复方消卡栓的制备及质量研究

1、复方消卡栓的制备及质量研究摘要目的：通过处方筛选，确定处方及制备工艺，并对其质量进行研究。方法：用高效液相色谱(HPLC)法测定复方消卡栓中盐酸小檗碱和消旋卡多曲的含量。色谱条件：C18柱（5um，4.6×150mm）为色谱柱；流动相：乙腈-水（50:50）每1000ml中含磷酸二氢钾1.7g，含十二烷基磺酸钠0.85g；流速：1.0ml/min；检测波长：230nm；柱温：25。结果：盐酸小檗碱在范围内呈良好线性关系（r=0.996370084）；消旋卡多曲在范围内呈良好线性关系（r=0.999970398）；盐酸小檗碱和消旋卡多曲的精密度RSD分别为0.82896%和0.8628

2、6%，平均回收率分别为103.0776%和99.9983%。关键词栓剂 制备工艺 盐酸小檗碱 消旋卡多曲 质量研究复方消卡栓是由消旋卡多曲和盐酸小檗碱而研制成的用于治疗婴幼儿腹泻的一种栓剂。消旋卡多曲是一种新型抗腹泻药，属于脑啡肽酶抑制剂，具有高效特异性抑制分泌作用，主要通过抑制过度分泌的水和电解质来治疗腹泻，适用于各种腹泻的对症治疗。消旋卡多曲具有疗效高、起效快、对中枢神经系统、呼吸系统、心血管系统、内分泌系统无明显作用的优点，可用于2个月以上的婴儿止泻，但其水溶性差，且味苦，目前上市的剂型主要是颗粒剂、干混悬剂、分散片、胶囊剂等。盐酸小檗碱又名黄连素，具有显著的抑菌作用，对多种革兰氏阳性菌

3、和阴性菌有抑制作用，对肠道痢疾杆菌作用最强，同时，黄连素还具有收敛、减少肠液分泌的作用，用于治疗腹泻已有3000多年的历史，但其味极苦，对于口服婴幼儿乃至成年人都很难接受，患者的依从性差。针对上述问题，昆明邦宇制药有限公司研制了复方消卡栓（专利号201010563796），该药通过直肠给药，避免了口服困难的缺点，而且直肠内黏膜血管丰富，有利于药物在全身的循环，并能部分避免首过效应导致的肝代谢，药物的生物利用度较高。现对复方消卡栓的制备及其质量进行研究。1. 仪器与试药Waters 2489高效液相色谱仪（Waters）；紫外分光光度计UV-1700(岛津制作所)；BS210S电子天平（北京赛多

4、利斯）；HH-S2s数显恒温水浴锅（上海试验仪器制造有限公司）；HS-6150D超声仪（江苏汉邦科技有限公司）；ZRS-8G智能溶出试验仪（天津大学无线电厂）； RBY-A型融变时限试验仪（上海黄海药检仪器有限公司）盐酸小檗碱对照品（批号110713-200609；110713-200911；中国药品生物制品检定所提供）；消旋卡多曲对照品（批号100682-200401，中国药品生物制品检定所提供）；盐酸小檗碱原料药（批号101001；四川省玉鑫药业有限公司）；消旋卡多曲原料药（批号091203；山东齐都药业有限公司）；半合成脂肪酸甘油酯（批号101110；武汉祥和顺达精细化工有限公司）；聚乙

5、二醇4000（批号20101111；青岛天力源生物科技有限公司）；聚乙二醇6000（批号20101103；青岛天力源生物科技有限公司）；硬脂酸聚氢氧（40）酯（批号20101106；青岛天力源生物科技有限公司）；吐温-80（化学纯，天津市风船化学试剂科技有限公司）； 磷酸二氢钾、十二烷基磺酸钠、甲醇、氢氧化钠均为分析纯，乙腈为色谱纯，水为纯化水。2处方筛选2.1 栓剂的制备方法 按处方，称取栓剂基质置烧杯中，60-70水浴熔融，加入原料药研匀，倾入涂有润滑剂（95%乙醇:甘油=5:1）的栓模中（稍微溢出口为度），放冷，待完全凝固后，削去溢出部分，取出即得。2.2 基质的选择用三种不同的基质分别

