大四下8致癌试验

1、河河 北北 联联 合合 大大 学学双语教学示范课程双语教学示范课程毒理学基础毒理学基础课程负责人：张艳淑课程负责人：张艳淑2 第八章第八章 外源化学物致癌作用外源化学物致癌作用 第一节第一节 化学致癌过程化学致癌过程 第二节第二节 化学致癌机制化学致癌机制 第三节第三节 化学致癌相关的分子事件化学致癌相关的分子事件 第四节第四节 化学致癌物的分类化学致癌物的分类 第五节第五节 化学致癌物筛查的基本方法化学致癌物筛查的基本方法主讲人：闫立成主讲人：闫立成3外源化合物致癌作用外源化合物致癌作用 环境因素环境因素 生物因素生物因素 物理因素物理因素 化学因素化学因素 机体因素机体因素 遗传易感性遗传

2、易感性4 恶性肿瘤是当前危害人类健康的主要疾病之一，恶性肿瘤是当前危害人类健康的主要疾病之一，据世界卫生组织（据世界卫生组织（WHO）2000年的统计数据：全年的统计数据：全世界每年因癌症死亡的人数为世界每年因癌症死亡的人数为630万，而我国每年万，而我国每年死于癌症的人数就达到死于癌症的人数就达到140万；在不到万；在不到20年的时间年的时间内，我国癌症发病率就上升了内，我国癌症发病率就上升了69%，死亡率增加了，死亡率增加了29.4%，极大地影响了国人的身心健康和生命质量。，极大地影响了国人的身心健康和生命质量。80-85%与化学物致癌有关。与化学物致癌有关。 56生物致癌因子：生物致癌因

3、子： 毕晓普 J. Michael Bishop 美国 瓦尔姆斯 Harold E. Varmus 美国生物致癌因素包括病毒、细菌、霉菌等生物致癌因素包括病毒、细菌、霉菌等荣获荣获1989年诺贝尔生理学或医学奖年诺贝尔生理学或医学奖-发现了逆转录酶病毒致癌基因的细胞来源发现了逆转录酶病毒致癌基因的细胞来源与人类细胞癌变关系密切的有与人类细胞癌变关系密切的有4类病毒：类病毒：逆转录病毒、乙型肝炎病毒、乳头状瘤逆转录病毒、乙型肝炎病毒、乳头状瘤病毒和病毒和EB病毒，后三类都是病毒，后三类都是DNA病毒。病毒。7物理因素：电离辐射电离辐射X-ray: 广岛、切尔诺贝利、广岛、切尔诺贝利、 贫铀弹等贫

4、铀弹等8广岛和长崎因原子广岛和长崎因原子弹轰炸造成的伤害弹轰炸造成的伤害遗留至今，幸存者遗留至今，幸存者饱受癌症、白血病饱受癌症、白血病和皮肤灼伤等辐射和皮肤灼伤等辐射后遗症的折磨。据后遗症的折磨。据日本有关部门统计，日本有关部门统计，迄今，广岛、长崎迄今，广岛、长崎因受原子弹爆炸伤因受原子弹爆炸伤害而死亡的人数已害而死亡的人数已分别超过万和分别超过万和万。在万。在2006年年一年中，广岛又有一年中，广岛又有人死于由人死于由原子弹爆炸而引发原子弹爆炸而引发的各类疾病。的各类疾病。 9 1986年年4月月26日，前苏联的切尔诺贝利核电站发日，前苏联的切尔诺贝利核电站发生爆炸并引起大火，生爆炸并引

5、起大火，31人当即死亡。事故导致人当即死亡。事故导致8吨吨多的强辐射物泄漏，其中一部分放射物已沉积在几多的强辐射物泄漏，其中一部分放射物已沉积在几百英里以外的地方。电站周围百英里以外的地方。电站周围1000平方公里的地区平方公里的地区遭到了放射性污染。数以百计的居民得了严重的放遭到了放射性污染。数以百计的居民得了严重的放射病，全欧洲受到核辐射污染的食品、作物和牲畜射病，全欧洲受到核辐射污染的食品、作物和牲畜都必须毁掉。都必须毁掉。许多研究发现白俄罗斯、乌克兰及俄罗斯的小孩许多研究发现白俄罗斯、乌克兰及俄罗斯的小孩罹患甲状腺癌比例快速增加。罹患甲状腺癌比例快速增加。 10切尔诺贝利核电站切尔诺贝

