鸡传染性支气管炎研究进展

1、收稿日期:2011-12-04中图分类号:S858.31文献标识码:A 文章编号:1673-1085(201201-0045-06鸡传染性支气管炎研究进展刘瑞生,吕永锋,王必慧(甘肃省畜牧兽医研究所,平凉744000传染性支气管炎(Infectious Brochitis ,简称IB 是由传染性支气管炎病毒(IBV 引起鸡的一种急性、高度接触性传染病,主要危害鸡呼吸和泌尿生殖道,感染鸡可由于呼吸道或肾脏病变而引起死亡。耐过鸡生产性能和饲料报酬降低,极易继发细菌感染,因此对本病的研究具有重要意义。本病最早由Schalk 于1930年在美国北科他州发现,随后在世界各地相继发现,自1982年以来,肾

2、型传染性支气管炎在我国广泛流行,目前仍然是威胁集约化养鸡场的主要疫病之一,即使在免疫鸡群中也时有发生。1病原学IBV 属于冠状病毒科冠状病毒属,具有囊膜,直径90200nm ,呈不规则形或圆形,表面有长20nm 排列整齐的杆状纤突,似花冠状。基因组为单股正链RNA ,全长约27kb 。其病原血清型众多,同毒株之间又有组织亲嗜性的差异,表现为呼吸型、肾型、肠型、腺胃型等。化学成分分析发现,IBV 的主要结构蛋白有3种,纤突蛋白(S 蛋白、膜基质蛋白(M 蛋白和核衣壳蛋白(N 蛋白,3种结构蛋白分子摩尔比为1615。M 蛋白形成抗原决定蛋性能的影响J.江西畜牧兽医杂志,2002,4:25.18Mc

3、Intosh J I,Slinger S J,Sibbald I R,et al.Theeffects of three physical forms of wheat on the weight gains and feed efficiencies of pullets from batching to fifteen weeks of age J.Poultry Science,1962,41:438-444.19Umar Faruk M,Bouvarel I,Meme N.Sequential feeding using whole wheat and a separate prote

4、in -mineral concentrate improved feed efficiency in laying hensJ.Poultry Science,2010,89:785-796.20Amerah A M,Ravindran V,Lentle R G,et al.Influenceof particle size on the performance,digest characteristics and energy utilisation of broilers fed maize and wheat based diets J.Proceedings of the Austr

5、alian Poultry Science Symposium,2007(19:89-92.21宋凯,单安山.不同小麦日粮对肉仔鸡肉质、脂肪酸合成酶mRNA 与脂蛋白脂肪酶mRNA 表达的影响J.动物营养学报,2008,20(1:69-74.22吕明斌,燕磊,李国平等.日粮中添加整粒小麦对肉鸡生产性能、胴体指标和消化器官的影响J.中国家禽,2009,31(6:16-19.23陈朝江,侯水生,高玉鹏.日粮纤维对鹅消化生理功能的影响J.饲料博览,2005,3:33-34.24李杰,李凌.家禽饲料代谢能的研究V 日粮和小麦麸对鸡和水禽代谢能的比较J.东北农学院学报,1984,3:91-95.25王瑞

6、晓,郑诚.对几种饲料原料在鹅消化道排空时间的测定J.中国家禽,2001,2:12.26周秀丽.日粮中苜蓿、黑麦草和小麦麸含量对仔鹅生产性能和消化生理影响的研究D.硕士毕业论文,扬州:扬州大学,2004.27盛东峰.鹅代谢能生物学评定方法的研究D.硕士毕业论文,扬州:扬州大学,2005.簇,N蛋白是病毒内部核衣壳的组成蛋白,S蛋白构成了冠状病毒的最表层纤状突起。IBV经5615min及4590min灭活,对乙醚和氯仿极敏感,能被20%的乙醚及5%的氯仿灭活,0.1%去氧胆酸钠4作用18h能使IBV完全失去感染性。1%煤酚、1/10000高锰酸钾、70%酒精和1%福尔马林均可在室温下几分钟内杀死病

7、毒。不同毒株在pH3时稳定性不同。2流行病学本病在世界许多国家均有发生,易感动物主要是鸡,不同品种和品系的鸡对本病的敏感性不同,但是所有年龄的鸡都容易感染,尤其326周龄的鸡最易感染。一年四季均可发生,分布广,传播速度快,发病率和死亡率高,雏鸡死亡率约为15%30%。传播途径主要为呼吸道和消化道传染,传染源为病鸡和带毒鸡,从病鸡和带毒鸡呼吸道、粪便排出的病毒经空气、飞沫传染给易感鸡,也可以通过饲养人员、遭受污染的饲料、饮水及用具等经消化道感染本病,通常在48h内出现症状。3临床症状及病理变化发病后很快出现幼鸡流鼻涕,发出气管啰音,频繁咳嗽,打喷嚏,精神沉郁,怕冷挤堆,饮水增加,呼吸道症状持续1