6、制成栓剂，测其融变时限，结果见表1。表1 不同基质栓的比较不同基质的药栓融变及释药现象半合成脂肪酸甘油酯30分钟内能完全软化，但无药释现象聚乙二醇4000:聚乙二醇6000（1:1）60分钟内能软化和溶解，有释药现象硬脂酸聚烃氧（40）酯90分钟内不软化和溶解，无药释现象结论：以半合成脂肪酸甘油酯为基质，凝固较慢，药栓细腻。以聚乙二醇4000:聚乙二醇6000（1:1）为基质，凝固快，但有吸湿性。以硬脂酸聚烃氧（40）酯为基质，凝固快，光滑性差。硬脂酸聚烃氧（40）酯栓在较长时间内即不软化也不溶解，无释药现象。聚乙二醇类栓剂能溶解，能释放药物，但时间较长。半合成脂肪酸甘油酯栓剂，能较快软化，但

7、没有释放药物。为使栓剂能快速释药，我们选择了半合成脂肪酸甘油酯为基质，同时加入适量表面活性剂吐温-80。2.3 处方筛选 以半合成脂肪酸甘油酯为基质，加入不同比例的吐温-80，加入原料药搅匀，倾入涂有润滑剂（95%乙醇:甘油=5:1）的栓模中（稍微溢出口为度），放冷，待完全凝固后，削去溢出部分，取出即得。表2 不同栓剂辅料用量原辅料用量处方编号1234半合成脂肪酸甘油酯18.6618.7418.6418.69吐温-8000.37（2%）0.75（4%）1.12（6%）盐酸小檗碱（74.33%）4.044.044.044.04消旋卡多曲0.90.90.90.9取上述四种栓剂，参照中国药典2010

8、版测释放度第二法测其释放度，溶出介质：磷酸盐缓冲溶液（PH6.8）250ml。温度：37。转速：120转/分钟。分别于5、10、15、20、25、30分钟取样，微孔滤膜过滤，取20ul注入高效液相色谱仪，记录色谱图，计算其释放度，结果见表2.1、表2.2。2.1表面活性剂不同用量盐酸小檗碱的释放情况吐温-80用量取样时间（min）0510152025300%吐温-8000.270.810.891.161.431.582%吐温-80015.3340.3242.1942.7067.9168.624%吐温-80015.4444.2853.0560.1463.7168.586%吐温-8009.4934

9、.8734.9263.9568.1674.192.2 表面活性剂不同用量消旋卡多曲的释放情况吐温-80用量取样时间（min）0510152025300%吐温-8000.310.590.640.721.552.242%吐温-8007.668.9810.8411.9612.8516.004%吐温-8003.446.478.829.519.9910.686%吐温-8004.425.505.816.5110.3211.76图2吐温-80不同用量消旋卡多曲的释放情况图1吐温-80不同用量盐酸小檗碱的释放情况通过释放度的比较，可以看出盐酸小檗碱及消旋卡多曲的释药速度随吐温-80用量的增加而呈增加趋势，4%

10、吐温时盐酸小檗碱的释药速度最为平稳，而2%吐温时消旋卡多曲释药速度最快，同时也可以看出两个主药在6%吐温时释药并不是最快的，综合考虑后选用4%吐温的处方（处方3）进行试制。2.4 置换价的测定 2.4.1空白栓的制备 处方：半合成脂肪酸甘油酯24g，吐温-80 0.96g（按30粒计，制20粒）。制备5组。2.4.2含药栓的制备 处方：盐酸小檗碱4.04g（含量74.33%，以无水物计，按每粒含100mg）；消旋卡多曲0.902g(含量99.8%，按每粒含30mg)；半合成脂肪酸甘油酯17.23g；吐温-80 0.69g（按30粒计，制备20粒）。制备5组。2.4.3置换价的计算：将制备的空白

11、栓分别每组取20粒称重，计算得平均每粒重为0.762008g，同样将制备的含药栓分别每组取20粒称重，计算的平均每粒重0.81102g，则（4.04+0.902）/30=0.16473，0.81102-0.762008=0.16473×（1-1/x），计算得置换价x=1.4235。2.5 复方消卡栓制备2.5.1基质用量的计算：4.942/x=1.4235计算得x=3.4717，则基质用量为0.762008×30-3.4717=19.3885g，基质由半合成脂肪酸甘油酯和吐温-80共同组成，半合成脂肪酸甘油酯的量：y+0.04y=19.3885，计算得y=18.642818

12、.64g，即半合成脂肪酸甘油酯的量是18.64g，吐温-80的量是0.04×18.64g=0.75g(按30粒计)。2.5.2处方与制备：.1处方盐酸小檗碱 134.67g（74.33%）消旋卡多曲 30.07g（99.8%）半合成脂肪酸甘油酯 621.33g吐温-80 24.85g制成 1000粒.2制备取半合成脂肪酸甘油酯置烧杯中，60-70水浴熔融，加入盐酸小檗碱、消旋卡多曲及吐温-80，研匀，倾入涂有润滑剂（95%乙醇:甘油=5:1）的栓模中（稍微溢出口为度），放冷，待完全凝固后，削去溢出部分，取出即得。产品编号110301KB。按该处方重复制备10批，批号为110301，1

