人源化单抗是比嵌合单抗更新一代的单抗药物

1、人源化单抗是比嵌合单抗更新一代的单抗药物。用小鼠制备的普通单抗药物叫鼠源单抗，由于其100%鼠的成分，免疫原性非常强，常引起人体的免疫反应，毒副作用明显，大大制约了其在临床应用领域的发展。嵌合单抗人的成分约70%，仍有很大的毒副作用。抗体人源化技术是把鼠源性单抗的大部分转换为人的成分，使之接近于人体自身的抗体，从而消除人体免疫系统对外源性单抗的排异反应。通过国际合作，百泰生物药业率先在国内建立起第一个具有世界领先水平的抗体人源化技术平台，采用先进的“CDR移植”技术，开发出人源化程度高达95的单抗药物泰欣生，大大降低了该药在临床应用中引起HAMA（人抗鼠抗体）反应的发生几率，安全性更高，在全球

2、同类产品中居领先水平。 单克隆抗体（简称单抗）是针对特异抗原产生的特异纯化抗体，具有高度专一性，能精确地瞄准、捕获目标靶点，特异性地与靶目标发生反应，人们常称之为“生物导弹”。人源化单抗药物泰欣生能够特异性结合肿瘤表面过度表达的表皮生长因子受体（EGFR），靶向性强、毒副作用低，代表着肿瘤分子靶向治疗领域的最新发展方向。泰欣生是由生物医药高新技术企业百泰生物药业有限公司专业打造的具有自主知识产权的科技创新药物，是我国正式上市的第一个人源化单克隆抗体， 目前该药在全国各省会城市均有销售。公司位于北京经济技术开发区，电话：01051571020，传真：51571026，泰欣生免费咨询热线电话：80

3、07060228。 强烈建议用泰欣生。典型病例：我是肿瘤科的一个医生，我认为：泰欣生是比爱必妥更新一代的单抗。单抗最早是用小鼠制备的，叫鼠源单抗，由于其100%鼠的成分，免疫原性非常强，常引起人体的免疫反应，毒副作用明显，大大制约了其在临床应用领域的发展。爱必妥属于嵌合单抗，人的成分约70%，仍有很大的毒副作用，3级或4级变态反应/超敏反应的发生几率为2.5%，特征表现为速发的气道梗阻（支气管痉挛、喘鸣和声嘶）、荨麻疹和/或低血压。大约80%的变态反应发生在首次输注并且在滴注完成1小时后仍可以观察到症状。因此用药前必须进行抗组胺药的预处理。泰欣生人源化程度高达95，临床未见超敏反应，无需进行预

4、处理，安全性更高，在全球同类产品中居领先水平。我们科开始有一些病人用爱必妥，但是发现大多数病人不能耐受爱必妥的不良反应，有病人用药后身上全是脓包，容易感染，又很难看，无法出门，现在这个药几乎没人用了。大家用泰欣生疗效好，又没有那么多禁忌。价格呢也是考虑的一个方面，泰欣生比爱必妥便宜1/3，但更值得肯定的是疗效，选择泰欣生没有错。抗体是由浆细胞分泌的，浆细胞又是由B淋巴细胞转化而来，每个B淋巴细胞株制造它的专有抗体，每株细胞系只能产生一种它专有的、针对一种它能识别的特异性抗原决定簇的抗体。这种从一株单一细胞系产生的抗体就叫单克隆抗体（McAb，简称单抗）。第一代单抗诞生于1975年，来源于小鼠的

5、B细胞杂交瘤，称为鼠源性单抗。但人的免疫系统可以识别鼠源性单抗，产生人抗鼠抗体（HAMAs），将其清除出体外，因此限制了它的应用。随后研究人员采用基因工程的方法生产人源或人源化的单抗以及嵌合型的单抗，特别是在1984年报道研究出了人鼠杂交瘤的构建方法，并在1987年进行了第一次临床试验。研究人员希望单抗中的人源的恒定区不仅可以激活免疫效应细胞的功能，而且可以逃避宿主的免疫攻击，从而消除HAMAs反应。基于一种单抗中人源的部分越多其疗效越高的假设，人源化单抗于1986年开始生产，并于1988年进行了第一次商业性的临床试验。人源化单抗与鼠单抗相比，具有以下的优点：特异性较强；人类组织相容性抗原（M