8、4d后消失,鸡群不见异常表现。随后鸡群突然发病,23d内逐渐加剧,病鸡挤堆厌食,排白色稀粪,体重明显减轻,鸡冠和皮肤变暗,肛门周围粘满白色水样粪便,感染幼鸡出现死亡,产蛋鸡群产蛋量下降,部分耐过鸡可逐渐康复。前期剖检病死鸡可以看到气管和喉头内有多量粘液,气管粘膜充血,肺脏充血,气囊浑浊。后期病变主要在肾脏,病鸡肾脏肿大、苍白,肾小管和输尿管扩张,里面充满大量白色尿酸盐,整个肾脏外表有许多花纹,呈槟榔样。切开肾脏有多量白色尿酸盐流出。严重病例在腹膜、心包膜和胸膜上也有白色尿酸盐沉积,母鸡卵巢发生退行性变化,腹腔内有游离的卵黄样物质,卵巢充血或出血,有的呈紫色。4诊断4.1血清学诊断技术自发现IB

9、至90年代初,主要采用血清中和试验(鸡胚气管环培养观测纤毛运动情况、琼脂扩散试验、血凝和血凝抑制试验等常规血清学技术对IB进行诊断。血清中和试验可用于检测IBV抗体、抗原及分型,虽然方法简便易行,但花费时间长。琼脂扩散试验用于检测IBV抗体操作简便,但敏感度不高,不适用于免疫后抗体的检测。血凝和血凝抑制试验可用于检测IBV抗原及抗体,但用不同毒株制成的HI抗原检测抗体时,抗体水平参差不齐。反向间接血凝试验可用于检测IBV抗原,但可靠性不及中和试验。王乐元(1993首次成功的建立了检测IBV抗原的间接Dot-ELISA,对IBV抗原的最低检出量为1.36g/ml,可以作为疫病早期诊断的依据和进行

10、流行病学调查1。王红宁(1996在国内首先采用对流免疫电泳技术对128份人工感染鸡样品进行检测,该方法简便,具有较高的敏感性和准确性,生产场可用此方法进行IB的免疫检测。刘兴友等(1997建立了胰酶分散抗原间接荧光抗体法,该方法具有良好的特异性,检测程序简单,检测抗原时间短,适合于制备大批量抗原用于临床检测或抗体监测。王宏俊等(2003将IBV N基因在大肠杆菌中表达,表达产物N蛋白作为ELISA诊断抗原,可用于IBV抗体检测2。4.2分子生物学诊断技术病毒(IBVN基因序列(FJ767920,利用引物软件Premier5.0,设计并合成了1对特异引物,通过RT-PCR扩增条件的优化,建立了一

11、种快速检测IBV 的RT-PCR方法,应用该方法成功地从IBV M41和河南株HN99中扩增出318bp的目的片段,而传染性喉气管炎病毒、新城疫病毒及马立克病毒基因组均未扩增出相应的片段;将回收的RT-PCR 产物克隆到pGEM-T Easy载体后测序,进一步证实RT-PCR检测方法的特异性,对IBV的最低检出量为0.6pg的cDNA;经初步应用表明,该方法的建立为IBV的早期诊断和临床检测奠定基础5。张琳等(2011根据禽呼肠孤病毒(ARV、禽流感病毒(AIV、新城疫病毒(NDV和鸡传染性支气管炎病毒(IBV的基因保守区设计了4对特异性引物,建立了针对四种病毒的多重PCR检测体系,并对该体系

12、进行了条件优化及特异性、敏感性试验,该体系扩增的四种病毒基因片断大小分别为199bp (ARV、264bp(AIV、362bp(NDV和459bp(IBV,且特异性、敏感性良好,能够检出1pg AIV和10pg ARV、NDV、IBV的RNA,临床应用结果证明,该体系具有很高的实用价值和应用前景6。52弱毒苗鸡咽喉和肛门拭子32份进行检测,检出15份阳性,表明利用DIG探针检测IBV的RT-PCR产物,特异性和敏感性强,可重复,能克服RT-PCR非特异性反应和探针Northern杂交的不稳定性。5防治技术传染性支气管炎病毒血清型众多,新的变异株不断出现,不同血清型之间没有或很少有交叉保护,而且

13、病毒对器官的亲嗜性不断变化,致使临床症状和病理变化完全不同,给传染性支气管炎的防治带来了很大困难。尽管现在预防鸡传染性支气管炎的疫苗很多,但免疫失败现象经常发生,给养殖户造成了很大的经济损失。5.1疫苗及其研究进展52、H120和Ma5等弱毒疫苗被绝大多数国家所采用;其次是Conn株强毒致弱的疫苗株。活疫苗能有效刺激机体的免疫系统,激发体液免疫和细胞免疫,使用方便,生产成本低。但是多株、多种弱毒疫苗的混合使用可能因基因重组而出现新的变异毒株甚至强毒株,在疫苗使用过程中可能存在毒力返强问题。这使得致弱毒疫苗在理论和实践上都不可能从根本上控制IB的流行。秦玉明等(2009应用IBH52株与不同耐热

