人参, 玄参, 苦参与藜芦配伍对大鼠部分生理, 生化指标的影响

1、人参、玄参、苦参与藜芦配伍对大鼠部分生理、生化指标的影响邹 坤 倪双燕 石冬梅 徐光耀 干翠萍 指导老师:王 易（上海中医药大学02中西医结合专业，201203）摘要目的：通过人参、苦参、玄参分别与藜芦配伍效果之间的对比，观察生理、生化指标的差异方法：通过给用药及对照组大鼠灌胃一周，并测量心率、GPT、GOT、BUN、Cr等生理、生化指标，观察用药及对照组上述各项生理、生化指标的差异与变化。结果：未观察到人参、苦参、玄参与藜芦配伍后出现严重的毒性反应与拮抗作用，但各配伍组之间及与对照组比较，部分生理、生化指标呈现一定差异。提示这些配伍可能产生与各药单用或非配伍使用具有不同的药理作用。关键词人参

2、 苦参 玄参 藜芦 十八反 “本草明言十八反”从古至今使中医药工作者所熟悉和遵循的，但也有不少医家用反药的成功案例。期间虽有李时珍，朱丹溪等发出过“圆机之世，又何必较之于世袭直古乎”的呼吁。但是由于种种原因和条件限制，未能对其进行深入研究。在许多情况下，十八反成为制约用药的“清规戒律”。诸参反藜芦是十八反之要点。但是对“诸参”解释各异、分歧较大，且据文献记载诸参反藜芦之案例报道亦甚少。而处方用反药却有明确记载。唐代孙思邈的千金要方第十卷八大五饮丸就有人参，苦参与藜芦同用。，而且古人认为三参功效相似神农本草经三参项下记载：人参，补五脏；苦参，补中；玄参，补肾气。与今日认为的功效主治差异较大。近年

3、来有关中药十八反的是实验研究报道开始增多。如部分药物的毒理研究试验，或相关的药理研究。但至今尚无定论。在诸参反藜芦的研究中，关于人参与藜芦的配伍研究较多。诸参与藜芦配伍间差异的比较较少。本次实验选取最早记载的且较为明确的三参（人参、玄参、苦参）与藜芦配伍，观察大鼠服药前后的重要生理生化生化指标的差异与变化 1材料与方法1.1实验动物SD雄性大鼠80只，清洁级，体重200250g,由上海中医药大学动物实验中心提供。1.2实验药物及制作 人参组根据体表面积（人与大鼠）药物剂量换算公式得： 人参组大鼠每日灌服量为0.4ml/只50%人参水煎剂人参藜芦合剂组根据体表面积（人与大鼠）药物剂量换算公式得：

4、人参藜芦合剂组大鼠每日灌服量为0.4ml/只50%人参藜芦合煎剂（人参藜芦比例为10:1）苦参组：根据体表面积（人与大鼠）药物剂量换算公式得： 苦参组大鼠每日灌服量为0.4ml/只50%苦参水煎剂苦参藜芦合剂组根据体表面积（人与大鼠）药物剂量换算公式得：苦参藜芦合剂组大鼠每日灌服0.4ml/只50%苦参藜芦合煎剂（苦参藜芦比例为10:1）玄参组根据体表面积（人与大鼠）药物剂量换算公式得： 玄参组大鼠每日灌服量为0.6ml/只50%玄参水煎剂玄参藜芦合剂组根据体表面积（人与大鼠）药物剂量换算公式得：玄参藜芦合剂组大鼠每日灌服量为0.6ml/只50%玄参藜芦合煎剂（玄参藜芦比例为10:1）藜芦组根

5、据体表面积（人与大鼠）药物剂量换算公式得： 藜芦组大鼠每日灌服量为0.04ml/只50%藜芦水煎剂生理盐水组生理盐水组大鼠每日灌服量为0.6ml/只以上药品购自上海众益达药店分别称取药物，相当于药材量倍的水浸泡小时，煮沸分钟过滤。药渣加倍水继续煎煮，煮沸分钟，过滤，合并两次滤液，与水浴上浓缩成50药液，冰箱保存。水煎液的制备在上海中医药大学机能实验室准备室完成。1.3实验试剂与仪器实验试剂GPT试剂盒 南京建成生物工程研究所 GOT试剂盒 南京建成生物工程研究所BUN试剂盒 南京建成生物工程研究所 Cr试剂盒 南京建成生物工程研究所乌拉坦 上海中医药大学药品安全评价研究中心实验器材磁极80-2

