植物组织中还原糖含量的测定(精)_第1页
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文档简介

1、植物组织中还原糖含量的测定(3 ，5 二硝基水杨酸法一、实验目的通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，学习比色定糖法的基本操作。二、实验原理3，5二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色物质（即 3氨基 5硝基水杨酸，该物质在 540nm波长处有最大吸收。在一定浓度范围内，还原糖的量与棕红色物质的光吸收值成正比例关系，利用比色法可定量测定样品中的含糖量。三、实验仪器、试剂和材料1. 仪器： 25ml 刻度试管、离心管或漏斗、三角瓶、容量瓶、刻度吸管、离心机、分光光度计等。2. 试剂： 1mg/ml 葡萄糖标准液、 3，5二硝基水杨酸3. 材料：食用面粉四、实验操作步骤1、葡萄糖标准曲线的制

2、作取 7 支干燥洁净的 25ml 刻度试管或大试管，编号，按下表准确加样：0123456管号葡萄糖标0.20.40.60.81.01.20准液 /ml蒸馏水 /ml 2.01.81.61.41.21.00.83，5二硝基水杨1.51.51.51.51.51.51.5酸 /mlA540 nm将各管摇匀，在沸水浴中加热 5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至 25ml，加塞后 颠倒混匀 。在 540nm波长下，用 0 号管为参比管调零，分别读取各管的吸光度 (A540nm。以吸光度为纵坐标，葡萄糖毫克数为横坐标绘制标准曲线。2、样品中还原糖的提取准确称取 1.5g 食用面粉，放在小锥形瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加 25ml 蒸馏水，搅匀，置于50恒温水浴中保温20min，然后将锥形瓶中内容物转入一个 50mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。充分混合 ，过滤，滤液即为还原糖待测液。3、 样品含糖量的测定分别取 2ml 还原糖待测液于两支刻度试管或大试管中，然后各加 3，5二硝基水杨酸 1.5ml 。其余操作与制作葡萄糖标准曲线时相同。测定各管吸光度。五、实验结果处理以上述还原糖待测液的吸光度平均值，在标准曲线上查出相应的还原糖毫克数。按下式计算样品中还原糖的百分含量。提取液总体积还原糖 %=( 测定时取用体积 / 样品质量 (mg&

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