6、利核电站111501752002252502753003253501995199619971998199920002001200220032004年份年份发发病病率率19952004年唐山市路南年唐山市路南路北区恶性肿瘤发病率路北区恶性肿瘤发病率 0100020003000400050006000肺癌肺癌肝癌肝癌白血病白血病乳腺癌乳腺癌胃癌胃癌食管癌食管癌 结肠癌结肠癌 直肠癌直肠癌 膀胱癌膀胱癌脑瘤脑瘤肿瘤肿瘤发发病病数数19952004年唐山市发年唐山市发病率前十位恶性肿瘤病率前十位恶性肿瘤 12基本概念基本概念 1、肿瘤：指有分裂潜能的细胞受致癌因素作用后、肿瘤：指有分裂潜能的细胞受致癌

7、因素作用后发生恶性转化和克隆性增生所形成的新生物。发生恶性转化和克隆性增生所形成的新生物。分为良性和恶性两大类：分为良性和恶性两大类：良性肿瘤膨胀性生长，与周围组织有明显的界良性肿瘤膨胀性生长，与周围组织有明显的界限，多有包膜，生长有限，多有包膜，生长有“自限性自限性”，对机体破坏，对机体破坏较小。较小。恶性肿瘤包括癌（由上皮细胞来源）和肉瘤恶性肿瘤包括癌（由上皮细胞来源）和肉瘤（由间质细胞来源）。增殖失控，细胞异常分化，（由间质细胞来源）。增殖失控，细胞异常分化，且具有侵袭和转移能力。且具有侵袭和转移能力。13142、致癌作用（、致癌作用（Carcinogenesis）：化学物质引）：化学物

8、质引起或诱导正常细胞发生恶性转化并发展成为起或诱导正常细胞发生恶性转化并发展成为肿瘤的过程。肿瘤的过程。3、化学致癌物（、化学致癌物（ Chemical Carcinogen）：具）：具有上述作用的化学物质。有上述作用的化学物质。15前致癌物前致癌物第一节第一节 化学致癌过程化学致癌过程近致癌物近致癌物终致癌物终致癌物 代谢酶代谢酶代谢酶代谢酶多态性多态性多态性多态性16一、细胞癌变的多阶段学说一、细胞癌变的多阶段学说 引发阶段引发阶段 (initiation) 促长阶段促长阶段 (promotion) 进展阶段进展阶段 (progression)171引发阶段引发阶段 致癌剂诱导细胞的基因突

9、变或表观遗传致癌剂诱导细胞的基因突变或表观遗传变异，导致异常增生的单个克隆癌细胞的生变异，导致异常增生的单个克隆癌细胞的生成，从而引发致癌过程。成，从而引发致癌过程。 从正常细胞到恶性转化细胞的过程至少从正常细胞到恶性转化细胞的过程至少涉及涉及4-5个基因的突变。个基因的突变。肿瘤发生肿瘤发生18 单克隆的癌细胞在一种或多种促癌物质的不断单克隆的癌细胞在一种或多种促癌物质的不断作用下，表型发生了改变，恶性肿瘤细胞的各种性作用下，表型发生了改变，恶性肿瘤细胞的各种性状得以表达的过程。状得以表达的过程。2促长阶段促长阶段引起肿瘤需致癌物的长期慢性作用。引起肿瘤需致癌物的长期慢性作用。引发物的单独作

10、用不会引起肿瘤引发物的单独作用不会引起肿瘤促癌物的单独作用也不会引起肿瘤促癌物的单独作用也不会引起肿瘤引发必须发生在促长之前引发必须发生在促长之前引发产生的作用是不可逆的改变，促长在早期阶段引发产生的作用是不可逆的改变，促长在早期阶段的改变是可逆的的改变是可逆的19 良性肿瘤转变为恶性肿瘤，并进良性肿瘤转变为恶性肿瘤，并进一步演变成更具有恶性表型或具有侵一步演变成更具有恶性表型或具有侵袭特征的肿瘤的过程。袭特征的肿瘤的过程。表现：自主性和异质性增加、生长加表现：自主性和异质性增加、生长加速、侵袭性加强、出现浸润和转移的速、侵袭性加强、出现浸润和转移的恶性生物学特征。恶性生物学特征。3进展阶段进

11、展阶段20进入进展期的标志：细胞失去维持核型稳定进入进展期的标志：细胞失去维持核型稳定的能力并出现染色体畸变；的能力并出现染色体畸变；微卫星不稳定性现象是整个基因组中微卫星不稳定性现象是整个基因组中DNA复制错误增多的一种指标，是肿瘤细胞基因复制错误增多的一种指标，是肿瘤细胞基因不稳定性一项灵敏的生物学标志。不稳定性一项灵敏的生物学标志。与促长期主要区别是出现核型不稳定性及由与促长期主要区别是出现核型不稳定性及由它演变而来的染色体异常。它演变而来的染色体异常。212223二、遗传易感性与化学致癌二、遗传易感性与化学致癌v肿瘤的发生是致癌因素的作用与个体的遗传易感肿瘤的发生是致癌因素的作用与个体

