临床本科3 溶贫检测

1、 第三节第三节 溶血性贫血检测溶血性贫血检测溶血性贫血定义：溶血性贫血定义： 红细胞的生存时间缩短红细胞的生存时间缩短15152020天天以下，破坏速度超过骨髓的代偿造以下，破坏速度超过骨髓的代偿造血能力时，才出现贫血血能力时，才出现贫血发病机制分类：发病机制分类： RBCRBC内在因素（遗传性内在因素（遗传性/ /先天先天性）性） RBCRBC外在因素（获得性）外在因素（获得性）free Hb(a2b2 tetramers)HbdimersHaptoglobin（Hp）haptoglobin-hemoglobincomplexkidneyslivermetHbbinds tohemopexi

2、n &albuminferriheme (Fe3+)globin溶贫的临床表现溶贫的临床表现 急性：发热、畏寒，可出现急性：发热、畏寒，可出现HbHb尿，尿，肾功能改变肾功能改变 慢性：贫血、黄疸、脾肿大、免疫慢性：贫血、黄疸、脾肿大、免疫指标异常，胆红素代谢异常指标异常，胆红素代谢异常红细胞红细胞破坏增多的依据破坏增多的依据 RBCRBC寿命寿命1515天天 血片见血片见RBCRBC碎片碎片 血浆游离血浆游离HbHb增高（血管内溶血）增高（血管内溶血） HbHb尿检测（），酱油色尿检测（），酱油色 尿含铁血黄素试验（）尿含铁血黄素试验（） 血清非结合胆红素增高血清非结合胆红素增高 尿

3、胆原增高尿胆原增高 血清结合珠蛋白减低血清结合珠蛋白减低 血浆高铁血红素白蛋白检测血浆高铁血红素白蛋白检测球形红细胞球形红细胞破碎红细胞、盔形红细胞等破碎红细胞、盔形红细胞等一、溶贫筛查试验一、溶贫筛查试验1 1、血浆游离血浆游离HbHb测定测定正常值：正常值：50mg/L50mg/L 意义：血管内溶血的指征意义：血管内溶血的指征2 2、血清结合珠蛋白测定血清结合珠蛋白测定正常值：正常值：0.71.5g/L0.71.5g/L 各种溶血时结合珠蛋白均可减低，严重血各种溶血时结合珠蛋白均可减低，严重血管内溶血明显减低，甚至测不出（血浆游管内溶血明显减低，甚至测不出（血浆游离血红蛋白超过离血红蛋白超

4、过1.3g /L1.3g /L时）。时）。 巨幼细胞贫血、严重肝病、口服避孕药、巨幼细胞贫血、严重肝病、口服避孕药、先天性无结合珠蛋白血症等减低或消失。先天性无结合珠蛋白血症等减低或消失。 增高见于炎症、感染、组织坏死、恶性肿增高见于炎症、感染、组织坏死、恶性肿瘤、风湿性疾病、口服避孕药、类固醇激瘤、风湿性疾病、口服避孕药、类固醇激素治疗。素治疗。3 3、血浆高铁血红素清蛋白检测血浆高铁血红素清蛋白检测 正常：正常： 阴性阴性 严重血管内溶血时呈阳性严重血管内溶血时呈阳性4 4、RBCRBC寿命测定（最佳）寿命测定（最佳） 正常值：正常值：25322532天天5151CrCr同位素标记，半衰期

5、同位素标记，半衰期1515天，天，说明有溶血存在。说明有溶血存在。5 5、尿含铁血黄素试验（尿含铁血黄素试验（Rous test)Rous test) 正常值：阴性正常值：阴性 溶贫中阳性只占溶贫中阳性只占1020%1020%二、二、 红细胞膜缺陷的检验红细胞膜缺陷的检验1 1、RBCRBC渗透脆性试验渗透脆性试验检测红细胞在不同浓度检测红细胞在不同浓度低渗盐水中的抵抗力低渗盐水中的抵抗力RBCRBC表面积表面积/RBC/RBC容积比值容积比值与与RBCRBC脆性成反比脆性成反比 参考值：参考值： 开始溶血开始溶血0.42%0.46% (NaCl0.42%0.46% (NaCl液液) ) 完全

