高二生物：1.2《基因工程的基本操作程序》精品课件(新人教版选修3)

1、导入导入接种培养接种培养接种培养接种培养接种接种培养培养含有四环素的含有四环素的完全培养基完全培养基完全培养基完全培养基大肠杆菌不含大肠杆菌不含抗四环素基因抗四环素基因证明：证明：不存活不存活含有四环素的含有四环素的完全培养基完全培养基证明：证明： 大肠杆菌大肠杆菌的受体细胞含的受体细胞含有目的基因有目的基因 四环素四环素抗性基因抗性基因 四环素四环素抗性基因抗性基因存活存活如何把导入了目的基因的受体细胞筛选出来？如何把导入了目的基因的受体细胞筛选出来？存活存活1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序1 1、目的基因的获取、目的基因的获取2 2、基因表达载体的构建、基因表达载体的构

2、建3 3、将目的基因导入受体细胞、将目的基因导入受体细胞4 4、目的基因的检测与鉴定、目的基因的检测与鉴定基因工程基本操作的四个步骤基因工程基本操作的四个步骤一、目的基因的获取一、目的基因的获取编码蛋白质的基因编码蛋白质的基因（二）、获取目的基因的常用方法有哪些（二）、获取目的基因的常用方法有哪些? ?1 1、从基因文库中获取、从基因文库中获取2 2、利用、利用PCRPCR技术扩增技术扩增3 3、人工合成、人工合成如：与生物抗性相关的基因、与优良品质相关的基因、如：与生物抗性相关的基因、与优良品质相关的基因、与生物药物和保健品相关的基因、与毒物降解相关的与生物药物和保健品相关的基因、与毒物降解

3、相关的基因、与工业用酶相关的基因。基因、与工业用酶相关的基因。也可以是一些具有调控作用的因子也可以是一些具有调控作用的因子(一一)、目的基因主要是、目的基因主要是_1.1.从基因文库中获取目的基因从基因文库中获取目的基因（1 1）. .基因文库基因文库 将含有某种生物不同基因的许多将含有某种生物不同基因的许多DNADNA片断，导入片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。不同基因，称为基因文库。种种类类基因组文库：基因组文库：含有一种生物的含有一种生物的全部全部基因基因部分基因文库：部分基因文库：只包含了一种生

4、物的只包含了一种生物的部分部分基因，基因， 如：如：cDNAcDNA文库文库提取某种生物的提取某种生物的全部全部DNADNA用适当的限制酶酶切用适当的限制酶酶切一定大小的一定大小的DNADNA片段片段将将DNADNA片段与载体连接片段与载体连接重组载体重组载体基因组文库基因组文库导入受体菌中储存导入受体菌中储存（2 2）. .基因文库的构建方法基因文库的构建方法基因组文库的构建基因组文库的构建提取某种生物的提取某种生物的某器官某器官或或特定发育时期特定发育时期的的mRNAmRNA单链单链DNADNA双链双链cDNAcDNA片段片段重组载体重组载体与载体连接与载体连接cDNAcDNA文库文库反（

5、逆）转录酶反（逆）转录酶DNADNA聚合酶聚合酶导入受体菌中储存导入受体菌中储存 cDNA文库的构建文库的构建-逆转录法：逆转录法： （cDNA）DNA聚合酶聚合酶例例1.1.构建基因组构建基因组DNADNA文库时，首先应分离细胞的（文库时，首先应分离细胞的（ ）A A、染色体、染色体DNADNA B B、线粒体、线粒体DNADNAC C、总、总mRNAmRNA D D、tRNA tRNA 例例2.2.目的基因可从基因文库中获得，下列有关基因文目的基因可从基因文库中获得，下列有关基因文库的描述正确的是（库的描述正确的是（ ）A A、某生物的全套基因就是一个基因文库、某生物的全套基因就是一个基因