6、离心沉淀器 上海求精生化试剂仪器有限公司LXJ-II离心沉淀机 上海医用分析仪器厂分光光度机 AEROSET Abbott10ml一次性无菌注射器 上海中医药大学药品安全评价研究中心心电图机 由上海中医药大学教学实验中心提供100-1000ul移液器 同上电热恒温水浴箱 同上10ml离心管 同上5ml抗凝管 同上1.4实验方法分组随机分成8组，每组十只，称重标记 给药每日15:00定时用灌胃针IG人参组大鼠每日灌服量为0.4ml/只50%人参水煎剂人参藜芦配伍组大鼠每日灌服量为0.4ml/只50%人参藜芦合煎剂苦参组大鼠每日灌服量为0.4ml/只50%苦参水煎剂苦参藜芦配伍组大鼠每日灌服阿司匹

7、林0.4ml/只50%苦参藜芦合煎剂玄参组大鼠每日灌服量为0.6ml/只50%玄参水煎剂玄参藜芦配伍组大鼠每日灌服量为0.6ml/只50%玄参藜芦合煎剂藜芦组大鼠每日灌服量为0.04ml/只50%藜芦水煎剂生理盐水组大鼠每日灌服量为0.6ml/只连续灌药7天后下腔静脉取血处死测定心率第一次灌药两小时后，测定每只大鼠心电图，计算心率接通心电图机的电源线、接地线和导联线，打开机器预热5分钟。每只大鼠按每100g体重 0.2ml的注射量，腹腔注射20%乌拉坦溶液。麻醉后，仰卧固定。红色导联线接右前肢，黄色接左前肢，黑色接左后肢，白色接右后肢。打开导联开关，取下心电图记录纸。取材和处理每只大鼠按每10

8、0g体重 0.5ml的注射量，腹腔注射20%乌拉坦溶液打开腹腔，暴露腹主动脉，用10ml一次性注射器取血7ml，注入离心管。均3000转/min离心10分钟取上清夜。上清夜注入离心管3000转/min离心10分钟，取血清待测。1.5检测指标用心电图机测大鼠心电图，计算心率。GPT、GOT利用赖氏(Reitman-Frankel)比色法测得BUN利用Fearon反应测得Cr利用Jaffe反应测得1.6统计方法 各指标数值以均数标准差(xsd),SPSS13.0软件统计，采用单因素方差分析。2结果2.1人参与藜芦配伍组体重、心率变化的观察表1 人参与藜芦配伍服药体重变化情况 （单位：g）组别nsd

9、人参1040.07.8藜芦1039.39.1人参+藜芦1037.713.0生理盐水1037.410.3经统计学处理，各组体重与生理盐水组无显著差异表2 人参与藜芦配伍服药后心率比较 （单位：次/min）组别nsd人参10344.019.1*藜芦10344.912.5*人参+藜芦10342.522.9*生理盐水10354.73.3与生理盐水组比较*为P0.01*为P0.05单用人参组与单用藜芦组的心率分别与生理盐水组比较，P均小于0.01，差别具有显著的统计学意义。人参与藜芦合剂组心率与生理盐水组比较，P0.05,差别具有统计学意义。提示单用人参、藜芦、或人参与藜芦合用可使大鼠心率减慢。肝脏代谢

10、变化的观察表3 人参与藜芦配伍服药GPT比较 （单位：卡门氏单位）组别nsd人参1060.914.2藜芦1058.212.5*人参+藜芦1056.414.9*生理盐水1070.710.8与生理盐水组比较*为P0.01*为P0.05人参藜芦配伍组GPT与生理盐水组比较，P0.01，差别具有显著的统计学意义。藜芦组GPT与生理盐水组比较，P0.05,差别有统计学意义。提示人参藜芦配伍，藜芦降低血清中GPT活性。表4 人参与藜芦配伍服药GOT比较 （单位：卡门氏单位）组别nsd人参1016.010.6*藜芦1053.017.4人参+藜芦1073.718.1*生理盐水1046.619.1与生理盐水组比