6、溶血完全溶血0.28%0.32% (NaCl0.28%0.32% (NaCl液液) ) 意义：意义： 脆性增高脆性增高 遗传性球形细胞增多症遗传性球形细胞增多症 脆性减低脆性减低 地中海贫血、缺铁性贫地中海贫血、缺铁性贫血血2 2、自身溶血试验及其纠正试验、自身溶血试验及其纠正试验 正常人红细胞经孵育正常人红细胞经孵育48h48h后，溶血率很低后，溶血率很低4.0%4.0%，加葡萄糖或，加葡萄糖或ATPATP后更低（后更低（0.6%75% 75% G6PDG6PD缺陷：定性（），半定量缺陷：定性（），半定量70%70%。2 2、氰化物、氰化物- -抗坏血酸试验抗坏血酸试验 原理：略原理：略 结

7、果：正常血液几小时后变暗色结果：正常血液几小时后变暗色 意义：意义：G6PDG6PD缺乏者血液变成棕色（巧克缺乏者血液变成棕色（巧克力色），纯合子在力色），纯合子在2h2h内即变色，杂合子内即变色，杂合子要要34h34h变化变化 3 3、变性珠蛋白小体生成试验、变性珠蛋白小体生成试验受检受检RBCRBC乙酰苯肼乙酰苯肼 作活体染色（甲基紫）作活体染色（甲基紫） 373712h12h 有变性珠蛋白小体，则膜上形成紫黑色颗粒有变性珠蛋白小体，则膜上形成紫黑色颗粒下一张 G6PDG6PD缺乏致缺乏致GSHGSH减少，高铁减少，高铁HbHb增增多，形成多，形成HeinzHeinz小体小体体外活体染色后

8、，光镜下体外活体染色后，光镜下发现的发现的12m12m颗粒状颗粒状折光小体。折光小体。 结果：正常人结果：正常人30%30%意义：意义：见于不稳定血红蛋见于不稳定血红蛋白病、白病、G6PDG6PD缺陷症和缺陷症和芳香族苯胺或硝基类化芳香族苯胺或硝基类化合物中毒所致的溶贫。合物中毒所致的溶贫。 4 4、G6PD PKG6PD PK活性测定活性测定 四、珠蛋白生成异常试验四、珠蛋白生成异常试验 包括血红蛋白电泳、包括血红蛋白电泳、 HbFHbF定量测定（碱定量测定（碱变性试验）等变性试验）等五、免疫性溶血的检验五、免疫性溶血的检验1 1、抗人球蛋白试验（、抗人球蛋白试验（Coombs testCo

9、ombs test）直接法、间接法直接法、间接法直接抗人球蛋白试验（直接抗人球蛋白试验（DAGTDAGT） 测测RBCRBC表面结合的抗体（更重要，价表面结合的抗体（更重要，价值高）值高）受检者受检者RBCRBC悬液悬液+ +等量抗人球蛋白试剂等量抗人球蛋白试剂 低速离心后观察凝集低速离心后观察凝集 3737，15min15min 间接法间接法（IAGTIAGT）：）： 测游离特异的抗体（先使测游离特异的抗体（先使RBCRBC致敏，致敏，再与抗人球蛋白血清结合）再与抗人球蛋白血清结合）Coombs testCoombs test临床意义临床意义 正常人抗人球蛋白试验直接、间接均阴性正常人抗人球

10、蛋白试验直接、间接均阴性 自身免疫性溶血性贫血（温抗体型自身免疫性溶血性贫血（温抗体型 3737条条件下作用最强件下作用最强 IgGIgG）,( ,(冷抗体型冷抗体型 4 4条件条件下进行试验下进行试验 IgMIgM) ) 新生儿同种免疫溶血病、新生儿同种免疫溶血病、SLESLE、RARA、HDHD、NHL NHL 可阳性。可阳性。 2 2、冷热溶血试验、冷热溶血试验 检测补体依赖性冷热溶血素检测补体依赖性冷热溶血素 存在存在D-LD-L双向抗体，则（双向抗体，则（+ +） 正常为（正常为（- -），（），（+ +）见于）见于PNHPNH 3 3、冷凝集素试验、冷凝集素试验参考值：效价参考值：

11、效价1:401:40 意义：意义：AIHA AIHA 六、六、PNHPNH相关检测相关检测 属于红细胞膜缺陷，慢性血管内溶血属于红细胞膜缺陷，慢性血管内溶血PNHPNH不同时间尿样不同时间尿样1 1、酸化溶血试验（、酸化溶血试验（Ham testHam test） 特异性高，是国内外公认的特异性高，是国内外公认的PNHPNH确诊试确诊试验验 利用补体在弱酸性环境中激活，并攻击利用补体在弱酸性环境中激活，并攻击RBCRBC膜，致溶血膜，致溶血 。 正常人阴性，正常人阴性，PNHPNH阳性。阳性。 2 2、蔗糖溶血试验、蔗糖溶血试验 特异性敏感性均不如特异性敏感性均不如HamHam试验，仅试验，仅