6、文库B B、将含有某种生物不同的许多、将含有某种生物不同的许多DNADNA片段，导入某个生片段，导入某个生物体内，则这个生物就是一个基因文库物体内，则这个生物就是一个基因文库C C、含有一种生物所有基因的基因文库叫做基因组文库、含有一种生物所有基因的基因文库叫做基因组文库D D、含有一种生物的一部分基因的基因文库叫部分基因、含有一种生物的一部分基因的基因文库叫部分基因 文库，如文库，如cDNAcDNA文库文库ACD 怎样从基因文库中得到我们所怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢需的目的基因呢? ?依据：目的基因的有关信息。依据：目的基因的有关信息。如：根据基因的核苷酸序列如：根据基因的核苷

7、酸序列 基因的功能基因的功能 基因在染色体上的位置基因在染色体上的位置 基因的转录产物基因的转录产物mRNAmRNA 基因翻译产物蛋白质等特性基因翻译产物蛋白质等特性（3 3）从基因文库中得到目的基因的方法）从基因文库中得到目的基因的方法某生物体内全部某生物体内全部DNADNA 许多许多DNADNA片段片段受体菌群体受体菌群体限制酶限制酶与运载体连接导入与运载体连接导入基因组文库基因组文库cDNAcDNA反转录反转录受体菌群体受体菌群体与运载体连接导入与运载体连接导入部分基因文库部分基因文库（cDNA文库）文库）基因组基因组DNADNA文库与文库与cDNAcDNA文库的比较文库的比较某种生物某

8、个时期的某种生物某个时期的mRNAmRNA基因组基因组DNADNA文库文库cDNAcDNA文库文库基因组基因组DNADNA文库与文库与cDNAcDNA文库的比较文库的比较2 2、利用、利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因 概念：概念：PCRPCR全称为全称为_，是一项，是一项 在生物在生物_复制复制_的核酸合成技术。的核酸合成技术。 原理：原理：_多聚酶链式反应多聚酶链式反应体外体外特定特定DNADNA片段片段DNADNA复制复制：模板模板DNADNA、解旋酶、解旋酶、ATPATP、DNADNA聚合酶、聚合酶、DNADNA连接酶。连接酶。PCR技术技术 原理：原理： 前提：前提：

9、条件：条件： 优点优点 过程：过程：PCR扩增仪扩增仪DNA复制复制已知目的基因的一段核苷酸序列已知目的基因的一段核苷酸序列：以：以_方式扩增，方式扩增， 在短时间内大量扩增目的基因在短时间内大量扩增目的基因指数指数模板模板DNADNA；引物；四种脱氧核苷酸；引物；四种脱氧核苷酸；热稳定热稳定DNADNA聚合酶（聚合酶（TaqTaq酶）。酶）。变性变性 复性复性延伸延伸多次重多次重复循环复循环过程：过程：a a、DNADNA变性变性（90-9590-95）：）：双链双链DNADNA模板在热作用下，模板在热作用下，_断裂，形成断裂，形成_b b、复性、复性（复性复性55-6555-65）：）：系

10、统温度降低，系统温度降低，引物引物与与DNADNA模板结合，形成局部模板结合，形成局部_。 c c、延伸、延伸（70-7570-75）：在）：在热稳定热稳定DNADNA酶酶的作用下，合的作用下，合成与模板互补的成与模板互补的_。 氢键氢键单链单链DNADNA双链双链DNADNA链链d. .重复循环重复循环a.b.ca.b.c步骤：每步骤：每重复一次，目的基因增加重复一次，目的基因增加_倍倍一一方式：以方式：以_方式扩增，即方式扩增，即_（n n为扩增循为扩增循环的次数）环的次数）条件：条件：_、 _、_ _ 、 _ _ 。前提前提_ _ 结果：结果：模板模板DNA(DNA(含目的基因含目的基因

11、) )四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸一对引物一对引物热稳定热稳定DNADNA聚合酶聚合酶指数指数2 2n n使使_在短时间内成百万倍地扩增。在短时间内成百万倍地扩增。要有一段已知基因的核苷酸序要有一段已知基因的核苷酸序列列含目的基因的含目的基因的DNADNA片段片段 加热至加热至95摄氏度的目的是使摄氏度的目的是使DNA中的中的 断断裂，这一过程在细胞内是通过裂，这一过程在细胞内是通过 的作用来完的作用来完成的。成的。 当温度降低时，引物与模板末端结合，在当温度降低时，引物与模板末端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最后合成聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最后合成2个个DNA分子，此