11、较*为P0.01 *为P0.05，与藜芦组比较为P0.01人参组GOT与生理盐水组比较，P0.01，差别具有显著的统计学意义。人参藜芦配伍组GOT与生理盐水组比较，P0.01，差别具有显著的统计学意义人参降低血清中的GOT活力。人参藜芦配伍提高血清中的GOT活性。结合GPT测定结果，损伤可能来自心肌细胞。肾脏代谢变化的观察表5 人参与藜芦配伍服药BUN比较 （单位：mmol/L）组别nsd人参103.34700.36773*藜芦102.83900.12449人参+藜芦103.35300.14314*生理盐水102.93600.22550与生理盐水组比较*为P0.01。人参组、人参藜芦配伍组BU

12、N与生理盐水组比较，P0.01，差别具有显著的统计学意义。提示人参、人参与藜芦配伍组增加血清中的BUN含量。表6 人参与藜芦配伍服药Cr比较 （单位：mol/L）组别nsd人参10113.04.9*人参+藜芦10115.64.9藜芦10119.44.0生理盐水10117.93.4与生理盐水组比较*为P0.05。人参组Cr与生理盐水组比较， P0.05，差别具有统计学意义 。人参降低血清中的Cr含量。结合表5，BUN的增高应当与肾小球滤过率无关，可能和促进肝脏尿素合成增多有关。2.2 苦参与藜芦配伍组体重、心率变化的观察表7 苦参与藜芦配伍服药体重变化情况 （单位：g）组别nsd苦参1038.2

13、20.7藜芦10344.912.5苦参+藜芦1039.07.7生理盐水1037.410.3经统计学分析，各组体重与生理盐水组无显著差异。表8 苦参与藜芦配伍服药后心率比较 （单位：次/min）组别nsd苦参10363.919.3藜芦10344.912.5苦参+藜芦10356.036.6生理盐水10354.63.3经统计学分析，各组心率与生理盐水组无显著差异。肝脏代谢变化观察表9 苦参与藜芦配伍服药GPT比较 （单位：卡门氏单位）组别nsd苦参1060.48.2藜芦1058.212.5*苦参+藜芦1054.614.3*生理盐水1070.710.8与生理盐水组比较*为P0.01，*为P0.05。苦

14、参藜芦配伍组GPT与生理盐水组比较，P0.01，差别具有显著的统计学意义。藜芦组GPT与生理盐水组比较，P0.05,差别有统计学意义。提示苦参藜芦配伍组，藜芦组降低血清中GPT活性。表10 苦参与藜芦配伍服药GOT比较 （单位：卡门氏单位）组别nsd苦参1023.716.9*藜芦1053.017.4苦参+藜芦1032.713.4生理盐水1046.619.1与生理盐水组比较*为P0.01。苦参组与生理盐水组比较，P均小于0.05，差别具有统计学意义。提示苦参降低血清中GOT活性。而苦参藜芦配伍组血清中的GOT没有特异变化，不同于人参与藜芦配伍组。肾脏代谢变化观察表11 苦参与藜芦配伍服药BUN比

15、较 （单位：mmol/L）组别nsd苦参103.17200.13448*藜芦102.83900.12449苦参+藜芦103.23200.09028*生理盐水102.93600.22550与生理盐水组比较*为P0.01。苦参组，苦参藜芦合剂组GOT与生理盐水组比较， P0.01，差别具有显著统计学意义，提示苦参藜芦配伍提高血清中的BUN含量。表12 苦参与藜芦配伍服药Cr比较 （单位：mol/L）组别nsd苦参10115.33.4藜芦10119.44.0苦参+藜芦10118.14.1生理盐水10117.93.4经统计学分析，各组Cr与生理盐水组无显著差异。2.3玄参与藜芦配伍组表13 玄参与藜芦

