黄芩苷地提取和分离纯化

1、姓名：黄 冰专业：药 化 学号：2111140006黄苓中黄苓苷的提取和精制、实验目的1掌握从黄苓中提取、精制黄苓苷的原理、方法及操作要点2掌握黄苓苷的结构鉴定原理及方法。二、实验原理OHOH 0黄苓苷为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮化合物，具有一定的脂溶性，所以在提取时可以选择一定浓度的乙醇溶液 作为提取液。黄苓苷为葡萄糖醛酸苷,具有弱酸性，其可在碱性溶液 中溶解，形成钠盐，在提取液中加酸酸化，使黄苓苷游离析 出。利用黄苓苷能溶于碱，不溶于酸的性质使之与酸性杂质分离，进行精制。本实验选用了 60%乙醇回流提取，酸沉、碱溶、酸沉的方 法进行精制，并对精制品进行了简单的定性鉴别，没有对照 品，所以没

2、做定量实验。三、实验材料与仪器材料：黄苓干燥根， 硅胶G薄层层析板仪器：UV2550紫外可见分光光度计（日本岛津），Spectrum 100 傅立叶红外光谱仪，旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），LXJ-H离心沉淀机（上海医用分析仪器厂），200g摇摆式高速中药粉 碎机，电子天平，循环水式真空泵，抽滤装置，圆底烧瓶（500ml）, 水浴锅，冷凝管，索氏提取器，层析缸试剂：2mol/L盐酸，60%乙醇，10%氢氧化钠，乙酸乙酯，甲醇，甲酸四、实验步骤1黄苓苷的提取将黄苓干燥根粉碎，称取粗粉100g,装入1L的圆底烧瓶，加入4倍量即400ml的60%乙醇，搅拌均匀，90C回流提取 1h。提取完进行抽

3、滤，将滤渣倒入圆底烧瓶中，加300ml 60%乙醇继续回流30min，重复上一步再回流 30min。合并3次 滤液，65 C减压浓缩至无醇味，将水液水浴加热到80 C，用2mol/L的盐酸调 PH至12,保温30min，室温静置 12h,沉 淀，2000r/min 离心2min，弃上清，向沉淀中加 10倍水量即700ml，搅拌均匀，加 10%氢氧化钠调 PH至7,静置1h, 2000r/min离心2min，弃沉淀，将上清液加热至 40 C，搅拌 均匀，加入等体积即700ml的60%乙醇，静置1h，2000r/min 离心2min，弃沉淀，将上清液水浴加热至 80C，用2mol/L 的盐酸调PH

4、至12,保温30min,室温静置1h,沉淀，离心， 弃上清液，得粗黄苓苷湿重 43g。2黄苓苷的精制向粗黄苓苷中加入 7倍水量即300ml，水浴加热至70C, 10%氢氧化钠调PH至7,完全溶解后，用2mol/L的盐酸调PH至6,加乙醇至含醇量 70%,未出现明显沉淀，所以没过 滤，用2mol/L的盐酸调 PH至12, 70C保温20min，静置 过夜。次日，沉淀很少，又 80C保温30min，离心，弃上清， 得精制品，向圆底烧瓶中加入约60倍量甲醇，将精制品装入索氏提取器的滤纸中，加热回流至提取液颜色很浅，趁热 抽滤，滤液减压浓缩一半，冷却，静置，结晶析出，静置30min , 过滤，甲醇洗涤

5、，得黄苓苷再精制品。用40倍量甲醇加热回流溶解，重复上述步骤可得黄苓苷重结晶。3黄苓苷的薄层层析吸附剂：硅胶 G薄层层析板，厚 0.250.3mm展开剂：乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(7: 2: 0.5 : 0.5 v/v/v )样品配成合适浓度的甲醇液，用点样毛细管点样，每点一2mm层析次要等到干了才能点下次，点样斑点直径不大于缸用展开剂饱和20min后，将点样板垂直放入层析缸，上行 展开，展层完毕后，取出，晾干，放在254nm紫外灯下观察 4黄苓苷的紫外吸收图谱取少量黄苓苷重结晶样品于 50ml容量瓶中，加甲醇溶解 至颜色微黄，用紫外分光光度计在 200-400nm进行紫外扫描 5黄苓苷的红外

6、吸收图谱精确称取0.100g的溴化钾，压片测红外作为背景，再精 确称取0.100g的溴化钾，加入极少量样品一起研成细粉， 压片，测红外吸收图谱。五、实验结果1黄苓苷得率（ ）=M/ M x 100 %式中：M所得黄苓苷精品重量 M 0一提取时用黄苓的重量本实验中 M为0.132g , M为100g，所以收率为 0.132%。2薄层层析3紫外光谱I暂i 最人吸收波心的确定278nm与文献由下图可知在200-400nm内最大吸收波长为 中（上图）的标准品的最大吸收波长一致。4红外光谱图4*1黄茶蒂标准品的红外褂图黄苓苷红外图谱3339 cm-1，宽峰：-0H伸缩振动3030 cm-1左右：苯环=C

7、H伸缩振动2900 cm-1: C-H伸缩振动1611、1575、1478、1450cm1 :苯环骨架振动1736 cm-1 : C=Of申缩振动（葡萄糖醛酸）1667cm1： C=O伸缩振动（吡喃酮环）1363 cm-1 : C-O伸缩振动1078 cm-1： C-O-C的对称和不对称伸缩振动900690 cm-1多个吸收峰：苯环取代六、讨论1由薄层板上的斑点可以看出虽然得到了一个比较明显的 斑点，结合紫外图谱应该是黄苓苷，但是斑点上方有小淡 斑存在，证明得到的结晶不是很纯。2红外图谱与文献中标准品的图谱大部分吻合，不一致的 原因可能是：黄苓产地不一样；本实验中得到的黄苓苷纯 度不咼。3本实

8、验中产率不高，原因可能有：粗粉未浸泡；静置时 间短；调PH时温度控制不好。4黄苓苷在一定温度和湿度下能酶水解成黄苓素及葡萄糖 醛酸。黄苓素分子中具有临三酚羟基，性质不稳定，在空气 中易氧化成醌式结构显绿色。所以在储藏及提取过程中应注 意防止黄苓苷的酶解、氧化，以减少有效成分的破坏。5在用酸、碱进行提取纯化黄酮类化合物时，应当注意温 度和碱度都不宜过高，以免破坏黄酮类化合物的母核。酸化 时，酸度也不宜过高，否则酸会与黄酮类化合物生成盐而溶 解。6黄苓苷在黄苓中以羧酸盐存在，可以被溶剂溶出，传统的提取方法以水做提取溶剂 ，但是黄苓苷只能微溶于热水，而且，在水煎煮的过程中，引入了大量的水溶性杂质。黄苓 苷为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮化合物，具有一定的脂溶性，所以在提取时可以选择一定浓度的乙醇溶液作为提 取液，不仅大大增加它的溶出率，并且可以抑制象鞣质、蛋 白、粘液等高分子杂质的溶出，便于过滤纯化。文献指出中 等浓度（50%