14、保护剂配方和冻干曲线进行筛选试制耐热活疫苗,经过37放置10d的每羽份病毒含量下降0.60.8个滴度,每羽份病毒含量达104.75.2免疫接种好的免疫效果,也有学者认为弱毒疫苗在鸡群中的周期性感染有毒力返强的潜在危险。实际生产中,由于IB血清型众多,单一的疫苗只能对同型毒株产生保护作用,对不同型毒株往往只能产生部分保护或不保护,所以在H52采用弱毒疫苗H120滴鼻同时与IB多价灭活苗注射相结合能有效提高呼吸道细胞免疫和抗体水平,达到良好的预防效果。张安国等(2003用腺胃型传支(GIBJB9702株和肾型传支(KIBSN9301株为制苗病毒株,分别经鸡胚繁殖后甲醛灭活,加入油佐剂中乳化制成GI

15、B-KIB二价油乳剂灭活苗,测定结果表明:疫苗安全稳定,易于保存,用于鸡群免疫注射后15d产生免疫,21d抗体达峰值,40d 对相应强毒攻击的保护率为93.3%100%10。炎H120滴鼻,同时用IB多价油苗注射;3235日龄,传支H120滴鼻,同时用IB多价油苗1头份注射; 100140日龄,商品蛋鸡用ND-IB(多价二联苗加强免疫,种鸡用ND-IBD-IB(多价三联苗加强免疫;220280日龄种鸡加强免疫,用ND-IBD-IB(多价三联苗。当IB呈暴发流行,采取紧急接种时选用相应血清型的多价油乳剂灭活疫苗紧急接种效果较好,而不宜采用毒力较强的弱毒疫苗如H52等。生产中采用相应的单苗进行多次

16、免疫接种预防鸡传染病,不仅费工费时,频繁免疫接种还会引起鸡的应激反应。联苗免疫可以减少免疫接种次数,从而减轻鸡群应激反应,节省人力,对于IB的预防具有重要的实际意义。为此,国外已研制出鸡ND-IB-IBD三联弱毒疫苗应用于生产。近年来国内也开展了这方面的研究工作。刘文惠等(1996在同一宿主细胞鸡全胚细胞上同步增殖培养了鸡ND、IB和IBD三株细胞弱毒,并研制成三联细胞弱毒疫苗11。杨峻等(1999用NDLa Sota株、鸡IBM41株接种鸡胚,收获含毒鸡胚尿囊液;用IBDV接种3040日龄肉鸡,发病后取囊组织制成含毒组织悬液,将三种病毒液按一定比例混合,制备成三联油乳剂灭活苗12。李大山等(

17、2002将NDLa Sota、IBH120和IBDB87弱毒株经适当稀释后等量混合,经10日龄SPF鸡胚同胚接种联合培养,收获含毒鸡胚液和胎儿混合制成ND、IB、IBD 三联活疫苗13。姜北宇等(2003研制成ND-IB-EDS76-AE四联灭活疫苗,测定证明安全、无任何副作用,免疫1014d后产生免疫力,ND攻毒100%保护,免疫2128d后IB攻毒保护率达80% 100%,免疫后21d EDS76HI效价1:128,AE 保护率达80%100%。连京华等(2005制备了鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征和禽流感四联油乳剂灭活疫苗,试验结果表明:采用抗原浓缩技术制备的四联苗抗体水平高,维持

18、时间长,能够有效地保护鸡群14。王新卫等(2008用自制的ND-IB二联苗与相应的ND、IB单苗及不同来源的ND-IB二联苗免疫鸡群,结果自制ND-IB二联苗与相应的ND、IB单苗的免疫抗体水平相当,且二联苗中的2种成分彼此没有干扰15。5.3治疗中草药能显著增加病鸡的体重,促进免疫器官生长发育,提高淋巴细胞转化率和血清中和抗体效价,明显改善传染性支气管炎感染鸡细胞免疫和体液免疫功能低下的状态,具有提高机体抗病毒感染的作用,因此可以应用于IB的防治。汪德刚等(1997从8日龄开始,在饲料中添加1.5%中药“肾支方”(黄芩、金钱草、鱼腥草、大青叶、桔梗、甘草、车前草、瞿麦等份混合组成饲喂雏鸡,连