6、HC）的单抗可以对人类MHC的结构和功能进行分析；应用于人体时，因是同源性免疫球蛋白，不易发生过敏反应及免疫复合性疾病；在人体内维持的时间较长；可制备用于人的抗独特型抗体。制备人源化单抗可以采用人鼠杂交瘤技术、人人杂交瘤技术、EB病毒转化技术、EB病毒转化杂交瘤技术、DNA重组技术等。根据用途的不同，单抗大体上可分为三类，即诊断用单抗（如妊娠试验用单抗、肝炎化验用单抗等）、治疗用单抗、“生物导弹”用单抗。单抗为人类疾病的防治和诊断、肿瘤体内定位、靶向药物的制备、防止移植物的排异反应、新型疫苗的研制提供了较为理想的手段。 单抗的临床应用临床诊断自单抗问世以来，由于其特异性强、重复性好、操作简便易

7、行，所以在大部分常规血清学检查中，取代了多克隆抗体而广泛应用于免疫学诊断。体内微量成分和药物的测定放射免疫测定和酶标免疫测定法已被广泛应用，作为体内激素或药物等微量成分的测定。用单抗取代传统的多抗，使感度、精度和重复性大为提高，例如转铁蛋白、肾素、甲状腺素（T4）、三碘甲状腺素（T3）、干扰素、补体成分C3、cAMP、cGMP、生长素、绒毛膜促性腺激素（HCG）、促性腺激素（FSH）、胰岛素、IgG、IgE、地高辛、氨茶碱、苯巴比妥、氨基糖甙类抗生素、维生素B12等单抗。癌症诊断甲胎蛋白（AFP）和癌胚抗原（CFA）在正常胎儿血清中大量存在，成人血中含量显著减少，而癌症患者则显著增加，被认为是

8、癌症的标志。甲胎蛋白（AFP）是用于肝癌和畸胎瘤诊断的癌标志抗原，分子中约含4糖链，根据糖链的差别已能区别出来源于肝癌的AFP和来源于肝硬化的AFP，从而可以期待能细致区分不同AFP的糖链结构的单抗。蛇毒鉴别毒蛇种类很多，其毒素的性质各不相同，应用相应的蛇毒单抗，便可迅速做出正确的诊断，从而采取相应的治疗。传染病诊断流感、狂犬病、麻疹、疱疹、肝炎、流行性出血热等致病病毒，疟疾、血吸虫、锥虫等寄生虫和一些细菌等，用相应的单抗能正确地予以诊断，并能鉴别其抗原亚型。如乙型肝炎病毒和流感病毒可以分成若干亚型，如果制成单抗就能鉴别出不同亚型，不仅对诊断有意义，而且在流行病学上也有重要意义。体内定位诊断利

9、用肿瘤单抗与其相应肿瘤抗原反应的特异性和放射性同位素可以进行体外探测等特点发展起来的放射免疫显像技术，是近年来开展对肿瘤及其转移灶或复发灶进行定位或定性诊断的无创伤性新技术。其原理是从动物或组织培养中获得各种抗肿瘤抗体，采用合适的同位素标记后注入相应肿瘤患者体内，标记抗体可随血流到达肿瘤部位，与肿瘤抗原发生特异性结合。放射性标记抗体随时间延长在相应肿瘤组织中的浓度越聚越高，以此了解肿瘤的大小、形状、位置、数量，还可帮助确定病变性质。一般多采用131I和125I标记抗体。据报道，单抗用于放射免疫显像比多抗优点多、效果好。临床治疗从临床试验的适应证来看，单抗主要用于癌症治疗，如结肠癌、直肠癌、乳腺

10、癌、卵巢癌、肺癌、黑色素瘤、白血病、前列腺癌和胰腺癌等。还有治疗感染性休克和脓毒血症的单抗，个别也有治疗类风湿性关节炎、型糖尿病和肠炎的单抗。此外，还有临床试用于预防器官移植抗排异反应、抗血小板凝集和艾滋病的单抗。美国临床试用的单抗药物剂型种类繁多，除单独使用单抗外，还有同位素标记的单抗、毒素单抗偶联物、药物单抗偶联物。国内上海将肺癌单抗与蓖麻毒素、相思子毒素和抗癌药如阿霉素、丝裂霉素、氨甲喋呤等偶联成功。武汉生物制品研究所应用微分子右旋糖酐作联桥将柔红霉素偶联到单抗WT1上，组成单抗柔红霉素偶联物。在体外补体非依赖性细胞毒试验、免疫组织化学试验、CFUGM集落形成的实验显示，单抗柔红霉素偶联

