IL17及IFNγ在溃疡性结肠炎中的表达

1、IL-17及IFN-在溃疡性结肠炎中的表达 作者：何英 李春明 侯凤雪 刘玉杰 摘要 目的:检测Th17类细胞因子IL-17和Th1类细胞因子IFN-在溃疡性结肠炎(UC)患者中的表达,以此来探讨溃疡性结肠炎的发病机制。方法:用ELISA法分别检测溃疡性结肠炎患者和正常对照组结肠组织及血单核细胞中IL-17和IFN-的表达。结果:UC组结肠组织中IL-17表达较正常对照组显著增加(P<0.05);而UC组结肠组织IFN-表达较正常对照组无显著增加(P>0.05);UC组血单核细胞IL-17、IFN-表达较正常对照组无显著差异(P>0.05)。结论:局部

2、IL-17升高在UC的发病中可能起重要作用。 关键词 Th17细胞;Th1细胞;溃疡性结肠炎;IL-17;IFN- Abstract Objective:Th17 cytokines IL-17 and Th1 type cytokines IFN- in ulcerative colitis (UC) patients expressed so as to explore the pathogenesis of ulcerative colitis. Methods:ELISA,were detected in patients with ulcerative colitis and nor

3、mal colon tissue and the control group blood mononuclear cells of IL-17 and IFN- expression.Results:UC Colonic tissue IL-17 expression compared with control group increased significantly (P<0.05);while the UC group colon of IFN- expression compared with control group had no significant increa

4、se (P>0.05);UC group blood mononuclear cell IL-17,IFN- expression compared with control group had no significant difference (P>0.05). Conclusion:Local IL-17 increased in the pathogenesis of UC may play an important role. Key words Th17 cells;Th1 cells;Ulcerative colitis;IL-17;IFN- 溃疡性结

5、肠炎(ulcerative colitis,UC)是一类病因不明的胃肠道慢性非特异性炎症,近年来其发病率不断增加,已成为消化系统常见疾病和慢性腹泻的主要病因1。目前大多数研究者认为,该病的发病多与环境、遗传、感染和免疫学因素有关,是一种多基因参与的作用于免疫系统和靶器官的疾病,而免疫学因素在其发病过程中起至关重要的作用2。CD4+T细胞是免疫应答的重要效应细胞,本研究通过检测UC患者结肠组织和外周血单核细胞Th17类细胞因子IL-17和Th1类细胞因子IFN-的表达,以此来探讨UC的发病机制。 1 资料与方法 1.1 一般资料 UC组选择2008年1月2009年10月哈尔滨市第一医院门诊及住院

6、确诊为溃疡性结肠炎患者25例,诊断均符合2007年对我国炎症性肠病诊断治疗规范的共识意见中的诊断标准3。其中,男患12例,女患13例,年龄1870岁,轻度UC患者7例,中度UC患者14例,重度UC患者4例。对照组10例健康者,对照组与UC组相比年龄、性别构成差异无统计学意义(P>0.05)。 1.2 实验材料 UC组结肠镜下选择病变最显著的肠段结肠组织3块活检,对照组取正常肠组织3块活检,结肠组织均放入液氮罐中保存。另外,UC组和对照组均清晨空腹取外周血。 1.3 主要试剂 IL-17和IFN- ELISA试剂盒购自晶美生物工程有限公司;Ficoll-Hypaque分离液为天津市

7、川页生化制品有限公司产品。 1.4 方法 1.4.1 外周血单核细胞(PBMC)培养将血置于抗凝管中,经Ficoll- Hypaque分离液密度梯度离心,得到PBMC。取1×106/ml PBMC将其置于加有10%胎牛血清的RPMI1640培养液中,在37、5%CO2条件下培养24 h,取上清液。 1.4.2 ELISA方法检测PBMC中IL-17、IFN-严格按照试剂盒说明进行操作,终止反应后在450 nm处读取各孔吸光度值,以各孔OD值为纵坐标,以标准品的浓度为横坐标,绘制标准曲线,根据样品OD值查找对应的浓度。 1.4.3 结肠组织IL-17、IFN-测定将取得的结肠标本在含有

8、10 mmol/L DTT的HBSS中清洗15 min,再用HBSS洗净,测湿重,并将其置于加有10%胎牛血清的RPMI1640培养液中,在37、5%CO2条件下培养24 h,取上清液,再按ELISA操作说明进行操作。终止反应后在450 nm处读取各孔吸光度值,以各孔OD值为纵坐标,以标准品的浓度为横坐标,绘制标准曲线,根据样品OD值查找对应的浓度。 1.5 统计学分析 试验数据均数采用SPSS 13.0软件进行方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 ELISA法检测PBMC中IL-17及IFN- 见表1。25例UC患者PBMC中IL-17与正常对照组PBM