12、的遗传易感性共同决定的；性共同决定的；v影响致癌物作用的遗传多态性是个体肿瘤易感性影响致癌物作用的遗传多态性是个体肿瘤易感性的决定性因素。的决定性因素。24第二节第二节 化学致癌机制化学致癌机制一、体细胞突变学说一、体细胞突变学说研究证据：研究证据：致癌物代谢活化后生成的致癌物代谢活化后生成的DNA加合物诱导基因突变加合物诱导基因突变大多数致癌物在致突变实验中呈阳性大多数致癌物在致突变实验中呈阳性DNA修复缺陷可以导致肿瘤发生修复缺陷可以导致肿瘤发生肿瘤组织中发生染色体畸变或基因组不稳定性肿瘤组织中发生染色体畸变或基因组不稳定性肿瘤细胞来源于单细胞克隆肿瘤细胞来源于单细胞克隆癌基因与抑癌基因突

13、变在肿瘤细胞中普遍存在癌基因与抑癌基因突变在肿瘤细胞中普遍存在25v原癌基因（原癌基因（proto-oncogene）：指机体内正常细胞）：指机体内正常细胞所具有的能致癌的遗传信息。正常情况下呈静止状所具有的能致癌的遗传信息。正常情况下呈静止状态，在细胞生长分化和促进细胞分裂增殖等方面起态，在细胞生长分化和促进细胞分裂增殖等方面起重要作用。重要作用。v癌基因（癌基因（oncogene）：指其编码的产物与细胞的肿）：指其编码的产物与细胞的肿瘤性转化有关的基因。是一类被激活的基因，在细瘤性转化有关的基因。是一类被激活的基因，在细胞癌变过程中起着关键作用，所指导合成的蛋白质胞癌变过程中起着关键作用，

14、所指导合成的蛋白质能够促成细胞恶性表型的形成。能够促成细胞恶性表型的形成。26v抑癌基因（抑癌基因（anti-oncogene）：是抑制细胞过度生长、）：是抑制细胞过度生长、增殖从而遏制肿瘤形成的基因。增殖从而遏制肿瘤形成的基因。 维持正常细胞膜结构和稳定性、抑制细胞增殖维持正常细胞膜结构和稳定性、抑制细胞增殖相关基因的表达、调节细胞周期、促进细胞凋亡和相关基因的表达、调节细胞周期、促进细胞凋亡和调节细胞内信号传导过程等。调节细胞内信号传导过程等。 正常细胞转化为肿瘤细胞最少涉及两类基因的正常细胞转化为肿瘤细胞最少涉及两类基因的遗传学改变，即癌基因和抑癌基因的改变。遗传学改变，即癌基因和抑癌基

15、因的改变。2728（一）表观遗传调控失常导致肿瘤发生（一）表观遗传调控失常导致肿瘤发生 表观遗传学指基于非基因序列改变所致基因表达水平的表观遗传学指基于非基因序列改变所致基因表达水平的变化，提供何时、何地和如何应用遗传信息的指令，在时空变化，提供何时、何地和如何应用遗传信息的指令，在时空顺序上控制基因的表达，不涉及顺序上控制基因的表达，不涉及DNA序列改变但又可以通过序列改变但又可以通过细胞分裂遗传给子代细胞。细胞分裂遗传给子代细胞。 主要涉及非编码小分子主要涉及非编码小分子RNA改变、改变、DNA甲基化、组蛋白甲基化、组蛋白修饰、染色体重塑等。修饰、染色体重塑等。microRNA（调控蛋白翻

16、译）与人类肿瘤密切相关；（调控蛋白翻译）与人类肿瘤密切相关；DNA甲基化与肿瘤的发生也有密切的关系。与肿瘤的发生也有密切的关系。二、非突变致癌机制二、非突变致癌机制29（二）细胞异常增生（二）细胞异常增生良性增生：有明显的刺激因素，增生限于一定程度和一良性增生：有明显的刺激因素，增生限于一定程度和一定时间，一旦刺激因素消除，增生则停止。定时间，一旦刺激因素消除，增生则停止。恶性增生：细胞不受任何约束和控制，呈无规律的迅速恶性增生：细胞不受任何约束和控制，呈无规律的迅速生长，以致可以破坏正常组织器官的结构并影响其功生长，以致可以破坏正常组织器官的结构并影响其功能。能。（三）免疫抑制（三）免疫抑制