12、过程中的原料分子，此过程中的原料 ，遵循的，遵循的原则是原则是 。 Taq酶的特点是（酶的特点是（ ） A.耐强酸耐强酸 B.耐强碱耐强碱 C.耐高温耐高温 D.最适温度最适温度37摄氏度摄氏度4.请指出请指出PCR技术与技术与DNA复制过程的区别复制过程的区别 DNA复制复制PCR技术技术场所场所原理原理条件条件解旋方式解旋方式酶酶特点特点结果结果PCR技术扩增与技术扩增与DNA复制的比较复制的比较碱基互补配对原则碱基互补配对原则DNADNA双链复制的原则双链复制的原则四种脱氧核苷酸、模四种脱氧核苷酸、模板、酶、板、酶、ATPATP、引物引物四种脱氧核苷酸、四种脱氧核苷酸、模板、酶、模板、酶

13、、引物引物DNADNA在高温下变性解旋在高温下变性解旋解旋酶催化解旋解旋酶催化解旋半保留复制、半保留复制、边解旋变复制边解旋变复制半保留复制、半保留复制、全解旋再复制全解旋再复制体外复制体外复制主要在细胞核内主要在细胞核内大量的大量的DNADNA片段片段形成整个形成整个DNADNA分子分子热稳定的热稳定的DNADNA聚合酶聚合酶细胞内的细胞内的DNADNA聚合酶、聚合酶、解旋酶等解旋酶等例例5.5.在遗传工程中，若有一个控制有利性状的在遗传工程中，若有一个控制有利性状的DNADNA分分子片段为子片段为ATGTGATGTGTACACTACAC，要使其数量增多，可用，要使其数量增多，可用PCRPC

14、R技术进行人工复制，复制时应给予的条件是（技术进行人工复制，复制时应给予的条件是（ ） 双链双链DNADNA分子为模板分子为模板 ATGTGATGTG或或TACACTACAC模板链模板链 四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸 四种核苷酸四种核苷酸 DNADNA聚合酶聚合酶 热稳定热稳定DNADNA聚合酶聚合酶引物引物 温度变化温度变化 恒温恒温A A B BC C D DD反转录法反转录法目的基因的信使目的基因的信使RNARNA目的基因目的基因化学合成法化学合成法肽链氨基酸序列肽链氨基酸序列信使信使RNARNA序列序列基因的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因目的基因合成合成人工合成法（人工合成法（真核

15、生物真核生物）推测推测推测推测单链单链DNADNA合成合成3、人工合成法：、人工合成法： 在在基因较小，核苷酸序列已知的情况下，基因较小，核苷酸序列已知的情况下，可以利用可以利用DNADNA合成仪人工合成合成仪人工合成合成合成一、目的基因的获取一、目的基因的获取1 1、从基因文库中获取、从基因文库中获取2 2、利用、利用PCRPCR技术扩增技术扩增3 3、人工合成、人工合成种种类类基因组文库：基因组文库：含有一种生物的含有一种生物的全部全部基因基因部分基因文库：部分基因文库：只包含了一种生物的只包含了一种生物的部分部分基因，基因， 如：如：cDNA文库文库课堂小结：课堂小结：2 2、下列属于获

16、取目的真核生物基因的方法的是、下列属于获取目的真核生物基因的方法的是( )( )利用利用mRNAmRNA反转录形成反转录形成 从基因组文库中提取从基因组文库中提取从受体细胞中提取从受体细胞中提取 利用利用PCRPCR技术技术 利用利用DNADNA转录转录 人工合成人工合成A.A. B. B. C.C. D. D.1 1在已知基因的核苷酸序列的情况下，获取目的基因在已知基因的核苷酸序列的情况下，获取目的基因的最方便方法是的最方便方法是A A、化学合成法、化学合成法 B B、基因组文库法、基因组文库法 C C、CDNACDNA文库法文库法 D D、聚合酶链反应、聚合酶链反应3 3、 在基因工程中，