9、C中IL-17比较,差异无统计学意义(P>0.05);25例UC患者PBMC中IFN-与10例正常对照组PBMC中IFN-比较,差异无统计学意义(P>0.05)。 2.2 ELISA法检测结肠组织IL-17及IFN- 见表2。25例UC患者结肠组织中IL-17与10例正常对照组结肠组织中IL-17比较差异有统计学意义(P<0.05);25例UC患者结肠组织中IFN-与10例正常对照组结肠组织中IFN-比较差异均无统计学意义(P>0.05)。 3 讨论 长期以来,人们按照CD4+ T细胞分化和功能特征将其分为辅助性T细胞(Thelp cel

10、l)和调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)4。CD4+辅助性T细胞(Th)在适应性免疫应答中发挥重要的调节作用,人们根据其产生细胞因子的不同,把APC活化的抗原特异性CD4+ T细胞主要分为两个亚群:Th1细胞亚群和Th2细胞亚群。Th1细胞主要产生干扰素(IFN-)和IL-2,其效应与IFN-及IL-2的作用有关,能调节细胞免疫应答,清除某些细胞内寄生的病原体;Th2细胞产生IL-4、IL-5和IL-13,其效应主要与IL-4的作用有关,介导体液免疫应答和超敏反应,能增强对寄生虫的清除作用参与变态反应5。近年研究中发现一种特殊的产生白介素17 (interleuki

11、n 17,IL-17)的辅助型T 细胞,其具有重要的免疫调节作用,被称为Th17细胞亚群。Th17细胞介导炎性反应(防御胞外病原菌的感染)、自身免疫性疾病、肿瘤和移植排斥等的发生和发展6。 过去人们认为Th1细胞是自身免疫性疾病发病的主要原因,但缺乏IFN-、IFN-R或STAT1的动物对试验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)和类风湿性关节炎和实验性自身免疫性葡萄膜(EAU)高度易感;STAT1缺陷鼠可发生严重的EAE,伴有中枢神经系统(CNS)M、中性细胞浸润,这说明除Th1外,还存在另一类能诱导自身免疫的细胞亚群7。因此,以前关于Th1细胞是引起自身免疫病的主要效应细胞的报道是一种误解。在类风

12、湿性关节炎(RA)、多发性硬化、哮喘、狼疮和移植排斥反应中IL-17的表达都增加8。Kotake等人研究提示在类风湿性关节炎患者关节滑液中IL-17的含量,明显高于骨性关节炎患者关节滑液中IL-17的含量。由此可见,Th17细胞很可能在自身免疫病中发挥关键性作用。 Ogawa A9应用抗-CD3或抗-CD68与抗-IL-17进行双重染色,发现T细胞和单核/巨噬细胞是UC患者炎症局部IL-17的来源。这与IL-17的生物学特性一致,因此,可以说来源于T细胞和单核/巨噬细胞的IL-17,可以诱导并维持UC黏膜炎症应答,并证实了IL-17表达与疾病活动指数呈正相关,局部IL-17浓度的高低也反映了U

13、C疾病炎症的严重程度。 本实验用ELISA方法检测UC患者结肠组织和外周血单核细胞Th17类细胞因子IL-17和Th1类细胞因子IFN-的表达,结果为UC组结肠组织中IL-17表达明显增高;而UC组结肠组织IFN-及血单核细胞IL-17、IFN-表达均无显著增加。说明局部IL-17增高,可以引发UC的发病。目前生物治疗在溃疡性结肠炎的治疗中发挥着越来越重要的作用10,通过本实验我们可以进一步推测阻断IL-17分泌可能为治疗UC的一个新的手段。 参考文献 1郑家驹,史肖华,郭志荣.炎症性肠病的流行病学研究方法及进展J.中华内科杂志, 2009,48(6):522-523. 2盛剑秋,陆晓娟.炎症

14、性肠病遗传因素的研究进展J.中华医学杂志,2009,89(17):1153-1155. 3中华医学会消化病学分会炎症性肠病协作组.对我国炎症性肠病诊断治疗规范的共识意见J.中华消化杂志,2007,27(8):545-550. 4Castellino F,Germain R N.Cooperation between CD4+ and CD8+ T cells:when,where,and howJ.Annu Rev Immunol,2006,24(1):519-540. 5Harrington L E,Hatton R D,Mangan P R,et al.Interleukin17-prod

15、ucing CD4+ effector T cells develop via a lineage distinctfrom the T helper type 1 and 2 lineagesJ.Nat Immunol,2005,6(11):1123-1133. 6Weaver C T,Harrington L E,Mangan P R,et al.Th17:an effector CD4 T cell lineage with regulatory T cell tiesJ.Immunity,2006,24(6):677-688. 7Schnyder BS,Schnyder-Candrian A,Pansky ML,et al.IL-17reduces TNF-induced Rantes and VCAM-1 expressionJ.Cytokine,2005,31(3):191-202. 8Komiyama YS,Nakae T,Matsuki A,et al.IL-17 plays an importantrole in the development of experimental autoimmun