沙门氏菌培训

1、沙门氏菌培训 沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一。患病之一。 其病原沙门氏菌属肠道细菌科，包括引起食物其病原沙门氏菌属肠道细菌科，包括引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。 除可感染人外，还可感染很多动物包括哺乳类、除可感染人外，还可感染很多动物包括哺乳类、鸟、爬行类、鱼、两栖类及昆虫。鸟、爬行类、鱼、两栖类及昆虫。特性 沙门氏菌革兰氏阴性、两端钝圆的短杆菌（比沙门氏菌革兰氏阴性、两端钝圆的短杆菌（比大肠杆菌细）。（大肠杆菌细）。（0.70.71.5m1.5m）（2 25m5m）散在。）

2、散在。 无荚膜和芽孢，都具有周身鞭毛（除鸡白痢沙门无荚膜和芽孢，都具有周身鞭毛（除鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌外），能运动，大多数具有菌氏菌、鸡伤寒沙门氏菌外），能运动，大多数具有菌毛，能吸附于宿主细胞表面或凝集豚鼠红细胞。毛，能吸附于宿主细胞表面或凝集豚鼠红细胞。培养特性 A A 需氧及兼性厌氧菌。需氧及兼性厌氧菌。 B B 在普通琼脂培养基上生长良好，培养在普通琼脂培养基上生长良好，培养24h24h后，形成中后，形成中等大小、圆形、表面光滑、无色半透明、边缘整齐等大小、圆形、表面光滑、无色半透明、边缘整齐的菌落，其菌落特征亦与大肠杆菌相似（无粪臭的菌落，其菌落特征亦与大肠杆菌相似（无粪臭

3、味）。味）。 C C 鉴别培养基（麦康凯、鉴别培养基（麦康凯、SSSS、伊红美蓝）：一般无、伊红美蓝）：一般无色菌落。色菌落。 D D 三糖铁琼脂斜面：斜面为红色，底部变黑并产气。三糖铁琼脂斜面：斜面为红色，底部变黑并产气。 生化特性1 1）发酵葡萄糖，麦芽糖，甘露醇和山梨醇产气。）发酵葡萄糖，麦芽糖，甘露醇和山梨醇产气。2 2）不发酵乳糖、蔗糖和侧金盏花醇。）不发酵乳糖、蔗糖和侧金盏花醇。3 3）不产吲哚、）不产吲哚、V-PV-P反应阴性。反应阴性。4 4）不水解尿素和对苯丙氨酸不脱氨。）不水解尿素和对苯丙氨酸不脱氨。 伤寒沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌及一部分鸡白痢沙门伤寒沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏

4、菌及一部分鸡白痢沙门氏菌发酵糖不产气，大多数鸡白痢沙门氏菌不发酵麦芽氏菌发酵糖不产气，大多数鸡白痢沙门氏菌不发酵麦芽糖。糖。血清学特性 沙门氏菌具有复杂的抗原结构。沙门氏菌具有复杂的抗原结构。 一般沙门氏菌具有菌体一般沙门氏菌具有菌体( (O)O)抗原、鞭毛抗原、鞭毛( (H)H)抗原和抗原和表面抗原表面抗原(Vi(Vi荚膜或包膜抗原荚膜或包膜抗原) )三种抗原。三种抗原。传播途径传播途径 肉的污染肉的污染 肉及其制品的沙门氏菌检出率美国为肉及其制品的沙门氏菌检出率美国为20%25%20%25%、英国为、英国为9.9%9.9%、日本检查进、日本检查进口家禽的污染率为口家禽的污染率为10.3%1

5、0.3%，国内肉类沙门氏菌检出率在，国内肉类沙门氏菌检出率在1.1%39.5%1.1%39.5%。 蛋的污染蛋的污染 蛋及其制品沙门氏菌检出率为蛋及其制品沙门氏菌检出率为3.9%-43.7%3.9%-43.7%，由于吃蛋引起鼠伤寒病的病例报告逐渐，由于吃蛋引起鼠伤寒病的病例报告逐渐有增加的趋势。有增加的趋势。 环境污染环境污染 食品在加工、运输、出售过程中往往被沙门氏菌污染。沙门氏菌在粪便、土壤、食品在加工、运输、出售过程中往往被沙门氏菌污染。沙门氏菌在粪便、土壤、食品、水中可生存食品、水中可生存5 5个月至个月至2 2年之久。年之久。 传播问题传播问题 恢复期患者和无症状的带菌者也是常见的传

