湖南省研究生科研创新项目申请书

1、附件2：湖南省研究生科研创新项目申 请 书项目名称：申请者：所在单位：所属学科：联系电话：传真电话：电子信箱：申请日期：湖南省教育厅2009年制填 报 说 明一、申请书各项内容，要实事求是，逐条认真填写。表达要明确、严谨。外来语要同时用原文和中文表达。第一次出现的缩写词，须注出全称。除签名外，项目申请书必须是打印件。二、申请书一律用A4纸，于左侧装订成册。第二页起各栏空格不够时，请自行加页。如有查新报告及其它附件材料，请连同申请书一起装订成册。 三、“所属学科”按博士、硕士学科专业目录（2006年修订版）二级学科名称填写。（封2，此页不装订）一、简表项目名称三种分离培养猪小肠上皮细胞方法的比较

2、研究研究类别基础研究应用研究试验发展研究年限2012年至 2013 年申请经费（万元）项目负责人姓名性别身份证号技术职称学科专业及研究方向指导教师姓名性别学历学位技术职称学科专业及研究方向目前指导学生数博士： 名，硕士： 名 联系电话主要研究人员姓 名身份证号码技术职务专业所在单位本人签名项目负责人主要学习和工作经历（从上大学开始）二、立项依据（项目的研究目的、意义；国内外研究现状分析和发展趋势；项目应用前景和学术价值；现有研究基础、条件、手段以及指导教师情况等） 本项目主要研究不同消化方法对猪小肠上皮细胞的分离效果，以期找到最佳分离方法，建立一种效果最优的猪肠上皮细胞原代培养的系统，为猪肠道

3、营养的研究提供体外模型，进一步为研究磷在猪小肠的吸收机制提供细胞模型。 上皮细胞体外培养技术已较为成熟，但主要应用于人类的医药开发利用，多侧重临床，病理及超微结构等方面，利用细胞系进行药物刷选及肿瘤治疗。现已建立的一些肠上皮细胞系也多属于癌细胞株，由于肠道癌细胞的细胞基本结构，代谢和功能特性等与正常上皮细胞有一定差异，不能用其结果来说明正常细胞的行为。从而研究正常细胞的分离和培养格外重要。 目前，国内外学者已开始对人，鼠，猪，兔，羊，鸡等肠上皮细胞进行分离培养研究，但研究的素材和报道都较少。畜禽肠上皮细胞的体外培养研究还在起步期，有很大的发展空间。研究出成功培养上皮细胞的最佳方法，可为构建猪肠

4、上皮细胞系奠定一定基础。小肠作为动物营养吸收的主要部位，其粘膜上皮细胞是消化吸收的主要功能细胞，粘膜上皮还含有大量的免疫细胞和免疫分子，参与免疫屏障和应激反应，也是体内更新最快的一类细胞。研究猪小肠上皮细胞的分离培养技术，并维持其细胞的分化特性，在揭示细胞的全能性，细胞周期与调控，癌变机制与细胞衰老，营养素的影响，疫苗生产，疾病防治等方面都有重要作用，是研究小肠功能，营养物质吸收机制和调控的主要手段之一。三、研究方案1. 研究目标、研究内容和拟解决的关键问题研究目标：方便高效地体外培养猪小肠粘膜上皮细胞并成功建系，为研究猪小肠上皮细胞相关的生物学功能提供理想的试验模型。研究内容：（1）原材料的

5、选择（2）小肠上皮细胞的分离纯化（3）细胞系的建立（4）生长曲线的绘制（5） IEC的鉴定拟解决的关键问题：（1）找出分离消化肠上皮细胞时消化酶的最适浓度以及最佳消化时间；（2）找出体外培养仔猪小肠上皮细胞最好的消化分离方法；2. 拟采取的研究方法及可行性分析分离方法有三：（1）组织块培养+柠檬酸胰酶纯化；（2）胶原酶/中性蛋白酶分离法；（3）机械分离+胶原酶消化相结合法。鉴定方法有三：（1）形态学观察；（2）碱性磷酸酶检测；（3）免疫组织化学检测。可行性分析：（1）实验思路明确，实验材料普遍，实验方法易行，实验设备齐全。（2）本项目的参加人员具有坚实的科研理论基础，很好地掌握了有关理论知识和

6、实验操作技能。（3）本项目的指导老师曾进行过细胞培养实验，具有大量的实战经验。3本项目的创新之处（1）通过三种完全不同分离培养方法的比较研究，为建立稳定、理想的猪小肠上皮细胞系找到最优的分离方法及作用条件。（2）4. 预期研究进展2012.042012.05 研究工作全面展开，查询相关资料，制定具体的研究方案；2012.062012.11 三种分离培养方法最优条件的探索；2012.122013.01 用最好的方法建立猪小肠上皮细胞系，并进行稳定性测试；2013.022013.05 数据整理、结果分析，撰写论文。5预期成果（1）找出体外培养猪小肠上皮细胞的最佳方法及其最优条件；（2）建立一个稳定

7、的猪小肠上皮粘膜细胞系，为下一步的磷营养研究提供理想的实验模型；（3）发表有价值的学术论文12篇。四、研究基础与本项目有关的研究工作积累和已取得的研究工作成绩及目前承担项目的情况（项目负责人和其它成员情况分开填写并且项目、成果及奖励等须注明承担或完成人姓名等相关信息）五、经费预算支 出 科 目金 额（万元）计 算 根 据 及 理 由合 计注: 预算支出科目按下列顺序填写: 1. 科研业务费 2. 实验材料费 3. 仪器设备费 4.相关经费。指导教师意见（就项目研究目标、内容、创新性、研究方案的可行性、预计创新成果等写出具体意见） 签名： 年 月 日指导教师承诺我承诺：如果项目获得资助，我将依照湖南省研究