11、物对T源性淋巴瘤有较强的亲和力，并能特异地杀伤白血病T淋巴细胞，但不损伤骨髓干细胞。蛋白质分离纯化从发酵液、血清、组织或细胞匀浆上清液中分离纯化出来某些具有生物活性的蛋白质、多肽或酶类时，一般采用盐析、离子交换层析、凝胶过滤等方法，但这些方法的选择性都不理想，很难经一两步处理就能达到纯化的目的，所以既费时费力，又不能适应大规模工业化生产的需要。随着现代生物技术制药的发展，单抗免疫亲和层析作为高效的分离纯化方法已得到广泛的应用。Staehelin等用干扰素单抗进行免疫亲和层析，使大肠杆菌产生的干扰素，经进一步处理纯化达1000倍。单抗靶向给药系统随着杂交瘤技术的问世，人们已能筛选出特异性较高的单

12、抗。这种抗体不仅有均一的特异性，而且免疫球蛋白的类、亚类、型也都是均一的，并具有高度的特异性，能从正常组织中识别肿瘤细胞。将药物联到单抗上，可提高药物的疗效，降低毒性，是靶向药物的理想载体。免疫脂质体脂质体本身具有靶向作用，但其特异性不强，要使脂质体分布到特异性靶器官，就需在脂双层上接上特异性抗体，成为免疫脂质体。将抗癌细胞的单抗接到带药脂质体上，由于单抗能有效地识别肿瘤细胞上表达的抗原，具有高度的特异性，使脂质体与癌细胞特异性地结合，提高脂质体的靶向性，使药物特异性地输送到癌细胞，进而减少用药剂量，降低不良反应。又由于单抗对肿瘤细胞有较好的亲和力，使药物的抗癌活性专一，故能选择性地杀伤癌细胞

13、，起到良好的治疗作用。吴道澄等研究了丝裂霉素免疫脂质体的抗癌活性。丝裂霉素的抗肿瘤作用显著，但毒副作用较大，制成免疫脂质体可减少对正常细胞的毒性，增强对肿瘤细胞的杀伤作用，实现靶向给药。经细胞ELISA检测及免疫荧光证实，免疫脂质体可特异性地结合人胃癌细胞并将其内容物携带至靶细胞，其杀伤力是游离丝裂霉素的2.2倍，但对正常细胞的毒性小，表明免疫脂质体对人的胃癌细胞具有选择性杀伤作用。免疫脂质体作为药物载体，既具有载药量大、在体内滞留时间长，又具有靶细胞专一性等优点，是最有前途的单抗靶向给药系统。免疫毫微粒将单抗通过共价交联或吸附到毫微粒表面，形成具有免疫活性的毫微粒。免疫毫微粒具有双重靶向性，

14、即被动靶向性和主动靶向性。一方面它属于毫微粒体系，可通过控制粒子大小，使其选择性被动滞留在特定的脏器；另一方面可通过改变粒子表面修饰的抗体而作用于具有相关抗原的靶细胞。天津市肿瘤研究所黄建英等人进行的抗人乳腺癌单抗免疫磁性药物毫微粒的体外抑瘤及体内定位显像的实验室研究已通过鉴定，该研究以天然高分子葡聚糖为材料与氧化铁共沉淀制备成磁性毫微粒，并通过共价结合抗人乳腺癌单抗和抗癌药物制成免疫磁性毫微粒。此种毫微粒保留单抗的特异性结合活性达80，并使药物与抗体分子比为91，显著增加了局部抑瘤的药物浓度，体外杀瘤细胞率达90。由于单抗与吸附药物的毫微粒共价结合的免疫毫微粒代表新一代的药物载体，可根据选择

15、的单抗的性质来主动靶向不同的靶细胞，实现寻靶的特异性，在现代药剂学上显示出广阔的应用前景。免疫毫微球与免疫微球微球是药物分散或被吸附在高分子聚合物基质中而形成的微粒分散系统，粒径较小的微球也称毫微球。微球具有靶向性、缓释性和避免抗药性。免疫微球的应用很广，除了可用作抗癌药的靶向治疗外，还可以用于标记和分离细胞、疾病的诊断和治疗等。盛杰等用化学偶联法将人膀胱癌单抗分子偶联到阿霉素白蛋白毫微球上，构建了一个有靶向杀伤力的免疫毫微球，即阿霉素白蛋白载单抗毫微球（ADRNPAb）。经免疫及显微照像分析证明，免疫毫微球可有效地和人膀胱癌细胞结合。体外杀伤试验表明，此免疫毫微球对靶细胞EJ（人膀胱癌细胞株

