兔下颌角截骨后咬肌肌球蛋白重链mRNA表达的变化

1、    兔下颌角截骨后咬肌肌球蛋白重链mRNA表达的变化摘要目的: 通过对兔下颌角弧形截骨后咬肌肌球蛋白重链（MHC）mRNA测定， 研究 咬肌在骨架缩短后的适应性变化 规律 。  方法 : 3月龄雌性新西兰大白兔25只，行左侧下颌角弧形截骨，右侧不手术作自身对照。2、4、8、12和24周分别处死5只动物，提取咬肌MHC、MHC型和内参GAPDH的mRNA进行RT.PCR。 结果: 手术侧较对侧MHC型的mRNA转录降低，12周后正常。MHCmRNA2周时先降低，4周后恢复正常。2、4、8周MHC.MHC手术侧较对侧增加。 结论: 下

2、颌骨架缩短后咬肌发生适应性的改建，咬肌组分的这种变化有利于建立口颌系统新的平衡和咀嚼功能的恢复。 关键词 下颌角截骨;咬肌;肌球蛋白重链;兔面部形态是软组织及骨组织相互作用和 影响 的最终产物，这种互动作用在面部轮廓形态中具有重要意义。最富有变化且体现个性特征的是面中、下1.3，下颌骨和咬肌对于面下部形态起着重要作用。按照东方人的审美观，以椭圆形或“瓜子脸”为美，因此，下颌角截骨 治疗 方腮畸形的措施是 目前 颅颌面外科常行的美容手术之一。我们用兔模拟临床下颌角截骨，通过对咬肌肌球蛋白重链的两个亚型，即肌球蛋白重链（myo-sin heavy chain，MHC）、型mRNA表达量的测定，研究

3、咬肌的改建能力及功能的恢复特点，为临床下颌骨架改变手术提供一定的 理论 依据。 1 材料和方法 1.1 材料雌性3月龄新西兰大白兔25只（东南大学医学院实验动物中心提供），体重220270g。左侧下颌角截骨，为手术侧，右侧为非手术侧，设为对照。以0.6%戊巴比妥钠静脉注射麻醉。于左侧下颌角处作一长23cm切口，沿骨面分离咬肌和翼内肌附着部至下颌角前后切迹连线，以前后切迹沟连线作垂线与下颌角形成交点，该交点沿垂线上0.5cm取一定点，以前后切迹点和定点作一条弧线，用磨钻沿弧线打孔定位后截骨。肌肉放置原位，缝合切口。术后3d用抗生素预防感染。分别于术后2、4、8、12和24周处死5只动物，于定点处

4、取部分咬肌，大小0.8cm×0.5cm×0.5cm，迅速放入-70冷冻保存。 1.2 RNA的提取与RT.PCR（1）总RNA的提取:采用Trizol一步法提取组织的总mRNA。（2）总RNA反转录为cDNA:根据Revertaid TM First Strand cDNA Synthesis Kit说明书，以总mRNA为模板合成相应的互补cDNA。反应体系为20l，反应条件为70变性5min，42反转录1h，最后705min灭活反转录酶。（3）PCR:在同一管中扩增MHC、MHC及GAPDH mRNA的cDNA产物，反应体系为50l，反应条件为94预变性5min，95变性

5、40s，59退火1min，72延伸2min，共循环29次，最后72再延伸10min。（4）本实验所用的PCR引物为MHC上游5.GGATCCCTGGAGCAGGAGAA.3、下游5.CTTG-CATTGAGGGCATTCAG.3，大小173bp;MHC上游5.CCCTAAAGCGGGAGAATAAG.3、下游5.GCTCTG-CATCGACTCTACCAC.3，大小307bp;GAPDH上游5.GATCCATTCATTGACCTCCACTA.3、下游5.CACCACCT-TCTTGATGTCGTC.3，大小703bp。 1.3 MHC mRNA转录量 分析 各组分别取8l PCR产物进行琼脂糖

6、凝胶电泳。对经EB染色后的目的条带和内参条带进行摄像， 应用 Imagemaster图像分析仪进行扫描，Total Lab图像分析软件分析图谱， 计算 目的MHC的相对含量。目的mRNA的相对含量:某mRNA水平相对值=目的条带光密度值.内参GAPDH条带光密度值。 2 结 果 2.1 PCR产物的凝胶电泳 见图1。PCR产物经凝胶电泳鉴定，扩增片断特图1 不同时间MHC、MHC和GAPDH的电泳条带 2.2 统计结果见表1。术后2周左侧咬肌MHC和MHC的mRNA表达量较右侧显著下降，4周后MHC的mRNA左、右侧咬肌无显著性差异。12周后MHC的mRNA表达量双侧无显著性差异，MHC.MH