13、10302，110303，110304，110305，110306，110307，110308，110309，110310。3. 质量研究3.1 性状本品为黄色栓剂。3.2 鉴别 理化鉴别取本品10粒，60熔化，凝固，切成细末，称取0.1g，加水10 ml，缓缓加热溶解后，取出放冷，过滤。同法制备盐酸小檗碱空白栓对照液，做如下鉴别试验：（1）取上述滤液2ml，加碘-碘化钾试剂2滴，复方消卡栓的溶液生成红棕色沉淀，空白对照液的溶液显红色，但无沉淀生成。（2）取上述滤液2ml，加硅钨酸试剂8滴，复方消卡栓的溶液有淡黄色沉淀生成，空白对照液无沉淀生成。3.2.2色谱鉴别在含量测定项下记录的色谱图中，

14、供试品溶液两主峰的保留时间与对照品溶液相应的两主峰的保留时间一致。3.3 检查 重量差异 按中国药典2010版（二部）栓剂重量差异检查项目检查，10批样品中每批取完好的栓剂20粒，精密称定，结果见表3。表3 重量差异检查批号110301110302110303110304110305110306110307110308110309110310粒重（g）0.79530.79850.81800.80850.79980.80830.81730.80960.80560.80960.80450.81020.81530.81180.81880.82370.80700.80690.81630.80380.8

15、0100.79920.80990.81570.80730.81480.80760.81950.80570.82000.80190.80760.80860.80800.80640.80780.80360.81600.80620.81410.80400.79310.80750.81960.81510.79940.81170.80710.81780.81130.80310.79940.80610.80620.80600.81460.81320.80830.80310.80090.80740.80130.81800.80560.80170.81340.81890.80610.80210.80390.8

16、1770.79910.80830.81130.80830.81360.80950.80560.80300.80410.81170.81070.80580.81090.80720.81140.80550.80350.80750.81550.79720.79830.81130.80600.80770.80560.80840.80620.80800.80870.81180.80080.80790.81070.82320.80620.80420.80390.80980.80680.80580.81760.80260.82200.80880.81530.80320.80930.80660.80710.7

17、9100.79650.80830.80330.80580.80670.82050.80340.80440.80580.80110.81050.81210.81010.81190.80460.80420.80140.81110.80830.80400.80580.80850.80340.80150.80880.80780.80780.82030.81760.80380.81580.81680.80500.81190.82330.80580.80110.80880.80630.80530.79920.80750.80700.80590.80770.80930.80960.82040.81260.8

18、1420.79940.80590.80850.82180.80580.80020.81550.80530.82190.79750.80640.81140.81220.80850.80410.81690.80490.81120.80850.79590.80090.80610.81070.80500.81080.81080.81340.80460.8057平均（g）0.80370.80350.80980.80980.80910.81030.80930.80800.80890.8098结果合格合格合格合格合格合格合格合格合格合格10批样品重量差异均在规定范围内，且重量差异较小。 融变时限检查按中国药

19、典2010版（二部）附录X B融变时限项目检查，取完好的复方消卡栓3粒，在室温下放置1小时后，分别放在3各金属架的下层圆板上，装入各自的套筒内，并用挂钩固定，将装置分别垂直浸入盛有不少于4L的37.0±0.5水的容器中，其上端位置应在水面下90mm处，容器中装一转动器，每10分钟在溶液中翻转该装置一次，10批制备的产品均在30分钟内全部软化，结果符合规定。3.4 含量测定 检测波长的选择配制35.6ug/ml的消旋卡多曲甲醇溶液，在190-400nm波长范围内扫描，在347.5nm、230.0nm、208.0nm处有吸收。配制11.0ug/ml的盐酸小檗碱甲醇溶液，在190-400n

20、m波长范围内扫描，在349.5nm、265.5nm、229.5nm处有吸收。取消旋卡多曲甲醇溶液（35.6ug/ml）和盐酸小檗碱甲醇溶液（5.5ug/ml）的混合溶液，在190-400nm波长范围内扫描，在350.0nm、277.5nm、264.5nm、230.5nm、207.0nm处有吸收。根据上述扫描结果，消旋卡多曲和盐酸小檗碱的在230 nm处均有吸收，故检测波长确定为230nm。3.4.2流动相的选择称取消旋卡多曲303.6mg、盐酸小檗碱501.7mg，用甲醇定容至100ml，取1.5ml定容至50ml(含消旋卡多曲91.08ug/ml，含盐酸小檗碱150.51ug/ml)，过滤，