16、EJ）有高度特异性杀伤活性，而对无关的人直肠癌Lovo细胞则无明显作用。免疫磁性载体磁性药物制剂是将药物和铁磁性物质共包于或共分散于载体中，应用于人体后，利用体外磁场的效应使药物在体内定向移动和定位集中的靶向给药制剂。免疫磁性微球是将单抗偶联在磁性微球的表面，使其靶向性和专一性更强，从而达到高效、速效、低毒的新型药物制剂。瑞典的Hakanson等研究了免疫球蛋白A蛋白的琼脂糖磁球，给患者进行血浆亲和层析治疗肿瘤，可使肿瘤很快消退。随着生物医学和工程技术的相互交叉和渗透，免疫磁性载体将会快速发展，成为一种新型的固相载体。由于单抗靶向给药系统具有高度特异性和强大的杀伤力等优点，给广大肿瘤患者带来了

17、福音，也预示了癌症化疗的一个新途径。但要将单抗靶向给药制剂作为临床上治疗肿瘤的常规制剂，目前还有许多亟待解决的问题，如提高单抗的特异性，减少与正常细胞的交叉反应；防止鼠源性单抗引起的抗鼠抗体反应；使用人源单抗、人鼠杂交抗体或去除Fc段的单抗；防止结合的药物在到达肿瘤细胞前即已释放，或受网状内皮系统吞噬而将药物释放，引起全身性毒性；增加到达靶部位的药物量等。 国内外单抗研究现状国外的单抗研究以美国为代表。美国的许多生物技术公司以生产单抗诊断试剂为主，经FDA批准的单抗诊断试剂盒已有数百种之多。截止到2001年10月，美国FDA已经批准了11个用于临床治疗的体内单抗。据不完全统计，国内已成功地研制

18、出300多种单抗，目前主要是在体外诊断试剂方面的应用，并已形成了商品化和初步产业化，也取得了较显著的社会效益和经济效益。20世纪90年代后期，我国的单抗研究从体外诊断试剂向体内诊断和治疗的方向发展，并且取得了可喜的成绩。鼠单克隆抗体人源化进展 zt自1975年单克隆抗体杂交技术问世以来，鼠源单克隆抗体（mAb）被誉为神奇的子弹，广泛用于肿瘤检测与治疗。然而，鼠源单抗作为异源性蛋白在人体内可诱鼠单抗人源化成为最早出现的基因工程抗体。发抗鼠抗体的生成（HAMA），可产生毒性反应，并使mAb在体内消除加快，这严重影响了鼠单抗的治疗效果。为解决这一难题，从80年代初期发展到现在，鼠单抗人源化经历了如下

19、历程：恒定区人源化可变区人源化利用抗体库技术获得完全人源序列（如图）。    1恒定区人源化-鼠/人嵌合抗体（chimeric antibody）由于异源性Ab的免疫反应约有90%是针对恒定区（C区），要降低mAb的抗原性，必须对Ab的恒定区进行人源化1。其原理使从分泌某mAb的杂交瘤细胞基因组中分离和鉴别出重排的功能性可变区（V区）基因，经基因重组与Ig恒定区基因相拼接，插入到适宜的表达载体中，构成鼠/人嵌合的轻重链基因表达质粒，经转染骨髓瘤细胞，通过筛选即可制备出鼠/人嵌合抗体。这种嵌合抗体同鼠源抗体比较至少有以下两个优点：首先，它可以按需要对抗体的效应基因进行选择或剪

20、切。例如人Ig的同种型IgG1和IgG3对介导补体依赖及细胞介导的溶解作用具备优势，因而利用该技术可以拼接不同亚类的人C区基因，来改变抗体的效应功能，使原细胞毒性较低的IgG2a和IgG2b变成细胞毒性较高的IgG1和IgG3，增强抗体的免疫治疗功能，可用来杀死肿瘤细胞。其次，在治疗中使用人而不是鼠mAb的同种型，大大减小了鼠源mAb作为异种蛋白对人体的免疫原性，它通过避免抗同种型抗体的产生，减少了HAMA的生成。例如，当鼠对鼠Ig互补决定区（CDR）产生免疫耐受时，用鼠抗-淋巴细胞Ab可以激发抗独特型反应，但相对那些对可变区不耐受的动物来说，该鼠的抗独特型反应被推迟并很微弱2。Lobulio

