大豆苷元对腹主动脉缩窄大鼠靶器官脂质过氧化反应的影响

1、大豆苷元对腹主动脉缩窄大鼠靶器官脂质过氧化反应的影响        【摘要】     目的研究大豆苷元(daidzein,DD)对腹主动脉缩窄大鼠靶器官脂质过氧化反应的影响。方法采用腹主动脉缩窄术制备大鼠实验模型。将大鼠随机分为假手术对照组、模型组、DD（30，60，120 mg· kg-1）治疗组。 给药4周后处死大鼠，测量大鼠脑、肾、肝组织中丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD）活性以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX) 活性。结果与模型组比较

2、，DD能使大鼠脑、肾、肝组中MDA含量显著降低，SOD及GSH-PX活性显著升高。结论腹主动脉缩窄术能引起大鼠脑、肾、肝脏异常的脂质过氧化状态， DD可以减轻脑、肾、肝脏脂质过氧化损伤作用。     【关键词】  大豆苷元 脂质过氧化 丙二醛 超氧化物歧化酶 谷胱甘肽过氧化物酶    Influence of Daidzein on Lipid-peroxidation of Target-organ in Rats with Abdominal Aorta ConstrictionXIONG Xiaoq

3、in,ZHOU Li，ZHOU Qing，LIU Jianxin(Gannan Medical College, Jiangxi Ganzhou 341000，China)Abstract：ObjectiveTo study the influence of daidzein on lipid-peroxidation of target-organ in rats with abdominal aorta constriction.MethodsThe model rats were prepared by  abdominal aorta constriction. The op

4、erated rats were divided into sham operated  control group ,aorta-constricted model group and three DD groups ( 30，60，120 mg·kg-1). After four week treatment, the content of malondialdehyde(MDA), the activities of superoxide dismutase(SOD) and glutathione peroxidase (GSH-PX) in brain, kidn

5、ey and liver of all rats were measured .ResultsCompared with aorta-constricted model group, DD could significantly decrease the content of MDA and increase the activities of SOD and GSH-PX respectively in brain, kidney and liver in rats. ConclusionAbdominal aorta constriction can result in peroxidat

6、ion in rat, and DD can alleviate the body lesion caused by peroxidation.Key words：Daidzein;  Lipid peroxides;   Malondialdehyde;   Superoxide dismutase;   Glutathione  peroxidase     大豆苷元 (daidzein,DD ) 是一种从大豆中分离提取的异黄酮类化合物。研究发现大豆异黄酮的生物活性主要体现在4种单

7、体组分上，即大豆苷元、大豆苷、染料木素和染料木苷，而不同单体组分的生物活性不同1。其中大豆苷元具有抗心率失常、抗缺氧、抗菌、抑制胆囊收缩、治疗骨质疏松等作用26。本研究旨在探讨DD对大鼠腹主动脉缩窄所致靶器官脂质过氧化损伤的保护作用及其机制。1  器材与方法1.1  材料1.1.1  药品与试剂 大豆苷元为宜化化工有限责任公司产品；丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化酶和考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供；其它试剂均为国产分析纯。1.1.2  仪器 722N可见光分光光度计，上海精密科学仪器有限公司产品；KDC-2

8、046低速冷冻离心机，合肥科大创新股份有限公司中佳分公司产品；TG328B型光学分析天平，湘仪天平仪器厂产品；ZS83-1内切式组织匀浆器，浙西机械厂产品。1.1.3  动物 Wistar大鼠，雄性，体重220 250 g，由赣南医学院实验动物中心提供。1.2  方法1.2.1  腹主动脉缩窄模型制备与实验分组 将大鼠按体重随机分成5组：假手术对照组，腹主动脉缩窄模型组，DD，治疗组。大鼠用10%水合氯醛溶液（350 mg/kg，ip）麻醉，在无菌条件下从大鼠左侧腹部切口，在膈下1cm处肾动脉分叉上方分离出腹主动脉，用4号丝线将腹主动脉和8号针

9、头一同结扎，确认扎紧后抽去针头，造成该部位不完全结扎，逐层缝合腹部切口。术后每只大鼠肌注青霉素5万单位抗感染，连续7 d。假手术组大鼠分离腹主动脉但不结扎，其它步骤同造模组。治疗组大鼠于造模后第2天开始每天分别灌胃给药DD（30，60和120 mg·kg-1·d-1）治疗组，连续4周，假手术组与模型组大鼠每天灌胃相同体积的溶剂。药物DD（30，60和120 mg·kg-1）治疗组临用时溶于0.5%羧甲基纤维素钠溶剂中。1.2.2  丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶测定 末次给药后禁食12 h，断头处死大鼠，立即取出脑、肾、肝，用4生理

10、盐水冲洗，滤纸拭干，在冰浴中用生理盐水制成10%组织匀浆，4，3 500 r/min离心10 min，取上清液；严格按照试剂盒说明测定MDA含量，SOD以及GSH-PX活性。MDA含量用硫代巴比妥酸比色法测定；SOD活性用黄嘌呤氧化酶法测定；用DTNB直接法测定GSH-PX活力，组织GSH-PX活力单位规定为每毫克蛋白质，每分钟扣除非酶反应作用,使反应体系中GSH浓度降低1 mol/L为1个酶活力单位；用考马斯亮蓝法测定蛋白，以牛血清白蛋白为标准。1.2.3  统计学处理  所有数据用±s表示，多组间比较用单因素方差分析，两两比较用q检验。2  结果2.