17、把选出的一个目的基因（共在基因工程中，把选出的一个目的基因（共10001000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌岭脱氧核苷酸是个脱氧核苷酸对，其中腺嘌岭脱氧核苷酸是460460个）放入个）放入DNADNA扩增仪中扩增扩增仪中扩增4 4次，那么，在扩增仪中次，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是（应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是（ ）A. 540 B. 8100 C. 17280 D. 75601 1、基因表达载体的作用、基因表达载体的作用a、使目的基因在受体细胞中、使目的基因在受体细胞中稳定存在稳定存在并并遗传遗传给子代给子代b、同时使目的基因能、同时使目的基因能表达和发挥作用表达和发挥作用看看

18、P11P11询根问底询根问底（1 1）用一定的）用一定的_切切割质粒，使其出现一个切口，割质粒，使其出现一个切口，露出露出_。（2 2）用）用_切断目切断目 的基因，使其产生的基因，使其产生_ _ _。（3 3）将切下的目的基因片段插入质粒的）将切下的目的基因片段插入质粒的_处，再加入适量处，再加入适量_，形成了一个重组，形成了一个重组 DNADNA分子（重组质粒）分子（重组质粒）限制酶限制酶黏性末端黏性末端同一种限制酶同一种限制酶的黏性末端的黏性末端切口切口DNADNA连接酶连接酶相同相同2.2.过程过程: :质粒质粒目的基因目的基因限制酶处理限制酶处理一个切口一个切口两个黏性末端两个黏性末

19、端两个切口两个切口获得目的基因获得目的基因DNADNA连接酶连接酶表表达达载载体体同一种同一种3.3.基因表达载体的组成：基因表达载体的组成：它们所处的位置和有什么作用？它们所处的位置和有什么作用？a、目的基因、目的基因b、启动子、启动子c、终止子、终止子d、标记基因、标记基因位于基因的位于基因的首端首端, ,是是RNARNA聚合酶的识别聚合酶的识别和结合部位和结合部位, ,驱动基驱动基因转录成因转录成mRNAmRNA位于基因的位于基因的末端末端, ,终终止转录止转录鉴别受体细胞中是否含有目的基因鉴别受体细胞中是否含有目的基因载体载体与与表达载体表达载体的区别：二者都有标记基因的区别：二者都有

20、标记基因和复制原点两部分和复制原点两部分DNADNA片段。表达载体在载体片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构分结构用到的工具酶：用到的工具酶：既用到限制酶切割载体和含既用到限制酶切割载体和含有目的基因的有目的基因的DNADNA片段，又用到片段，又用到DNADNA连接酶将目连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键磷酸二酯键启动子、终止子启动子、终止子对于目的基因表达必不可少对于目的基因表达必不可少目的基因不能单独进入受体细胞，目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表必需

21、以表达载体的方式携带进去。达载体的方式携带进去。注意注意例例1 1（多选）一个基因表达载体的构建应包括（多选）一个基因表达载体的构建应包括( )( ) A A目的基因目的基因 B B启动子启动子 C C终止子终止子 D D标记基因标记基因ABC D例例2.2.下列关于基因表达载体的叙述不正确的是下列关于基因表达载体的叙述不正确的是( )( )A A启动子是与启动子是与RNARNA聚合酶识别和结合的部位，是聚合酶识别和结合的部位，是起始密码起始密码B B启动子和终止子都是特殊结构的启动子和终止子都是特殊结构的DNADNA短片段，短片段，对对mRNAmRNA的转录起调控作用的转录起调控作用C C标

22、记基因是为了鉴别受体细胞中是否有目的标记基因是为了鉴别受体细胞中是否有目的基因从而便于筛选基因从而便于筛选D D基因表达载体的构建视受体细胞及导入方式基因表达载体的构建视受体细胞及导入方式不同而有所差别不同而有所差别A转化：转化： 目的基因进入目的基因进入_内，并且在内，并且在 受体细胞内维持受体细胞内维持_和和_的过程的过程受体细胞受体细胞稳定稳定表达表达1 1、将目的基因导入植物细胞、将目的基因导入植物细胞（1 1）农杆菌）农杆菌转化法转化法特点特点:能感染能感染双子叶植物双子叶植物和和祼子植物祼子植物, ,对对大多数单子叶植物无感染能力大多数单子叶植物无感染能力TiTi质粒质粒的的TDN