6、染源。恢复期患者和无症状的带菌者也是常见的传染源。沙门氏菌检测标准 GB 4789.4-2010增菌和选择性培养增菌和选择性培养25g样品225ml BPW36 818h培养1ml BPW增菌液+10ml SCTTB增菌液在42、SC增菌液在36各培养1824小时1ml BPW增菌液+10ml TTB分别从TTBTTB和SCSC增菌液中取1环，接种到BS和HE琼脂上培养BS琼脂在36培养4048小时HE琼脂在36培养1824小时分别从BS和HE琼脂上挑选可以菌落进行TSI初步生化鉴定可疑菌落判定可疑菌落判定HE琼脂琼脂BS琼脂琼脂XLD琼脂琼脂科玛嘉显色琼脂阴性科玛嘉显色琼脂阴性科玛嘉显色琼脂

7、阳性科玛嘉显色琼脂阳性生化试验生化试验1、先从BS、HE或XLD或显色培养基上挑取可疑菌落。2、接种至TSI，先在斜面上划线，然后再底层穿刺。4、将TSI和NA至于 36，1824h培养3、将接种TSI完毕的接种针不要灭菌，直接在营养琼脂平板上划线。根据上表中可理解为只有在斜面和底层产碱、不产H2S、不产气的情况下可不进行生化鉴定，直接判定为非沙门氏菌，其余任何情况均需进行生化鉴定。TSI鉴定三糖铁生化试验三糖铁生化试验底层产H2S底层产酸斜面产碱斜面底层产酸产碱底层产酸斜面产碱底层产H2S产酸产气产酸产气产H2S只在只在TSITSI产碱的产碱的情况下可判定情况下可判定无沙门氏菌，无沙门氏菌，

8、其余任何情况其余任何情况均需进行生化均需进行生化鉴定鉴定生化试验生化试验1、准备一只、准备一只2ml无菌生理盐水试管、酒精灯、接种环、生化鉴定套装无菌生理盐水试管、酒精灯、接种环、生化鉴定套装 。2、从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，接种至生理盐水中，制成、从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，接种至生理盐水中，制成0.5个麦氏浊度。个麦氏浊度。3、依次在各个安瓿（、依次在各个安瓿（bu）瓶中滴加菌悬液）瓶中滴加菌悬液3滴。滴。4、在赖氨酸脱羧酶肉汤及对照和氰化钾及对照中个滴加无菌石蜡覆盖。、在赖氨酸脱羧酶肉汤及对照和氰化钾及对照中个滴加无菌石蜡覆盖。5、在、在36培养培养1824h。菌悬液制备菌悬液制备

9、ORORO.5个麦氏浊度的个麦氏浊度的菌悬液菌悬液依次在每个安瓿瓶中依次在每个安瓿瓶中滴加菌悬液滴加菌悬液23滴。滴。第一步第一步第二步第二步第三步第三步生化试验准备生化试验准备色色氨氨酸酸肉肉汤汤赖赖氨氨酸酸脱脱羧羧酶酶肉肉汤汤氨氨基基酸酸脱脱羧羧酶酶肉肉汤汤尿尿素素酶酶氰氰化化钾钾培培养养基基氰氰化化钾钾培培养养基基对对照照甘甘露露醇醇山山梨梨醇醇半半乳乳糖糖苷苷色氨酸肉色氨酸肉汤经汤经36，1824h培培养后滴加养后滴加靛基质试靛基质试剂，片刻剂，片刻观察结果观察结果阳性为玫阳性为玫瑰红色。瑰红色。色氨酸脱色氨酸脱羧酶及对羧酶及对照和氰化照和氰化钾及对照钾及对照转种结束转种结束后需滴加后

10、需滴加液体石蜡液体石蜡覆盖试验覆盖试验管方可进管方可进行培养。行培养。靛基质靛基质试验试验+时补做时补做甘露醇甘露醇山梨醇山梨醇试验，试验，试验阳试验阳性后进性后进行血清行血清学鉴定学鉴定TSI-时，时，进行进行ONPG试验，试验，ONPG阴性阴性时进时进行血行血清学清学鉴定。鉴定。H2S+、靛基质、靛基质- 、尿素、尿素-、KCN-、赖氨酸、赖氨酸+后后进行血清学鉴定。进行血清学鉴定。生化试验色氨酸色氨酸吲哚试吲哚试验阴性验阴性符合符合赖氨酸赖氨酸阳性对照阳性对照阴性阴性0NPG阴性阴性尿素酶尿素酶阴性阴性KCN及及对照对照阴性阴性甘露醇甘露醇山梨醇山梨醇阳性阳性符合符合符合符合符合符合符合