21、对鼠/人嵌合抗体在人体内的动力学和免疫反应的研究表明，鼠/人嵌合抗体在人体内的半衰期比mAb长6倍以上。他用由鼠17-1AmAb可变区及人IgG-1K恒定区构成的鼠/人嵌合抗体用于10名转移性结肠癌患者，除一名患者在用药的63天和84天有轻微抗体反应外，其余患者均未发生毒性反应或过敏反应。并且唯一的抗体反应能被鼠17-1AmAb抑制，表明该抗体反应是针对嵌合抗体中鼠可变区的3。由于异源性抗体的免疫反应约有10%是针对V区，在嵌合抗体里，抗-V区反应并不减弱，这表明外来VH框架部分完全能够诱导强烈的抗-抗体反应。这种异源抗-V区反应的程度与用免疫鼠的Ighb抗体同种型的Igha抗体引起的同种异型

22、反应类似。因此，尽管嵌合抗体可以消减抗-抗体反应，但V区的免疫原性和多态性也是值得注意的1。骆训懿等采用RT-PCR技术，将鼠抗人TNF-a抗体克隆后筛选出功能性VH、VL基因，并将该轻链、重链基因分别克隆到鼠/人嵌合轻链、重链表达载体中，构建鼠源性更低的抗人TNF-a鼠/人嵌合抗体，来抑制炎症介质TNF-a引起的病理反应4。迄今已研制出很多鼠/人嵌合抗体，有些已陆续进入临床应用，主要用于恶性肿瘤的诊疗，它在预防移植排斥反应也取得了较为满意的效果，在治疗自身免疫疾病以及控制药物过量、药物过敏反应中已显示出巨大优势。2.可变区人源化CDR移植Ab（CDR grafting antibody）由于

23、鼠/人嵌合抗体保留了鼠可变区，仍引起HAMA，因此有必要将可变区也人源化。其原理是将鼠源mAb的6个互补决定区的氨基酸序列插入到人Ig的框架区，通常称为CDR移植。CDR移植技术的理论依据是：CDR是决定抗原结合位点的唯一结构，因而也是抗体特异性和亲和力的决定部位。框架区能够接受外源CDR的植入5。CDR移植不仅可以降低mAb的免疫原性，而且还可以把鼠源mAb与Ag结合的性质授予人抗体。CDR移植抗体中非人序列含量低（约5%），研究已证实其免疫原性大大减小，并且在人体内的血清半衰期延长6，7。然而，只通过移植CDR序列产生的人化抗体与抗原结合的能力远不及其亲代鼠源Mab8，9。总结27个有亲和

24、力测定数据的CDR移植抗体，63%的亲和力有10%-81%的降低10，有的亲和力下降了至少有几百倍11，12。为了恢复其高亲和力，必须对mAb进行进一步的分析、设计、改建工作，使其抗原决定环的结构更加完善。Chothia和LesK首先提出一些框架残基对CDR构象因此的重要性，并综合地检测了所有影响抗原结合的框架残基13。Xiang等发现嵌合抗体B72.3的71和93框架残基是重链超变环构象的主要决定部分14。因此，可用亲代鼠源抗体的相关序列替代CDR移植抗体V区框架区的关键残基，使CDR构象得以维持。但这同时又增加了鼠源序列的成分，致使免疫原性也加强。从治疗的角度考虑，最好是能够找到框架区变化

25、最小而抗原亲和力有很高的人化抗体。尽管有分子模拟法的指导，但要测定哪些框架变化对抗原结合有益，通常需要分析许多不同的抗体突变型。为了简化抗体人源化进程，通常的方法是选择与鼠源单抗同源程度较高的人框架区作框架，这可使人化抗体框架区与亲代鼠源框架区的残基错配数达到最小值，制备除CDR序列外结构几乎相同的治疗抗体。如常以NEWM8，15。作为移植抗体的VH框架，REI8作为 VL框架。通常改变个别氨基酸残基的组成以保证抗体的亲和力。然而，值得注意的是一个错配的框架残基就可能对抗原的结合产生巨大影响。1988年，Richmanne等CDR移植抗体（hVHL·CAMP-TH-1