7、C之值2、4、8周左侧高于右侧，双侧有显著性差异。 2.3 检测指标与统计学处理根据原始数据分别 计算 各组MHC、MHC、MHC.MHCmRNA含量的相对值，其中MHC与MHC分别代表各自的mRNA水平，MHC.MHC之值代表了两种亚型之间的比例关系。全部数据均采用统计学软件SPSS11.0进行统计学 分析 ，手术侧和非手术侧的比较采用t检验。 表1 非截骨侧和截骨侧咬肌MHC、MHC、MHC.MHCmRNA含量的相对值（略） 3 讨 论 面部改形手术主要通过骨架的延长或缩短，从而达到矫正畸形、美化面容的效果，功能和外形是手术必须兼顾的两方面。人体的正常形态结构和生理机能是密切相关的，口腔颌

8、面系统作为一个功能整体，其中任何一部分出现形态的变化都可能会导致机能的改变。在下颌角弧形截骨术中需要去除部分骨质，在下颌角附着的咬肌、翼内肌下部进行剥离，其末端附着也随着骨质的去除而上移。由于术后肌肉的张力发生变化，故在其附着重建的同时，咬肌会自发地发生相应的萎缩，从而变薄变短1 。肌力对咬合功能的 影响 、肌肉萎缩与骨架缩短匹配的程度，这些都是方腮畸形行下颌角截骨手术应考虑的。根据肌纤维所含MHC亚型的不同主要分为慢肌纤维（MHC）与快肌纤维（MHC）两种2 ，型纤维氧化酶活力高，磷酸化酶和ATP酶活力低，收缩慢，耐疲劳，型与之相反。不同动物与不同部位肌肉中各亚型比例是不同的。肌肉中所含的肌

9、纤维亚型不同，它们的收缩和代谢特性也不同。肌纤维的类型主要由遗传决定，但是肌肉组织的生物可塑性很强，一些外部环境因素如功能负荷、神经支配、激素和慢性电刺激等均可通过调节其基因表达而改变其亚型比例，以适应功能变化的需要3，4 。在这个变化过程中，较之于蛋白质的合成增加或减少，其本实验 研究 显示，在兔下颌截骨后2周咬肌MHC和MHCmRNA表达降低，说明骨架缩短早期咬肌的功能下降。4周后MHCmRNA的表达量恢复正常，快肌主要参与位移变化，而慢肌纤维主要参与维持体位，在咀嚼功能中快肌起主导作用，优先得以恢复。MHC.MHC之值前8周术侧较对侧升高，而肌肉大体形态术侧表现为萎缩。这个过程中MHCm

10、RNA的表达下调，可能发生了型纤维向型纤维转化。这与Song等1 的ATP酶染色结果一致，同时Lambert5 发现，肥大的嚼肌标本型肌纤维明显增加，型肌纤维则明显减少。临床下颌角肥大的病人往往伴有咬肌肥大，本实验缩短下颌骨架咬肌发生萎缩，出现了与Lambert研究咬肌肥大病人肌纤维组成相反的变化结果。由此可见，MHC表达的下降与MHC表达的变化不是一个简单的对等关系，而是肌肉组织根据功能的需要调节各个亚型基因表达的结果。总之，骨骼肌是一种动态的多样化的组织，肌纤维类型和肌纤维蛋白同功型的多种多样可适应不同的功能要求。在兔下颌截骨后咬肌发生了肌纤维亚型表达的改变，表明下颌骨架缩短后发生了慢肌向

11、快肌转化，快肌的功能优先恢复，这种变化有利于建立一个新的口颌系统平衡，满足咀嚼功能的需要。 参考  文献 1SONG H S，PARK C G.Masseter muscle atrophy after ostectomy of the mandibular angle in rabbitsJ.Plast Reconstr Surg，1997，99（1）:51.59.2ALBIS A，JANMOT C，BECHET J J.Comparison of myosins from the masseter muscle of adult rat，mouse and guinea

12、-pig persistence of neonatal-type isoforms in murine muscleJ.Eur J Biochem，1986，156（2）:291.296.3GOLDSPINK G，SCUTT A，LOUGHNA P T，et al.Gene expression in skeletal muscle in response to stretch and force gene rationJ.A J Physiol，1992，262:356.363.4READER M，SCHWARTZ G，ENGLISH A W.Brief exposure to testosterone is sufficient to i