12、做筛选。做筛选。 参考值：阴性参考值：阴性 3 3、蛇毒因子溶血试验、蛇毒因子溶血试验 特异检测特异检测PNHPNH第四节第四节 血型鉴定与交叉配血血型鉴定与交叉配血 血型定义：血型定义： 红细胞系红细胞系统血型：统血型：一、ABO系统与临床意义 1 1、分型原则分型原则 根据红细胞膜上含有抗原和血根据红细胞膜上含有抗原和血浆中含有相应抗体分为浆中含有相应抗体分为A A、B B、ABAB、OO四型四型 血型（表型）红细胞上抗原血型（表型）红细胞上抗原 血浆中抗体血浆中抗体 基因型基因型 A A 抗抗B AA、AO B B 抗抗A BB、BO O 无无 抗抗A、 抗抗B、抗、抗AB OO AB

13、A、B 无无 AB 父母的血型与子女的血型关系父母的血型与子女的血型关系 2、抗原 A A、B B抗原（含抗原（含H H抗原）在胚胎期已抗原）在胚胎期已形成，出生时抗原性不强，故胎形成，出生时抗原性不强，故胎儿、新生儿定血型时凝集性差。儿、新生儿定血型时凝集性差。血型抗原终生不变血型抗原终生不变。H H抗原属分泌抗原属分泌型物质，存在各组织中，以唾液型物质，存在各组织中，以唾液为多，可辅助鉴定为多，可辅助鉴定ABOABO血型血型。3、抗体 抗抗A A、 抗抗B B、抗、抗ABAB属属IgG IgG 或或IgMIgM型，天型，天然性抗体以然性抗体以IgMIgM为主，免疫性以为主，免疫性以IgGI

14、gG为主（如输血、妊娠后）。为主（如输血、妊娠后）。O O血型血清内抗体属血型血清内抗体属IgGIgG。新生儿溶血。新生儿溶血与与IgGIgG有关。有关。抗体也终生不变抗体也终生不变 抗抗A、抗、抗B在生后在生后3-6月才开始产生月才开始产生,5-6岁达高峰，故婴幼儿定血型时，岁达高峰，故婴幼儿定血型时，抗体效价低，抗原位点少，易误定抗体效价低，抗原位点少，易误定 ABO亚型 亚型是指属同一血型抗原，但抗亚型是指属同一血型抗原，但抗原结构或抗原位点数有一定差异。原结构或抗原位点数有一定差异。 最多见的最有意义亚型是最多见的最有意义亚型是A A型中的型中的A1A1、A2 A2 （A1AA1A、A

15、1B A1B 、A2B)A2B)。 A2BA2B含有含有A1A1抗体。抗体。 凡在血型鉴定过程中出现不明显凡在血型鉴定过程中出现不明显或可疑结果时应做亚型鉴定。或可疑结果时应做亚型鉴定。4、血型鉴定正向直接定型正向直接定型： 用已知抗体血清检查红细胞的抗原用已知抗体血清检查红细胞的抗原反转定型反转定型： 用已知血型的红细胞检查血清中抗用已知血型的红细胞检查血清中抗体体 正定型正定型 反定型反定型抗抗A A 抗抗B B 抗抗ABAB A A细胞细胞 B B细胞细胞 O O细胞细胞 + - + - + - + - - + - A A - -+ + + + + - - - - B B + + + -

16、 - - AB - + + - O 血血 型型三、交叉配血、输血原则 1 1、交叉配血、交叉配血主侧交叉配血：主侧交叉配血：次侧交叉配血次侧交叉配血: :： 2、输血原则 输血前复查血型，输血前复查血型， 做交叉配血做交叉配血; ;输同型输同型 血，多个不同血源血，多个不同血源 间互相交叉配血间互相交叉配血; ; 严格掌握输血指征严格掌握输血指征; ; 提倡成分输血提倡成分输血 意义输血；输血；辅助诊断新生辅助诊断新生儿溶血病；儿溶血病；器官移植；器官移植；遗传分析；遗传分析；其他其他二、Rh系统与临床意义 19001900年发现年发现ABOABO血型，血型，19401940年发现年发现RhRh血型血型 。抗原有抗原有C c D E eC c D E e五种五种 ，一般以，一般以D D定型定型。含有含有D D抗原的红细胞称为抗原的红细胞称为RhRh阳性阳性，不含不含D D抗原的为抗原的为RhRh阴性阴性. .我国人群汉族我国人群汉族RhRh（+ +）占