11、符合符合符合血清学鉴定血清学鉴定沙门氏菌的分类沙门氏菌属分为两个种：肠道沙门氏菌(种) 肠道亚种、萨拉姆亚种、亚利桑那亚种、双相亚利桑那沙门氏菌、 豪顿沙门氏菌及因迪卡沙门氏菌 (6个亚种)邦戈尔沙门氏菌(种)沙门氏菌的分类及命名沙门氏菌的分类及命名 -沙门氏菌的分类、命名沙门氏菌的分类、命名沙门氏菌 抗原O抗原抗原 也称菌体抗原，是细胞壁的组成成分Vi抗原抗原 是一种特殊的菌体抗原，属于K抗原群（如伤寒沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌和都柏林沙门氏菌都含有Vi抗原）H抗原（即鞭毛抗原）抗原（即鞭毛抗原） H抗原与抗血清的反应成絮状或绒状。 大部分沙门氏菌H抗原都具有两相。 第一相被称为特异性相，

12、第二相为非特异性相。O、H、Vi抗原抗原vi抗原抗原 因与毒力有关而命名为因与毒力有关而命名为vi vi抗原。抗原。 由聚由聚-n-n-乙酰乙酰-d-d-半乳糖胺糖醛酸组成。半乳糖胺糖醛酸组成。 不稳定，经不稳定，经6060加热、石碳酸处理或人工传代培养易破加热、石碳酸处理或人工传代培养易破坏或丢失。坏或丢失。 Vi Vi抗原存在于细菌表面，可阻止抗原存在于细菌表面，可阻止o o抗原与其相应抗体的反应。抗原与其相应抗体的反应。vi vi抗原的抗原性弱。当体内菌存在时可产生一定量抗体；细菌被清抗原的抗原性弱。当体内菌存在时可产生一定量抗体；细菌被清除后，抗体也随之消失。除后，抗体也随之消失。 故

13、测定故测定vi vi抗体有助于对伤寒带菌者的检出。抗体有助于对伤寒带菌者的检出。 新从患者标本中分离出的伤寒杆菌、丙型副伤寒杆菌等有此新从患者标本中分离出的伤寒杆菌、丙型副伤寒杆菌等有此抗原。抗原。O抗原抗原 为脂多糖，性质稳定。为脂多糖，性质稳定。 比较耐热，比较耐热，100100不被破坏，也不易被酒精不被破坏，也不易被酒精破坏；破坏； O O抗原以阿拉伯数字表示，从抗原以阿拉伯数字表示，从1 1排到排到6767，但，但删去了删去了9 9个抗原，现在有个抗原，现在有5858个抗原；个抗原； 凡含有群特异性共同抗原的菌型归类为一个凡含有群特异性共同抗原的菌型归类为一个O O群，以主要抗原来表示

14、，某些次要抗原可以出现群，以主要抗原来表示，某些次要抗原可以出现在多个群中。在多个群中。- -H H抗原抗原 H H抗原存在于鞭毛之中，为蛋白质。抗原存在于鞭毛之中，为蛋白质。 由肽链中氨基酸的排列顺序及空间构型决定其特异性。由肽链中氨基酸的排列顺序及空间构型决定其特异性。 不耐热，经加热和用乙醇及碱处理易变性。不耐热，经加热和用乙醇及碱处理易变性。 H H抗原常有两相的变异。抗原常有两相的变异。 第一相为特异相，用小写英文字母表示，如：第一相为特异相，用小写英文字母表示，如：a a、b b、I I、e e、h h等。等。 第二相为非特异相，用阿拉伯数字表示，如：第二相为非特异相，用阿拉伯数字

15、表示，如：1 1、2 2、5 5等。等。 但也有少数菌含有第一相中的抗原但也有少数菌含有第一相中的抗原e e、n n、x x等成分。等成分。AF群群对应的对应的O价抗原价抗原 沙门氏菌抗原表中符号意义：沙门氏菌抗原表中符号意义： _ 指溶原状态下指溶原状态下O O因子可以并存，和平共处。因子可以并存，和平共处。 指指O O因子不相容，只能有一种。因子不相容，只能有一种。 指指O O或或H H因子有存在或不存在的可能性因子有存在或不存在的可能性。O10、O15、O15，O34价抗原不相容只存在一种。价抗原不相容只存在一种。都柏林沙门氏菌存在或都柏林沙门氏菌存在或不存在表面不存在表面Vi抗原。抗原

16、。西翰普顿沙门氏菌、都柏林沙门氏菌属于单相菌，单相菌，H抗原只存在第一项。抗原只存在第一项。H抗原第二项抗原第二项H1和和H2价价抗原存在或不存在抗原存在或不存在O1价抗原与其他抗原和价抗原与其他抗原和平共处，平共处，O5、O27价抗价抗原存在或不存在。原存在或不存在。沙门氏菌菌型的表示方法 血清型以数字和字母表示. 例如:查考夫曼-怀特沙门氏菌属抗原表. 鼠鼠伤寒沙门氏菌伤寒沙门氏菌: O O抗（抗（1 1，4 4，55，1212），）， 第第相相H H抗原（抗原（i i） 第第相相H H抗原抗原( 1,2( 1,2) )。 它的血清型应表示为:鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌（ 1 1，4 4