21、注入高效液相色谱仪，C18色谱柱检测，检测波长为230nm，在不同的柱温和不同的流动相下检测，结果各不相同。柱温为40时，流动相用乙腈-甲醇-醋酸铵缓冲溶液（55:10:35、55:20:25、55:5:34 ，PH=5.07）、乙腈-醋酸铵缓冲溶液（45:55/PH=5.07，50:50/ PH=5.07/ PH=4.0/ PH=3.0）、乙腈-醋酸铵缓冲溶液-磷酸溶液（50:50:0.1，PH=5.07）、乙腈-水（30:70）均没有得到满意的分离效果。柱温为25时，流动相用乙腈-水（50:50、50:50/含磷酸二氢钾1.7g/L、30:70/含磷酸二氢钾1.7g/L）均没有得到满意的分

22、离效果。而用乙腈-水（50：50每1000ml含磷酸二氢钾3.4g，含十二烷基磺酸钠1.7g）为流动相可获得满意的分离效果。为保护色谱柱，将磷酸二氢钾及十二烷基磺酸钠减少一半也可以得到满意的分离效果，而空白辅料和溶剂对其测定结果也无干扰，盐酸小檗碱的理论板数大于6000，消旋卡多曲的理论塔板数大于10000，分离度大于17.00。 色谱条件复方消卡栓的色谱条件初步确定为流动相：乙腈-水（50:50）每1000ml含磷酸二氢钾1.7g，含十二烷基磺酸钠0.85g；柱温：25；流速：1.0ml/min；检测波长：230nm，C18柱（4.6×150mm）为色谱柱。 对照品溶液的制备称取盐

23、酸小檗碱对照品（110713-200609）20mg，精密称量，加流动相定容至50ml，摇匀，得浓度为397.1037ug/ml的溶液（贮备液B1）；另外再称盐酸小檗碱对照品（110713-200911）20mg，精密称量，用流动相定容至25ml，摇匀，得浓度为628.4320ug/ml的溶液（贮备液B2）。称取消旋卡多曲对照品（100682-200401）25mg，精密称量，用流动相定容至50ml，摇匀，得浓度为504ug/ml的溶液。3.4.5 样品溶液的制备 取本品10粒，60水浴熔融，凝固，切成细末，称取0.1g，精密称定，加流动相约45ml，60水浴加热15分钟，取出，冰浴15分钟，

24、取出，放至室温，定容至50ml，滤过，取续滤液5ml，用流动相定容至10ml，微孔滤膜过滤，即得。 测定方法精密量取对照品溶液与样品溶液各20ul，注入高效液相色谱仪，记录色谱峰面积，按外标法计算结果。 线性精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液（397.1037ug/ml）0.3、0.6、1.6、2.5、3.4、4.4ml分别置10ml容量瓶中，再分别加入消旋卡多曲对照品溶液（504ug/ml）0.1、0.7、1.3、1.9、2.5、3.1ml，用流动相定容至10ml，配成6组不同浓度的溶液，微孔滤膜过滤，分别取20ul注入高效液相色谱仪中，测定峰面积。结果见表4。表4 线性关系分组123456盐酸小

25、檗碱的浓度（ug/ml）11.913123.826263.526699.2759135.0153174.7256盐酸小檗碱的峰面积131552725215426580711105289371403176516473567消旋卡多曲的浓度(ug/ml)5.0435.2865.5295.76126.00156.24消旋卡多曲的峰面积71197512847959470139873218212132266222消旋卡多曲浓度与峰面积关系图盐酸小檗碱浓度与峰面积关系图以盐酸小檗碱浓度（C，ug/ml）对峰面积（A）进行线性回归，得回归方程A=96216.59119C+424309.6798，r=0.99

26、6370084。试验结果表明盐酸小檗碱在浓度范围内线性关系良好。以消旋卡多曲浓度（C，ug/ml）对峰面积（A）进行线性回归，得回归方程A=14493.08862C+2890.83334，r=0.999970398。试验结果表明消旋卡多曲在浓度范围内线性关系良好。3.4.8 精密度试验取混合对照品溶液（盐酸小檗碱39.71ug/ml，消旋卡多曲50.40ug/ml）20ul注入色谱仪，记录色谱图，连续进样6次，测定盐酸小檗碱和消旋卡多曲的峰面积，测得峰面积见表5。表5 精密度试验结果序号盐酸小檗碱的峰面积消旋卡多曲的峰面积141411047673552420624077255334168890