16、配伍服药体重变化情况 （单位：g）组别nsd玄参1024.38.2藜芦1039.39.1玄参+藜芦1051.06.1 *#生理盐水1037.410.3与生理盐水组比较*为 P0.01与玄参组比较#为P0.01与藜芦组比较为P0.05玄参配伍藜芦组体重与生理盐水组比较，P0.01，差别具有显著统计学意义。玄参藜芦配伍组体重与玄参组比较，P0.01，差别具有显著的统计学意义。玄参藜芦合剂组体重与藜芦组比较,P0.05,差别具有统计学意义。提示玄参藜芦配伍明显增加体重。表14 玄参与藜芦配伍服药后心率比较 （单位：次/min）组别nsd玄参10351.614.6藜芦10344.912.5*玄参+藜芦

17、10307.418.3*生理盐水10354.73.3与生理盐水组比较*为 P0.01与藜芦组比较为P0.05玄参与藜芦配伍组心率与生理盐水组比较，P0.01，差别有显著的统计学意义。玄参藜芦配伍组与藜芦组比较，P0.01，差别有显著的统计学意义。玄参藜芦配伍与藜芦均减慢心率。但是玄参藜芦配伍减慢幅度大于单用藜芦组。肝脏代谢变化观察表15 玄参与藜芦配伍服药GPT比较 （单位：卡门氏单位）组别nsd玄参1064.18.6藜芦1058.212.5*玄参+藜芦1066.47.9生理盐水1070.710.8与生理盐水组比较*为 P0.05经统计学分析，各组GPT与生理盐水组无显著差异。表16 玄参与藜

18、芦配伍服药GOT比较 （单位：卡门氏单位）组别nsd玄参1029.722.3*藜芦1053.017.4玄参+藜芦1045.816.1生理盐水1046.619.1与生理盐水组比较*为 P0.05玄参组GOT与生理盐水组比较，P0.05，差别具有统计学意义。提示玄参降低血清中的GOT活性。肾脏代谢变化观察表17 玄参与藜芦配伍服药BUN比较 （单位：mmol/L）组别nsd玄参103.03900.06806藜芦102.83900.12449玄参+藜芦102.96900.16516生理盐水102.93600.22550经统计学分析，各组BUN与生理盐水组无显著差异。表18 玄参与藜芦配伍服药Cr比较

19、 （单位：mol/L）组别nsd玄参10108.18.0*藜芦10119.44.0玄参+藜芦10116.97.4生理盐水10117.93.4与生理盐水组比较*为 P0.01玄参组与生理盐水组比较， P0.01，差别具有显著的统计学意义提示玄参减少血清中的Cr含量。可能与Cr摄入或生成减少有关。3 讨论(1)三参与藜芦配伍无急性毒性反应，无明显肝肾功能的损伤在本试验剂量下，所有用药组均未出现急毒反应与死亡。有单位针对药物配伍比例用量，给药方式等条件进行研究，关天增等采取正交设计方法，以动物体重增减或死亡数作为观测指标，结果证明反与不反在于个配伍的用量比例。所以需要进一步研究。肝脏对药物性损伤具有

20、易感性。酶学实验在肝实质损害的诊断中占有重要地位，常常与肝组织损伤程度和范围成正比。本次试验选用了最常用最敏感的指标GOT、GPT。二者均为非特异性细胞内功能酶。正常时血清的含量很低。但当肝细胞受损时，肝细胞膜通透性增加，胞浆内GPT、GOT释放入血浆，只是血清的GPT、GOT酶活力升高。可以提示急性病毒性肝炎、慢性病毒型肝炎、肝硬化或肝内外胆汁淤积。但是在本实验条件下，各用药组均未出现二者同时升高，没有提示肝功能损伤。然而在不同物种和损伤性质时，不同的酶一起相对应用性。而药物性肝损伤包括坏死，脂肪肝炎、肝硬化甚至肝癌，或者仅影响胆汁分泌引起黄疸而不伴有实质损害等。所以可能有些肝损伤情况没有发