11、1  DD 对腹主动脉缩窄大鼠脑、肾、肝组织中MDA的影响 结果见表1。腹主动脉缩窄术后4周，与假手术组大鼠比较，模型组大鼠脑、肾、肝组织中MDA的含量显著升高（P<0.01），提示腹主动脉缩窄引起大鼠脏器的脂质过氧化反应；与模型组比较，DD （30，60和120 mg·kg-1·d-1）治疗组大鼠脑、肾、肝组织中MDA的含量显著降低（P< 0.01或P<0.05），提示DD能减轻大鼠腹主动脉缩窄所致脏器脂质过氧化反应。表1  DD 对腹主动脉缩窄大鼠脑、肾、肝组织MDA的影响(略)2.2  DD 对腹主动脉缩窄大鼠

12、脑、肾、肝组织中SOD的影响 结果见表2。腹主动脉缩窄术后4周，与假手术组大鼠比较，模型组大鼠脑、肾、肝组织中SOD活性显著降低（P<0.01），提示腹主动脉缩窄引起大鼠脏器的脂质过氧化反应；与模型组比较，DD（30，60和120 mg·kg-1·d-1）治疗组大鼠脑、肾、肝组织中SOD活性显著升高（P<0.01或P<0.05），提示DD对大鼠腹主动脉缩窄所致脏器脂质过氧化损伤有保护作用。表2  DD对腹主动脉缩窄大鼠脑、肾、肝组织SOD的影响(略)2.3  DD 对腹主动脉缩窄大鼠脑、肾、肝组织中GSH-PX的影响 

13、;结果见表3。腹主动脉缩窄术后4周，与假手术组大鼠比较，模型组大鼠脑、肾、肝组织中GSH-PX活性显著降低（P<0.01），提示腹主动脉缩窄引起大鼠脏器的脂质过氧化反应；与模型组比较，DD（30，60和120 mg·kg-1·d-1）治疗组大鼠脑、肾、肝组织中GSH-PX活性显著升高（P<0.01，P<0.05），提示DD对大鼠腹主动脉缩窄所致脏器脂质过氧化损伤有保护作用。表3  DD 对腹主动脉缩窄大鼠脑、肾、肝组织GSH-PX的影响(略)3  讨论     腹主动脉缩窄术通过缩窄腹主动脉增加外

14、周循环阻力造成压力负荷性心肌代偿肥厚，心室容积增加，心脏扩大，后期心脏失代偿，最终导致心力衰竭。大鼠腹主动脉缩窄术后4周可致后负荷增高型心室肥厚动物模型7。本室曾研究过DD对大鼠腹主动脉缩窄所致心室肥厚的影响作用8。本研究探讨DD对大鼠腹主动脉缩窄所致脏器脂质过氧化损伤的保护作用。脂质过氧化反应主要指在生物膜多不饱和脂肪酸 (PUFA)中发生的一种自由基链式反应,被认为是许多损伤的起点。MDA是氧自由基与多不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应的产物，其含量与氧自由基的量及脂质过氧化的程度呈正比。机体的抗氧化防御系统有两类：一类是酶促防御系统，包括SOD，GSH-PX等；另一类是非酶促反应，包括还原型

15、谷胱甘肽（GSH）、维生素E等。SOD是动物机体内重要的抗氧化酶，机体对自由基的灭活主要由SOD完成，测定其活力可间接反应自由基产生情况。GSH-PX可催化GSH对过氧化物及自由基的还原反应，从而起到保护细胞膜及重要蛋白质结构和功能完整的作用。     本研究显示在腹主动脉缩窄后负荷增高型心室肥厚模型心室肥厚背景下，模型组大鼠肝、肾、脑组织 MDA含量显著增加，SOD及GSH-PX活性显著降低，表明各靶器官发生脂质过氧化反应引起损伤。经DD治疗后各组织 MDA的含量显著降低，SOD以及GSH-PX活性显著升高，表明DD对各靶器官有抗脂质过氧化作用，从而减

16、少靶器官损伤。其机制可能与以下几个方面有关：减少自由基生成，增加SOD及GSH-PX活性，调节氧自由基代谢，提高组织的抗氧化能力。    【参考文献】  1罗少洪，陈伟强，陈耕夫，等.大豆总异黄酮的提取及含量测定J.广东药学，2005,15(4)：7.2叶和杨，邱 峰，曾 靖，等.大豆苷元抗心率失常作用的研究J.中国中药杂志，2003,28(9)：853.3曾靖，黄志华，邱 峰，等.大豆苷元耐缺氧的实验研究J.中国现代应用药学杂志，2004,21(6)：454.4钟星明，王小丽，张乡城，等.大豆苷元抑菌活性的初步研究J.赣南医学院学报，2006，26(2)：166.5曾靖