乳酸菌生长最佳培养基的筛选

1、乳酸菌生长最佳培养基的筛选黄君红 成洁珊 陈青荷(湛江师范学院生物系 广东湛江 524048摘 要 文中通过检测乳酸菌在不同固体和半固体培养基中的菌落数、菌落大小及溶钙圈大小, 以筛选出乳酸菌生长的最佳培养基。实验表明, 在添加胡萝卜汁的乳酸菌分离固体培养基上, 乳酸菌生长最好, 活菌数含量最高, 菌落和溶钙圈最大。同种培养基, 半固体培养较固体培养更适于乳酸菌生长, 前者出菌快, 活菌数多。关键词 乳酸菌 固体培养基 半固体培养基 菌落中图分类号 Q939111文献标识码 A文章编号 0254-5071(2001 02-0009-03乳酸菌分离培养基(4号 :牛肉膏1g; 蛋白胨1g; 酵母

2、膏1g; 葡萄糖1g; 蕃茄汁20%; 吐温800105%; CaCO 32g; 溴甲酚绿0101%; 琼脂115g; 蒸馏水100ml; pH 615。改良马铃薯培养基(5号 :马铃薯(去皮 200g 煮出汁; 脱脂牛乳100ml(016% ; 酵母膏5g; 琼脂15g; 加水至1000ml; pH710; 配培养基时, 脱脂牛乳90e 、水浴30min, 与其它成分分开灭菌, 倒平板前混合。蕃茄汁培养基(6号 :蕃茄汁20g; 脱脂牛乳10g; 蛋白胨10g; 琼脂6g; 加蒸馏水至400ml; pH 610612。11212 添加不同配料比较实验选用平菇、马蹄、大葱、青瓜、胡萝卜、马铃薯

3、各40g, 煮汁, 分别添加在乳酸菌分离培养基中, 配制成6种添加不同配料的乳酸菌分离培养基。11213 半固体培养基除琼脂含量为013%外, 其余成分均与固体培养基相同。113 实验方法11311 固体培养取经多次活化的乳酸菌发酵奶1ml, 用无菌水进行10倍系列均匀稀释, 取10-6, 10-7, 10-8三种稀释度, 用混合平板法培养, 凝固后置于37e 培养, 24h 后进行菌落计数, 每天一次, 并用直尺在放大镜下测量菌落、溶钙圈的大小。11312 半固体培养根据高层半固体琼脂培养基具有良好厌氧性能的原理, 利用马向前等人研制的一种简便、快速的计数方法, 在6种半固体培养基上对乳酸菌

4、进行活菌计数6。将培养基融化, 加入1ml 乳酸菌发酵奶, 以10倍系列均匀稀释。凝固后置37e 培养, 24h 后计菌落数, 每天一次, 并用直尺在放大镜下测量菌落的大小。2 结果211 固体培养基的筛选在上述6种固体培养基中, 乳酸菌的生长情况见表1。#乳酸菌是有益于人体健康的益生菌, 主要存在于人体肠道, 其有助于宿主调整正常菌群, 维持肠道微生态环境的平衡。乳酸菌的代谢产物能降低肠道内的pH 值, 抑制肠道中腐败菌的生长和减弱腐败菌在肠道的产毒作用, 并有帮助消化、防止便秘, 防止细胞老化, 降低胆固醇, 抗肿瘤以及调节人体生理机能等保健和医疗作用1-5。在食品向天然型、功能型发展的今

5、天, 乳酸菌制品正愈来愈受到人们的重视, 通过检测乳酸菌在不同固体和半固体培养基中的菌落数, 菌落和溶钙圈的大小, 以筛选出乳酸菌生长的最佳培养基, 用于乳酸菌制品的研究与开发。1 材料及方法111 菌种及来源保加利亚乳杆菌(lactobacillus bulga ricus , 由西北农业大学微生物室提供。(以下简称乳酸菌 。112 培养基11211 固体培养基的筛选RJP 培养基(1号 :牛肉膏3g; 蛋白胨3g; 酵母膏3g; 乳糖20g; 琼脂15g; 蒸馏水1000ml; pH610。LAB 培养基(2号 :牛肉膏10g; 酵母膏10g; 乳糖20g; 琼脂15g; 吐温80110m