21、现。肾脏因其自身的结构功能特点，必然成为诸多外物因素作用的靶器官。选取BUN、Cr两个常用指标。BUN尿素为人体蛋白质代谢的终末产物，主要由肾脏排泄，血尿素氮含量的高低取决于机体的蛋白质的分解代谢与肾脏的排泄功能。可反映GFR。Cr在控制外源性肌酐摄入的情况下，血中Cr浓度取决于GFR。本试验也没有出现二者增高，肾功能受损的现象。但是GFR下降到正常的1/2时，BUN值才升高。GFR需下降到正常的2/3时，Cr值才升高。如果进一步研究，可以考虑引进更多的指标。(2)“诸参反藜芦”不可一概而论 陶弘景曾说，五参“其形不尽相类，而主效颇同”。（五参：人身、玄参、苦参、沙参、丹参）现在认为的三参功效

22、如下：人参，大补元气，补脾益肺，生津止渴，安神益智；苦参，清热燥湿，杀虫，利尿；玄参，清热凉血，滋阴解毒。功能性味主治，化学成分大相径庭。就某单味参的研究结论不可以硬性推广到其他品种的参上，需要实验的验证。 本次实验三参分别与藜芦配伍情况，反映在各项指标上，均显示一定的差异。 单用人参可以减慢大鼠心率（据报道，人参的GS可以减慢大鼠心率，提高电改室速阈值。）。可以 降低血清中GPT、GOT，这与人参的GDS保肝作用有关。人参增加了BUN的含量，却降低了Cr的含量。测定血Cr作为GFR指标之一，其优点是不受高蛋白饮食的影响，其反映肾小球滤过功能更优于BUN。人体在肝脏中合成尿素，每克蛋白质代谢产

23、生尿素03g。尿素中氮含量为2860，几乎达一半。取决于饮食中蛋白质摄入量、组织蛋白质分解代谢以及肝功能情况。排除饮食原因与肝功能情况，初步认为，人参加速了组织蛋白质分解代谢。降低Cr可能与内源性Cr生成减少有关。 单用藜芦减慢大鼠心率，减少GPT.GPT的减少了可能与抑制了细胞释放该酶进入血浆有关。 人参藜芦配伍进一步减慢大鼠心率，出现药效的增加。降低GPT活性，增高GOT活性，与单味人参、藜芦的药效不同。人参藜芦配伍组增高BUN，对Cr无特异影响，与人参组情形类似。 苦参中的苦参碱可以使动物血清转氨酶显著下降。苦参碱也可降低BUN含量。暂无文献支持本现象。 苦参藜芦配伍增加了BUN含量。其

24、他方面，并没有出现增加毒性或者拮抗作用。 玄参可以减少GOT，GOT的减少可能与抑制细胞释放该酶进入血浆有关。玄参降低Cr含量，可能与内源性Cr减少有关。玄参藜芦配伍增加体重，减慢心率，减少GOT。其机理尚不清楚。综合各组情况，三参分别与藜芦配伍，情况各不相同。推广到诸参中，诸参间的差异更大，。(3)人参与藜芦配伍，可能损伤心肌细胞人参与藜芦配伍GOT有明显升高，而GPT变化不明显。但是在大鼠身上，两种酶对于肝损伤几乎一样敏感。可以排除肝损伤的可能性。GOT在心肌中含量较高，当心肌损伤时，GOT活力往往增高，如心肌梗塞发病后6-12小时之内，GOT显著增高，增高的幅度与损害程度平行。心肌炎也可以引起GOT轻微增高。而GPT在心肌中的分布较少。由此认为，在10:1的比例下，人参藜芦配伍可能造成心肌细胞的损伤。但具体机理有待进一步研究。(4)玄参与藜芦配伍的特殊现象玄参性微寒，味甘、苦、咸。可以凉血滋阴，泻火解毒。用于热病伤阴、舌绎烦渴、温毒发斑、津伤便秘、骨蒸劳嗽、目赤、咽痛、瘰疬、白喉、痈肿疮毒。含微量挥发油、植物甾醇、油