19、用2周,可明显降低鸡肾型传染性支气管炎发病率和死亡率,并减轻该病对鸡生殖机能的损害。毕玉霞等(2006以0.5%、1%、1.5%、2%的不同比例在饲料中添加“麻杏石甘散”,结果试验组治愈率分别高出对照组16.00、18.75、24.3、24.5个百分点,差异极显著(P0.01,麻杏石甘散防治IB效果显著16。刘玉芹等(2009对贯众、黄芩等10种中药及复方组合进行了抗鸡传染性支气管炎病毒的筛选试验,应用筛选出的中药复方制剂(由综 述 家禽科学 2012.1 毒 RT-PCR 快 速 检 测 方 法 的 建 立 J. 中 国 农 学 通 报 ， 2011 ， （ 3 ） ： 3-5. 张琳，胡北

20、侠，杨 少 华 ，等.禽 四 种 病 毒 多 重 诊 断 技 术 的 建 立 和 应 用 J. 家 畜 生 态 学 报 ， 2011 ， 32 （ 4 ） ： 黄芩、板蓝根、柴胡、鱼腥草、贯众、麻黄、杏仁、百 部 、桔 梗 、黄 芪 、甘 草 组 成 ）对 其 进 行 预 防 和 治 疗 试 验 ，除 黄 芪 外 ，各 单 味 中 药 和 复 方 组 合 对 IBV 均 具 有不同程度的直接灭活作用， 最小有效浓度均达 到 1/128 以 上 ； 在 接 种 IBV 前 2h 以 及 接 种 IBV 后 6 71-74. 7 8 秦 玉 明 ，王 利 永 ，朱 良 全 ，等. 鸡 传 染 性

21、支 气 管 炎 耐 热 活 疫 苗 的 研 究 J. 中 国 家 禽 ， 2009 ， (22 ： 8-10. 石 星 明 ，王 玫 ，王 云 峰 ，等 . 鸡 传 染 性 支 气 管 炎 重 组 鸡 痘 病 毒 基 因 工 程 疫 苗 对 异 源 LTJ95 株 病 毒 攻 击 的 免 疫 保 护 J. 中 国 预 防 兽 医 学 报 ， 2009 ，（ 3 ）： 24-26. 王 红 宁.禽 传 染 性 支 气 管 炎 诊 断 与 防 治 技 术 研 究 进 展 J. 中 国 兽 医 杂 志 ， 2003 （ 8 ） ： 36-38. 张 安 国 ，左 颖 ，刘 彦 ，等.鸡 传 染 性

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24、 药 均 能 明 显 抑 制 IBV 的 繁 殖 ， 最 小 有 效 浓 度 均 达 到 1/256 以 上 ； 人 工 感 染 防 治 试 验 显 示 ： 治 疗 组 和 预 防组所分离到的病毒毒力均低于感染组， 复方中 药对感染传染性支气管炎病毒鸡的保护率为 9 10 93.33% ，治 愈 率 为 75% ，表 明 该 复 方 中 药 对 鸡 传 染 性支气管炎具有良好的预防作用和治疗作用 ，且 预 防 效 果 强 于 治 疗 效 果 17 。 李 清 艳 等 （ 2010 ）研 究 结 果 显 示 中 药 能 提 高 IBV 感 染 雏 鸡 巨 噬 细 胞 吞 噬 指数和免疫器官指数

25、18 。 顾 文 松 等 （ 2011 ） 试 验 结 11 果表明， 中药复方提取物对感染低毒传染性支气 管 炎 的 蛋 鸡 有 一 定 的 防 治 效 果 ，高 、中 剂 量 组 明 显 好 于 低 剂 量 组 合 空 白 组 19 。 12 5.4 综合措施 加强饲养管理，给予优质全价饲 13 料 ，并 在 饲 料 中 添 加 适 量 维 生 素 和 矿 物 质 ，适 当 降 低 饲 料 中 的 蛋 白 含 量 ；改 善 饲 养 环 境 ，控 制 饲 养 密 度 ，保 持 通 风 换 气 和 适 宜 的 温 度 和 湿 度 ；健 全 消 毒 制度， 坚持做好预防性消毒， 对鸡只实行全进全

26、 出 ， 空 场 不 少 于 14d ， 并 对 全 场 进 行 彻 底 清 洗 、消 毒 。 IBV 对 常 规 的 消 毒 药 如 来 苏 尔 、 氢 氧 化 钠 、 过 氧 乙 酸 、新 洁 尔 灭 、季 胺 盐 类 等 均 敏 感 。 目 前 还 没 有 特 效 的 药 物 可 以 用 于 IB 的 临 床 治 疗 ， 使 用 抗 生 素可以控制继发感染。 参考文献: 14 15 王 新 卫 ， 张 书 松 ， 孟 少 杰 ， 等 . 不 同 ND-IB 二 联 苗 与 相 应 单 苗 免 疫 抗 体 水 平 比 较 J 安 徽 农 业 科 学 ， 2008 ， (4 ： 546-548. 16 毕 玉 霞