6、l; CaCO 310g; KH 2PO 42g; 蒸馏水950ml; pH 616。214号培养基(3号 :牛肉膏3g, 胰胨10g; NaCl5g; 酵母膏6g; 葡萄糖2g; 半胱氨酸013g; 琼脂15g; 蒸馏水1000ml; pH 714715。黄君红表1 不同培养基中乳酸菌的生长情况个/ml5号6号菌 数110510811301081140108210510821301021301088培养时间天数1234561号菌落菌 数2号3号4号菌落溶钙圈菌 数014001400160013510801381001381088菌落溶钙圈菌 数110011101140116310811651

7、0116510888注:1 因1号、3号、5号、6号培养基中不含Ca 2+, 不会出现菌落的溶钙圈, 故在表中不列项。2 菌落直径mm, 溶钙圈直径mm 。从表1的结果可以看出, 在6种培养基中, 乳酸菌在乳酸菌分离培养基中生长最佳, 第四天, 活菌数达3197108个/ml, 第六天菌落直径达0190mm, 溶钙圈直径达1140mm 。其次是蕃茄汁培养基, 第五天, 活菌8长最差的是214号培养基, 第五天活菌数仅为0138108个/ml, 菌落直径为0104mm 。212 在乳酸菌分离培养基中添加不同配料的比较实验在乳酸菌分离培养基中添加不同配料, 乳酸菌的个/ml胡萝卜马铃薯数达2130

8、10个/ml, 菌落直径0112mm 。乳酸菌生生长情况见表2。表2 不同配料对乳酸菌生长的影响培养时间天数123456菌 数112510112510112510112510112510112510999999平菇-菌 数015010015010313010410010410010410010马蹄菌落溶钙圈888888大葱菌 数015010015010218010418010810010110310888888青瓜菌 数003195103195103195103195108888菌落溶钙圈01020122-菌落溶钙圈菌 数菌落溶钙圈菌 数菌落溶钙圈000128-8102310010081305

9、18010001020122-8-988注:菌落直径mm, 溶钙圈直径mm 。表2的结果表明, 在乳酸菌分离培养基中添加不同配料, 以加入胡萝卜汁, 乳酸菌生长最佳, 第五天, 活菌数达2138109个/ml, 为单一培养基活菌数的6倍。其次以加入平菇汁和大葱汁较好, 第六天, 活菌数分别达112510个/ml 和110310个/ml, 为单一培养基的311倍和216倍。生长较差的依次是青瓜汁、马铃薯汁和马蹄汁, 与单一培养基对比, 活菌数无99明显变化。另外, 添加不同配料, 乳酸菌的菌落及溶钙圈大小均无明显变化。213 乳酸菌在固体培养和半固体培养的比较按上述各种培养基配方, 添加不同剂量

10、的琼脂, 制成固体和半固体两类培养基, 接入乳酸菌进行培养, 检测其生长情况, 结果见表3。个/ml6号半固体菌数012010D 115010D 211010D 211010D 211010D 211010D表3 乳酸菌在固体培养基和半固体培养基中生长情况的比较培养时间天数1234562号固体菌数0130108110510811431081160108116810811681082号半固体菌数117010D 118010D 119010D 119010D 119010D 119010D4号固体菌数011010811901082122108319710831971083197108菌落01104

11、号半固体菌数00160108010610D 016010D 016010D 016010D菌落06号固体菌数110510811301081140108210510821301082130108菌落0110注:1 采用半固体培养基时, 乳酸菌菌落的溶钙圈彼此连成一片, 不能测量溶钙圈的大小。1号、3号、5号的比较略。2 菌落直径mm 。中国酿造年第2期 112期表3的实验结果表明, 同种培养基, 相同培养条件, 乳酸菌在半固体培养基中活菌数大大增加, 为固体培养基活菌数的15113倍不等, 且高峰期出现较早, 一般在第三天。3 讨论乳酸菌有特殊且复杂的营养要求, 正常生长需要各类营养成分满足其碳

