的方法步骤做了两遍，结果都差不多。所测样本的OD值都近似于标准品为0 pg/ml孔的值。我所测的标准品的值与说明书上提供的还比较接近，且近成直线。我所收集的样本也是参考国外文献用的是无血清培养基培养两天后收集的是我的样本的问题还是试剂盒 的问题？还是我的实验方法？。让人郁闷，请指教一二。如果你有其它标准品的话，就可以验证一下试剂盒是否准确。在没有其它任何标本的情况下，而试剂盒又比较可靠的话，我只能说你的标本可能有问题。还要请教您一个问题，我测IL-1.IL-6,TNF,CRP细胞因子，用血浆和血清哪个更好？如果必须用血浆用什么抗凝剂影响小？ 非常感谢简简单单2006 做过多肽包被吗，有什么样的心得想交流一下简简单单2006 您好，我正在做一个检测风湿病指标的试剂盒，用的是间接法。但做下来老感觉阴性值偏高，大部分为0.10.2，也有大于0.2的。通过拉大血清和酶标抗体的稀释度，可以把阴性值降下去，但阳性值也跟着降。我现在想通过一种办法，拉大阴阳性的差距，同时降低阴性值，望指教！我的实验程序如下：（1）用包被液（CBS）稀释包被抗原，10g/ml。（2）将加有抗原的包被液加入各孔，100l/孔。（3）4 16-18h.（4）甩去包被液，洗板三次，拍干，加