26、83;IgG1）的某个位点上的氨基酸通过点突变（Ser27®Phe，Ser30®Thr）进行“微调”，显著增强了该抗体的亲和力7。Padlan建立了另一个人源化方法：不是将鼠源CDR移植到人框架区，而是将完整的鼠V区保留并选择需要被人序列代替的框架残基。但当抗体被主要阻止相容性复合物分子II降解时，其中隐藏的鼠源框架区残基能激发T细胞免疫反应。所以，以此法研制出的鼠源mAb（22，23）是否有免疫原性，仍需进一步检测16。目前，对CDR移植的人源化路线是，在鼠/人嵌合抗体的基础上，通过数据库检索、计算机分子模拟等寻找出有最大同源性的人可变区模板，综合考虑表面残基、与CDR有

27、相互作用或对空间结构有重要影响的残基，确定需要保留和改变的关键残基，再通过模拟基因合成，表达检测实际效果，进行必要的修正，来获得高亲和力的治疗mAb。目前已构建出多种针对不同抗原的CDR移植抗体，有些已应用于临床诊治，并取得了令人满意的效果，如消除肿瘤，延长器官移植生存期，改善类风湿关节炎、全身性脉管炎、感染性疾病及免疫混乱性疾病的临床症状等。    3.获得完全人源序列    1994年Jespers等通过噬菌体抗体库技术，首先用抗原表位定向选择法对鼠单抗进行人源化。该方法通过鼠/人重链可变区杂合配对，用抗原进行亲和筛选，最终得到针对同一抗原表位的人抗

28、体可变区基因。与传统CDR移植的人源化技术比较，该方法有比较简单易行和所获为完全人源性抗体两个优点17。我国的王卓智等也采用该方法对抗TNF-a抗体Fab段进行人源化，取得初步成功18。Manuel利用抗体库技术，从已建立的抗体人源化实验中收集数据，选择出对抗原结合作用影响较大的11个框架残基，设计了一个随机诱发突变方法对抗体进行进一步人源化。其方法是对一小组重要的框架残基进行随机取样，然后在已知抗体库的丝状噬菌体表面进行单价显示，再通过亲和力选择出最适框架序列。他们应用该方法来人源化鼠源抗血管内皮生长mAbA4·6·1。框架优化后的抗体与框架未优化的原人化抗体相比，其与相

29、关抗原的亲和力增加了125倍。可见，该方法是一种更具吸引力的替代方法19。综上所述，鼠单抗人源化使单克隆抗体的免疫原性、抗原结合亲和力、血清半衰期更为理想，并可按需要选择C区的效应子功能。尤其是噬菌体抗体库的进展，使获得完全人源序列成为可能，为单克隆抗体的发展开辟了广阔的天地。参考文献：1  Maranne,B.,Greg,W.,Herman,W.&Michael,S.N.(1989)J.of.Exp.Med.170,2153-2157. 2  Lutz,Riechmann,Michael,C.,Herman,W. & Greg

30、,W.(1988) Nature 332(24),323-327. 3  Albert,F.Lobuglio,Richard,H.W.,John,T.,Amy,H.,Kim,R.,Elizabeth,B.H.,Lee,S.John,G.&M.B.Khazaeli.(1989) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86,4220-4224. 4骆训懿、王琰、王欲晓、王卓智，中华微生物学和免疫学杂志(1999)19,166-168. 5  Sandhu,J.S.(1992)Crit.Rev.Biotechnol

31、12(5-6):437. 6  Stephens,S.,Vetterlein,O.,Chaplin,L.,Bebbington,C.,Nesbitt,A.,Sopwith,M., Athwal,D.,Novak,C.&Bodmer,M.(1995)Immunology 85,668-674. 7  Baselga,J.,Tripathy,D.,Mendelsohn,J.,Baughman,S.,Benz,C.C.,Dantis,L.,Sklarin,N.T.,Seidman,A.D. et al (1996)J.Clin.Onco.14,737-744. 8  Riechmann,L.Clark,M.,Waldmann,H.&Winter,G.(1988)Nature 332,323-327. 9  Pulito,V.L.,Roberts,V.A.,Adair,J.R.,Rothermel,A.L.,Collins,A.M.,Varga,S.S.,Mar-tocello,C.,Bodmer,M.,Jolliffe,L.K.&Zivin,R.A.(1996)J.