27、775444441224117646245411865476250264178347779665RSD（%）0.828960.86286结论：用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱和消旋卡多曲的RSD值分别为0.82896%和0.86286%，精密度良好。3.4.9 稳定性试验将对照品溶液(含盐酸小檗碱39.71ug/ml，消旋卡多曲50.40ug/ml)及样品溶液在室温下放置0，2，4，8，12，24小时，分别取20ul注入高效液相色谱仪，测定色谱峰面积，结果见表6。表6 稳定性试验结果放置时间（小时）对照品峰面积样品峰面积盐酸小檗碱消旋卡多曲盐酸小檗碱消旋卡多曲041407667995591360

28、91525494212416457477456613514661554196441922427745591362842655674884205085782009136102805637601242035537630151363805455785824422301578465413696761560459平均值4188205.8377472713616222.33557072.17RSD（%）0.72091.02540.43460.8935结论：盐酸小檗碱24小时内峰面积变化不大，RSD<2%。消旋卡多曲24小时内峰面积变化不大，RSD<2%。可以看出盐酸小檗碱和消旋卡多曲24小时内

29、是稳定的。3.4.10 重现性试验取本品10粒，60熔融，凝固，切成细末，取0.1g，精密称定，共6份，分别加流动相约45ml，60水浴加热15分钟，取出，冰浴15分钟，取出，放至室温，定容至50ml，滤过，取续滤液5ml，用流动相定容至10ml，微孔滤膜过滤，分别取20ul注入液相色谱仪，测定峰面积，以外标法计算含量，结果见表7。表7 重现性试验结果编号称样量（g）盐酸小檗碱mg/粒）消旋卡多曲（mg/粒）10.1003101.152828.514820.1003100.907229.346030.1061101.350329.094640.1013102.147428.739450.098

30、0103.136029.203360.1023100.617132.0546平均值-101.551829.4921RSD（%）-0.91884.3820结论：试验结果表明，高效液相色谱法测定盐酸小檗碱和消旋卡多曲重现性良好。3.4.11 回收率试验分别取盐酸小檗碱20mg、25mg、30mg，消旋卡多曲10mg、15mg、20mg，精密称定，置25ml容量瓶中，各称3组，共9组，加流动相定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，分别精密量取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量，结果见表8。表8 回收率试验结果序号盐酸小檗碱消旋卡多曲加入量（mg）测得量（mg）回收率（%）加入量（

31、mg）测得量（mg）回收率(%)119.9220.34102.1110.0810.28102.01220.0720.86103.9410.3810.2298.35320.3721.19104.0310.1810.23100.46425.5726.50103.6314.7715.14102.49524.8325.38102.2315.3715.2999.46624.6825.63103.8715.0715.0199.61730.1032.17106.8720.0619.4599.96830.1830.84102.1821.7622.68104.21929.8129.4698.8420.4619.

32、7396.42平均(%)-103.08-100.00RSD（%）-2.0949-2.5832结论：盐酸小檗碱和消旋卡多曲的平均回收率分别为103.08%和100.00%，RSD分别为2.0949%和2.5832%（n=9）。2 样品含量测定取本品10粒，60溶化，凝固，切成细末，称取0.1g，精密称定，分别加流动相约45ml，60水浴加热15分钟，取出，冰浴15分钟，取出，放至室温，定容至50ml，滤过，取续滤液5ml，用流动相定容至10ml，微孔滤膜过滤，分别取20ul注入液相色谱仪，测定峰面积，以外标法计算含量。测定10批，结果见表9。表9 含量测定结果批号平均重（mg)称样量（g）盐酸小

33、檗碱含量（%）消旋卡多曲的含量（%）1103010.80370.098899.5397.161103020.80350.1010100.5899.041103030.80980.1073100.2599.351103040.80980.1019100.7599.741103050.80910.1005100.7999.641103060.81030.100797.5694.921103070.80930.1003101.1398.011103080.80800.099997.0596.211103090.80890.107597.18102.451103100.80980.104198.3699.30RSD（%）-1.6352.142结论：10批样品的中盐酸小檗碱和消旋卡多曲的含量都相差不大，都在标示量的90%-110%范围内，RSD值分别分别为1.635%和2.142%，组间含量偏差不大。4. 结果与讨论4.1 讨论栓剂为直肠给药，具有特殊的实用价值，在口服给药困难时，它是一种方便而重要的给药方式，可收到比口服药更好的效果。基质作为栓剂的重要组成部分，不仅使药物成型，且影响药物的释放和吸收，与其生物利用度和疗效有密切关系，因此，在研究工作中需要对释药基质做深入研究。栓剂的基质一般分为脂肪性基质和水溶性基质两类，常用的水溶性基质有甘油明胶、聚乙