23、ATDNA可可转移转移至受体细胞至受体细胞并并整合整合到其染色体上到其染色体上转化过程转化过程: :TiTi质粒质粒目的基因目的基因构建构建表表达达载载体体导入导入植植物物细细胞胞整合整合 植物细胞染植物细胞染色体色体DNADNA表达表达新新性性状状转入转入农农杆杆菌菌整合整合到染色体上到染色体上转移转移至受体细胞至受体细胞（2 2）基因枪法）基因枪法微弹轰击法微弹轰击法特点：成本高特点：成本高胚珠花药花丝柱头花柱子房壁子房雄蕊雌蕊（3 3）花粉通道法）花粉通道法 植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，

24、花粉形成的花粉管还未愈合花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加前，剪去柱头，然后，滴加DNADNA（含目的基因），使目的基因（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。借助花粉管通道进入受体细胞。特点：简便经济特点：简便经济 例例3.3.采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的做法正确的是（入目的基因的做法正确的是（ ）将毒素蛋白质注射到棉受精卵中将毒素蛋白质注射到棉受精卵中 将编码毒素蛋白的将编码毒素蛋白的DNADNA序列注射到棉受精卵中序列注射到棉受精卵中 将编码毒素蛋白的将编码毒素蛋白的DNAD

25、NA序列与细菌质粒重组，序列与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵中注射到棉的子房并进入受精卵中 将编码毒素蛋白的将编码毒素蛋白的DNADNA序列与质粒重组，导人序列与质粒重组，导人细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养A A B B C C D DC2、将目的基因导入动物细胞将目的基因导入动物细胞方法方法: 显微注射技术显微注射技术操作程序操作程序:提纯含目的基提纯含目的基因表达载体因表达载体取受精卵取受精卵显微注射显微注射移植到子宫移植到子宫早期胚胎早期胚胎新性状动物新性状动物3 3、将目的基因导入微生物细胞、将目的基因导入微生物细胞常用法常用法：CaCa

26、2+2+处理处理常用菌常用菌：大肠杆菌：大肠杆菌经常用原核生物作受体细胞原因：经常用原核生物作受体细胞原因：繁殖快繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少、多为单细胞、遗传物质相对少过程：过程：CaCa2+2+处理处理大肠杆菌大肠杆菌感受态感受态细胞细胞表达载体表达载体与感受态与感受态细胞混合细胞混合感受态细感受态细胞吸收胞吸收DNADNA 将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞1.1.将目的基因导入植物细胞将目的基因导入植物细胞转化转化农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法2.2.将目的基因导入动物细胞将目的基因导入动物细胞显微注射技术显微注射技术3.3.将目的基因

27、导入微生物细胞将目的基因导入微生物细胞CaCa2+2+处理处理植物基因植物基因工程工程动物基因动物基因工程工程微生物基微生物基因工程因工程常用方法常用方法受体细胞受体细胞比较目的基因导入不同细胞的方法比较目的基因导入不同细胞的方法农杆菌转农杆菌转化法化法显微注射显微注射法法CaCa2+2+处理处理法法体细胞体细胞受精卵受精卵原核细胞原核细胞抗虫鉴定抗虫鉴定 抗病鉴定抗病鉴定活性鉴定等活性鉴定等检测检测导入检测：目的基因是否导入受体细胞导入检测：目的基因是否导入受体细胞方法方法 DNADNA分子杂交分子杂交表达检测表达检测转录检测转录检测分子杂交分子杂交翻译检测翻译检测抗原抗体抗原抗体杂交杂交分

