高效液相色谱仪使用sop

1、LC300 高效液相色谱仪使用 SOP1. 目的与意义规范 LC300 高效液相色谱仪的使用操作，保证高效液相色谱仪稳定性。2. 责任所有使用人员全面负责本 SOP 的实施。3. 仪器的组成本系统由高压输液泵、紫外检测器（190800 nm或190-400nm）、Rheodyne7725i 手动进样阀、 EasyChrom 色谱工作站、管路接头等组成。4. 操作步骤4.1 准备4.1.1准备所需的流动相，用合适的0.45 ym或者0.22um滤膜过滤，超声脱气10-15min ，装试剂的溶剂瓶一定用泡沫洗涮干净，再用纯净水涮干净，装试剂 前用对应的试剂润洗 3 遍。4.1.2 根据待分离制备的

2、样品需要更换合适的色谱柱（注意方向）。4.1.3配制样品和标准溶液，用合适的 0.45 ym或0.22 ym滤膜过滤。4.1.4 确保串口线将设备与计算机连接好，电源线链接正常。4.2 开机 接通电源，依次开启泵、检测器开关，打开计算机进入操作系统，双击桌面的 EasyChrom 色谱工作站 （中文版 ）图标进入工作站。4.3 排气泡将入液管放入装有流动相的储液瓶中， 打开排气阀； 用针管等在排气阀处吸出空 气，之后打开泵，用大流速冲洗片刻；如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至 气泡排尽。4.4 创建分析方法可在 EasyChrom 工作站的配置上直接设置流动相比例、流速、检测波长、 时间程序

3、以及检测器开启与关闭等参数，并重命名、保存。4.5 平衡系统 用流动相（梯度系统选用初始梯度平衡柱子）冲洗柱子至基线平稳，一般 需要大于 15 分钟至 1 小时，使用缓冲盐、离子对试剂的时候可能会更长。4.6 进样点击基线采集开始平衡柱子 20 分钟左右，基线完全平衡后在控制面板上点 击归零（或在配置页面下可以设置进样后自动归零）；点击“单次运行”，设置 好样品信息，点击“运行”按钮，等待进样；用进样针定量吸取样品溶液，在 LOAD 状态下推针进样， 再顺时针转动进样阀手柄至 INJECT 状态即完成进样操 作，谱图采集直接触发。4.7 保存谱图谱图采集之前， 设置好名称， 数据库后再采集结束

4、自动保存数据， 一定记得 规范命名。4.8 报告输出与打印 单击工具条上面的打印按钮，即可输出报告（推荐使用写字板格式），报 告头和报告尾可以在分析报告标签下设置，也可以打印好后再进行设置。实验后注意冲洗色谱柱，对于反相色谱柱（ C18 ,C8 等），若果流动中加 有缓冲盐，先用低浓度有机相（ 5%-10% 甲醇或乙腈）以 1 的流速冲洗 15-30 分钟，再替换成纯有机相冲洗 20 分钟以上，如果流动相中没有加缓冲盐则可以 直接用有机相（甲醇或者乙腈） 冲洗半小时以上，最后色谱柱要在有机相中保存。5. 注意事项5.1 流动相及样品溶液必须用 0.45um 或者0.22um 滤膜过滤，流动相还

5、要进 行超声脱气处理。5.2 进样时一定注意规范操作，注意六通阀两个状态，切换时动作一定要连续。5.3试验结束后，停泵，待泵的压力逐步降为0后，方可关闭泵的电源。5.4仔细阅读色谱柱说明书，保证色谱柱系统的适应性（如流动相pH 2-8等）。5.5 如流动相中含有缓冲盐，实验前需要用含有 5%甲醇或乙腈的水冲洗柱子 约15-30min，再过渡到100%有机相；实验后同样需要用含有 5%甲醇或乙腈 的水冲洗柱子约15-30min，再过渡到纯有机溶剂，冲洗20min以上，保存柱子。 同时，在整个实验过程中，要使用泵头冲洗装置，保证水不能干涸。5.6 如果设备在运行过程中出现压力剧烈跳动、流量不准时，要将单向阀卸下用洗耳球顺着单向阀吹35下，逆着单向阀吹35下，检查单向阀功能是否 正常（正常情况下单向阀顺着吹是通的，逆着吹是不通的）。然后用甲醇超