17、，55，1212：i i：1 1，2 2）沙门氏菌的判定原则采用血清学的方法,按照考夫曼-怀特沙门氏菌属抗原表解判定菌型.考夫曼-怀特沙门氏菌属抗原表 内的O抗原可能存在或不存在。 内的H抗原可能是罕见的，正常情况下一般不存在。菌名菌名原名原名O抗原抗原H抗原抗原第第1相相第第2相相基桑加尼沙门氏菌基桑加尼沙门氏菌S. kisangani1,4,5,12a1,2维也纳沙门氏菌维也纳沙门氏菌S. wien1,4.12,27b1,w埃森沙门氏菌埃森沙门氏菌S. essen4,12g, m-金斯敦沙门氏菌金斯敦沙门氏菌S. kingston1,4,5,12,27g, s, t1,2鼠伤寒沙门氏菌鼠伤

18、寒沙门氏菌S. typhimurium1,4,5,12i1,2印地安纳沙门氏菌印地安纳沙门氏菌S. indiana1,4,12z1,7沙门氏菌的血清鉴定的方法用O、H 和Vi因子血清与待检的菌株作玻片凝聚试验。1. 1.先用先用O O因子血清确定菌株所属的因子血清确定菌株所属的 O O群及群及O O抗原的各种抗原的各种成分。成分。2. 2.再用再用H H因子血清检查其第因子血清检查其第1 1相和第相和第2 2相的相的H H抗原以确定血抗原以确定血清型。清型。3. 3.必要时还要用必要时还要用ViVi血清检查血清检查( (目前有目前有3 3种种) )。1. . 先用先用AFAF多价多价O O血清

19、检查，确定菌株是否在血清检查，确定菌株是否在AFAF六个六个O O群的范围内。群的范围内。2. 2. 再用代表六个再用代表六个O O群的群的O O因子血清检查，即因子血清检查，即O2O2（A A）、）、O4O4（B B）、）、O7O7（C1C1）、）、O8O8（C2C2）、）、O9O9（D D）、）、O3O3，1010（E E）、）、O11O11（F F）。）。3. 3. 确定确定O O群之后，分别用群之后，分别用HA(aHA(a、b b、c c、d d、i i、z10z10、z29z29）HBHB、HCHC、HDHD四种多价四种多价H H血清检查。血清检查。4. 4. 用用3.3.所确定的多

20、价所确定的多价H H血清所包括的所有血清所包括的所有H H因子血清逐一检查定为第因子血清逐一检查定为第1 1相或第相或第2 2相相H H抗原。抗原。5. 5. 检出检出第第1 1相相H H抗原而未检出第抗原而未检出第2 2相相H H抗原，或抗原，或检出检出第第2 2相相H H抗原而未检出第抗原而未检出第1 1相相H H抗原的，要用位相变异的方抗原的，要用位相变异的方法再检查其另一个相。单相菌不必作位相变异检查。法再检查其另一个相。单相菌不必作位相变异检查。6. 6. 综合综合O O和和H H因子血清以及因子血清以及ViVi因子血清的检查结果，按照考夫曼因子血清的检查结果，按照考夫曼- -怀特沙

21、门氏菌属抗原表解判定沙门怀特沙门氏菌属抗原表解判定沙门氏菌的菌型。氏菌的菌型。沙门氏菌的血清型鉴定步骤位相变异的解释将一个双相沙门氏菌的菌株在琼脂平板上划线分离，所得的菌落将一个双相沙门氏菌的菌株在琼脂平板上划线分离，所得的菌落中，有的有第中，有的有第1 1相相H H抗原，有的则有第抗原，有的则有第2 2相相H H抗原。若任意挑取抗原。若任意挑取一个菌落在培养基上多次传代，其后代又可出现部分是第一个菌落在培养基上多次传代，其后代又可出现部分是第1 1相而另一部分是第相而另一部分是第2 2相的菌落。这种两个相的相的菌落。这种两个相的H H抗原可以交相抗原可以交相产生的现象称为位相变异。产生的现象称为位相变异。双相菌初次分离时，单个菌落的纯培养往往只有一个相双相菌初次分离时，单个菌落的纯培养往往只有一个相H H抗原，抗原，鉴别时常只能检出一个相，而测不出另