实验二血清总蛋白测定

1、血清总蛋白测定血清总蛋白测定学学 习习 要要 求求掌握掌握血清总蛋白的参考区间和临床意义血清总蛋白的参考区间和临床意义321掌握掌握双缩脲法测定血清总蛋白的基本双缩脲法测定血清总蛋白的基本原理和方法原理和方法了解了解血清总蛋白的测定方法血清总蛋白的测定方法1血清总蛋白测定的理论依据血清总蛋白测定的理论依据假定：假定： 1、所有蛋白质都是单纯的多肽链，糖脂类和、所有蛋白质都是单纯的多肽链，糖脂类和金属有机物等不计在内，含氮量平均为金属有机物等不计在内，含氮量平均为16%。 2、各种蛋白质与化学试剂的反应性一致。、各种蛋白质与化学试剂的反应性一致。血清总蛋白的测定方法血清总蛋白的测定方法方 法凯氏

2、定氮法原 理 测定样品中氮含量后，根据蛋白质平均含氮量16%计算出蛋白质的浓度。特 点经典经典的蛋白质测定方法，结果准确性好，精密度高，是公认的参考方法，用于标准蛋白质的定值和校正其他方法。但操作复杂，费时，不适合临床常规测定。三聚氰胺化学式：三聚氰胺化学式：C C3 3N N6 6H H6 6，分子量：，分子量：126126。含氮量达含氮量达66%66%，加入假奶粉后，会使假奶，加入假奶粉后，会使假奶粉总体含氮量升高，达到国家标准。粉总体含氮量升高，达到国家标准。 毒奶粉事件毒奶粉事件三聚氰胺三聚氰胺方 法酚试剂法原 理 蛋白质中的酪氨酸和色氨酸可使磷钨酸和磷钼酸还原为钨蓝和钼蓝，进行比色测

3、定。特 点灵敏度高，可用于微量蛋白质的测定。适合测定单一蛋白质，易受还原性化合物的干扰。方 法直接紫外吸收法原 理 蛋白质中芳香族氨基酸含有共轭双键，在280 nm处有一吸收峰进行比色测定。特 点灵敏度高，不破坏样品，可保持样品生物活性、回收全部蛋白质。准确性受芳香族氨基酸含量影响，不适合组成复杂的蛋白质标本测定。方 法染料结合法原 理 在酸性条件下，带正电荷的蛋白质可与染料阴离子反应而产生颜色改变。特 点简便、快速、灵敏。但不同蛋白质与染料的结合力不一致，染料有吸附作用，可造成仪器污染。氨基黑、丽春红、氨基黑、丽春红、考马斯亮兰考马斯亮兰白蛋白常用溴甲酚绿或溴甲酚紫等染白蛋白常用溴甲酚绿或溴

4、甲酚紫等染料结合法测定。料结合法测定。方 法比浊法原 理 三氯乙酸、磺基水杨酸等酸类能与蛋白质结合而产生微细沉淀，由此引起的悬浮液浊度大小与蛋白质的浓度成正比。特 点操作简便、灵敏度高，可用于尿液和脑脊液蛋白质浓度低的样品测定。但各种蛋白质形成的浊度有较大的差别，影响浊度形成的干扰因素多。方 法双缩脲法原 理 蛋白质中的连续肽键在碱性溶液在碱性溶液中可与铜离子作用产生紫色的络合物紫色的络合物，再进行比色测定。特 点对各种蛋白质呈色基本相同，特异性和准确度好，显色稳定，试剂单一，方法简便，是临床常规测定中首选方法。但灵敏度较低。 血清TP常用双缩脲法双缩脲法测定，凯氏定氮法凯氏定氮法可作为血清总

5、蛋白二级标准品的定值方法。其他方法可用于尿液、脑脊液、胸腹腔积液、尿液、脑脊液、胸腹腔积液、组织提取液、纯化蛋白组织提取液、纯化蛋白等样品中TP的测定。本实验采用本实验采用双缩脲法双缩脲法测定血清中总蛋白含量。测定血清中总蛋白含量。实验原理实验原理试剂与器材试剂与器材试剂与标本试剂与标本1、6 mol/L NaOH 溶液溶液2、双缩脲试剂（、双缩脲试剂（硫酸铜结晶、酒石酸钠钾、碘化钾）3、双缩脲空白试剂、双缩脲空白试剂4、6070 g/L 蛋白质标准液蛋白质标准液5、血清、血清主要器材主要器材 分光光度计分光光度计操作步骤操作步骤加入物 空白管 标准管2 测定管2 蒸馏水 0.05 标准液 0

6、.05 血清 0.05双缩脲试剂 4.0 4.0 4.0 混匀后于混匀后于37水浴水浴15 min，以蒸馏水调零，以蒸馏水调零，540 nm处测定各管吸光度。处测定各管吸光度。标准液浓度：标准液浓度：70.0g/L。结果计算结果计算血清总蛋血清总蛋白浓度（白浓度（g/L） =测定管测定管吸光度吸光度标准管标准管吸光度吸光度 标准液浓度标准液浓度参考区间参考区间正常成人血清总蛋白浓度：立位行走：6483 g/L 静 卧： 6078 g/L新生儿总蛋白浓度较低，随后逐月上升，1年后达成人水平。临床意义临床意义血清血清TP浓度下降：浓度下降：常见于血清白蛋白白蛋白含量下降，少数由免疫球蛋白免疫球蛋白含量的明显下降引起；其他血清蛋白质减少，一般不能在TP浓度中得到反映。血清血清TP浓度增高：浓度增高：主要见于慢性炎症等所致的多克隆免疫球蛋白增多，以及浆细胞病时单克隆免疫球蛋白的显著增多。注意事项注意事项双缩脲试剂中酒石酸钾钠酒石酸钾钠的作用是结合铜离子，维持铜离子在碱性溶液中的溶解度，加入碘化钾碘化钾可以防止铜离子自动还原成一价氧化铜沉淀。黄疸、