28、分子子检检测测法法鉴定鉴定抗虫鉴定抗虫鉴定抗病鉴定抗病鉴定活性鉴定等活性鉴定等个体水平的鉴定个体水平的鉴定（一）、检测（一）、检测1 1、检测转基因生物染色体的、检测转基因生物染色体的DNADNA上是否插入上是否插入了目的基因了目的基因 ( (关键步骤关键步骤) ). .首先取出转基因生物的基因组首先取出转基因生物的基因组DNADNA. .用含目的基因的用含目的基因的DNADNA片段用放射性同位素片段用放射性同位素等作标记等作标记, ,以此做探针以此做探针. .使探针和转基因生物的基因组杂交使探针和转基因生物的基因组杂交, ,若显若显示出杂交带示出杂交带, ,表明染色体已插入染色体表明染色体已

29、插入染色体DNADNA中中（1 1）方法）方法: :DNADNA分子杂交分子杂交（2 2）过程）过程: :DNADNA分子杂交示意图分子杂交示意图 采用一定的技术手段，将两种生物的采用一定的技术手段，将两种生物的DNADNA分分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成在一起，形成杂合双链区杂合双链区；在没有互补碱基序；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。列的部位，仍然是两条游离的单链。 P P1515思考与探究思考与探究（二）、鉴定（个体生物学水平）（

30、二）、鉴定（个体生物学水平）2 2、检测目的基因是否转录出了、检测目的基因是否转录出了mRNAmRNA3 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质、检测目的基因是否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等方法方法: :分子杂交分子杂交方法方法: :抗原抗体杂交抗原抗体杂交过程过程: : 用上述探针和转基因生物的用上述探针和转基因生物的mRNAmRNA杂交杂交, ,若出现杂交带若出现杂交带, ,表明目的基因转表明目的基因转录出了录出了mRNAmRNA例例3.3.目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定和检

31、测才能持和表达其遗传特性，只有通过鉴定和检测才能知道。下列属于目的基因检测和鉴定的是（知道。下列属于目的基因检测和鉴定的是（ ）检测受体细胞中是否有目的基因检测受体细胞中是否有目的基因 检测受检测受体细胞中是否有致病基因体细胞中是否有致病基因 检测目的基因是否检测目的基因是否转录出转录出mRNA mRNA 检测目的基因是否翻译出蛋白质检测目的基因是否翻译出蛋白质 A A B B C C D D基基因因工工程程的的基基本本操操作作程程序序目的基因的获取目的基因的获取基因表达载体的构建基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定1、从基因文

32、库中获取目的基因、从基因文库中获取目的基因2、利用、利用PCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因3、化学方法人工合成、化学方法人工合成复制原点复制原点 + + 目的基因目的基因 + + 启动子启动子 + + 终止子终止子 + + 标记基因标记基因农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法、显微注射法、农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法、显微注射法、CaCa2+2+处理法处理法DNADNA分子杂交技术、分子杂交技术、抗原分子杂交技术、分子杂交技术、抗原抗体杂交技术抗体杂交技术分子检测外的个体水平鉴定分子检测外的个体水平鉴定4.4.（多选）人们利用基因工程的方法，用大肠杆菌生（多选）人们利用基因工程的方

33、法，用大肠杆菌生产人类胰岛素，这一过程涉及到产人类胰岛素，这一过程涉及到A.A.用适当的酶对胰岛素基因与运载体进行切割并连接用适当的酶对胰岛素基因与运载体进行切割并连接B.B.把重组后的把重组后的DNADNA分子导入受体细菌内进行扩增分子导入受体细菌内进行扩增C.C.检测重组检测重组DNADNA分子是否导入受体细菌内并表达出性状分子是否导入受体细菌内并表达出性状D.D.筛选出能产生胰岛素的筛选出能产生胰岛素的“工程菌工程菌” ” 非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区RNA聚合酶聚合酶结合位点结合位点外显子外显子内含子内含子终止子终止子基因的结构基因的结构启动子启动子原核原核真核真核原核细胞的基因结构原核细胞的基因结构非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 与与RNARNA聚合酶结合位点聚合酶结合位点启动子启动子终止子终止子不编码蛋白质。不编码蛋白质。：编码蛋白质：编码蛋白质 , ,连续不间断连续不间断编码区编码区非编码区非编码区原核原核细胞细胞的的 基因基因结构结构调控遗传信息表达调控遗传信息表达, ,上上 游的游的RNARNA聚合酶结合位点聚合酶结合位点: :真