12、源、氮源、能源、无机盐、生长因素及水的需要。研究发现在乳酸菌分离固体培养基上, 乳酸菌生长最佳, 活菌数最多, 菌落、溶钙圈最大。在乳酸菌分离培养基中, 含有蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、蕃茄汁等多种组分。其中, 牛肉膏、蛋白胨含有各种氨基酸、肽类、7月示等可溶性氮化合物,另外, 固体培养, 采用的琼脂浓度为115%, 培养基较硬实, 而半固体培养基, 琼脂的含量仅为013%, 较软, 菌体易在其中扩展为肉眼可见的菌落。故半固体培养较固体培养更适于乳酸菌的生长繁殖。综上所述, 添加胡萝卜汁的乳酸菌分离半固体培养基最适合于培养乳酸菌, 可利用该培养基进行优质乳酸菌菌种的筛选, 广泛用于食品、医药、农业

13、、工业等各行业, 创造更高社会效益和经济效益。参考文献1 罗予, 李金陵, 蔡访勤1口服乳酸杆菌对大鼠粪便正常菌群的影响1微生物学报, 1992, 27(3 :2952972 郭维烈1实用微生物技术1北京:科学技术文献出版社,1991160703 HLeming HP. Fermented Vegetables 1In:Rose A Eed. Econom 2ic Microbiolgy:F er mented Food. New York:Academic Press, 1982, Vol. 7:2274 Daeschel MA 1F ood Microbiology, 1984, 1:30

14、33135 顾瑞霞, 谢继志1乳酸菌与人体保健1北京:科学出版社,19951156 马向前, 周德庆1双岐杆菌和乳酸菌的一种简便快速计数法1微生物学报, 1997, 37(1 :62647 诸葛健, 王正祥1工业微生物实验技术手册1中国轻工业出版社, 199411091128 黄君红, 陈青荷1提高泡菜汁中乳酸菌含量的研究1中国酿造, 1997, (4 :26299 刘铭主1烹饪营养学1中国商业出版社, 1990126629010 周德庆1微生物学教程1高等教育出版社, 19931193199为乳酸菌生长提供氮源; 酵母膏为乳酸菌生长提供氨基酸、维生素类和无机盐类, 葡萄糖则供给丰富的碳源,

15、等等。另外, 蕃茄汁富含维生素, 可刺激乳酸菌快速生长繁殖。如在乳酸菌分离固体培养基中添加不同配料, 乳酸菌生长更佳, 尤其以添加胡萝卜汁最好, 活菌数为单一培养基活菌数的6倍。因为胡萝卜汁中富含B 2胡萝卜素, 蕃茄红素, 氨基酸, 维生素B 1、维生素B 2、维生素9PP 、维生素C 、和铜、锌等无机盐8、, 大大刺激乳酸菌的生长繁殖。固体和半固体培养比较实验中, 乳酸菌菌落在半固体培养基上出现早, 活菌数明显增加, 可能的原因是, 乳酸菌多数是厌氧型细菌, 它们的生长不需要氧10。高层半固体琼脂培养基具有良好的厌氧性能, 能更好地满足乳酸菌这一生长特性; 而固体培养基, 在普通的培养箱中

16、培养, 氧压大, 可影响乳酸菌的生长。The Choice of The Optimal Medium for The Growth of LacticsHuang Junhong(Biology Department of ZhanJiang Normal College GuangDong ZhanJiang 524048Abstr act T he optimal medium for the growth of lactics was chosen by detecting the number, size of colony and the size of calcium 2diss

17、olv 2ing zone when the bacteria gr ew in different solid and semisolid medium. The results showed that the growth of the bacteria was best, the number of living bacter ia was the largest and the calcium 2dissolving zone was the biggest when the bacter ia grew in the lactics detaching solid medium which adding carrot juice.