17、 在有免疫缺陷的个体中，恶性肿瘤的发生率比正在有免疫缺陷的个体中，恶性肿瘤的发生率比正常人要高得多。常人要高得多。30（四）内分泌激素失衡（四）内分泌激素失衡 环境内分泌干扰物接触与人类肿瘤的发生环境内分泌干扰物接触与人类肿瘤的发生密切关联。密切关联。（五）过氧化酶体增值剂激活受体（五）过氧化酶体增值剂激活受体 诱导氧化应激状态，导致过氧化氢的产生诱导氧化应激状态，导致过氧化氢的产生和降解失衡，损伤细胞内膜或和降解失衡，损伤细胞内膜或DNA；继而诱导；继而诱导DNA复制、干扰细胞周期调控，影响分化和增复制、干扰细胞周期调控，影响分化和增生。生。31第三节第三节 化学致癌相关的分子事件化学致癌相

18、关的分子事件一、端粒调控与细胞永生化一、端粒调控与细胞永生化细胞永生化过程是细胞恶性转化的必经阶段细胞永生化过程是细胞恶性转化的必经阶段抑癌基因抑癌基因p53和和Rb的失活以及端粒酶的激活是人的失活以及端粒酶的激活是人体细胞获得永生化的必要条件。体细胞获得永生化的必要条件。32三、细胞周期调控紊乱三、细胞周期调控紊乱细胞周期调控核心成员：细胞周期素，周期素依赖细胞周期调控核心成员：细胞周期素，周期素依赖性蛋白激酶和性蛋白激酶和CDK的抑制性蛋白。的抑制性蛋白。G1-S转化关卡是肿瘤形成最为关键的控制点转化关卡是肿瘤形成最为关键的控制点细胞周期调控包括细胞周期调控包括DNA损伤感应、细胞生长阻滞

19、、损伤感应、细胞生长阻滞、DNA修复和细胞凋亡启动功能。修复和细胞凋亡启动功能。四、细胞凋亡与肿瘤发生四、细胞凋亡与肿瘤发生细胞凋亡调控异常与肿瘤发生密切相关细胞凋亡调控异常与肿瘤发生密切相关内源性因素：细胞凋亡诱发机制的激活和凋亡抑制内源性因素：细胞凋亡诱发机制的激活和凋亡抑制因子的失活因子的失活外源性因素：物理、化学以及生物因素。外源性因素：物理、化学以及生物因素。33第四节第四节 化学致癌物的分类化学致癌物的分类一、根据对人类和动物致癌作用的分类v IARC将化学物对人类致癌性资料(流行病学调查和病例报告)和对实验动物致癌性资料分为四级：v 组1，人类致癌物。对人类致癌性证据充分。107

20、v 组2，对人类是很可能或可能致癌物。又分为两组，即组2A和组2B。n组组2A，人类可能，人类可能(probably)是致癌物，指对人类致癌性证据有限，是致癌物，指对人类致癌性证据有限，对实验动物致癌性证据充分。对实验动物致癌性证据充分。58n组组2B，人类可疑，人类可疑(possible)致癌物，指对人类致癌性证据有限，致癌物，指对人类致癌性证据有限，对实验动物致癌性证据并不充分；或指对人类致癌性证据不足，对实验动物致癌性证据并不充分；或指对人类致癌性证据不足，对实验动物致癌性证据充分。对实验动物致癌性证据充分。249v 组3，现有的证据不能对人类致癌性进行分类。512v 组4，对人类可能是

21、非致癌物。134 苏丹红是一种工业用染料，有苏丹红是一种工业用染料，有1、2、3、4号之分，号之分，苏丹红苏丹红1号的化学名为号的化学名为1-苯基偶氮苯基偶氮-2-萘酚萘酚，用于彩，用于彩色蜡、油脂、汽油、溶剂和鞋油等的增色添加剂。色蜡、油脂、汽油、溶剂和鞋油等的增色添加剂。国际癌症研究机构（国际癌症研究机构（IARC）将苏丹红）将苏丹红1号归为号归为第三类可致癌物质，即指，即指还缺乏足够的致癌的证据，但具有潜在的致癌危险。注射苏丹红。注射苏丹红1号的小鼠，肝脏号的小鼠，肝脏和膀胱可长肿瘤。和膀胱可长肿瘤。35 直接致癌物（直接致癌物（direct careinogens）：在）：在体内不需要

22、经过代谢活化即可致癌。体内不需要经过代谢活化即可致癌。 主要有内酯类、烯化环氧化物亚胺主要有内酯类、烯化环氧化物亚胺类和致癌金属化合物等。类和致癌金属化合物等。 间接致癌物（间接致癌物（indirect careinogens）：）：本身并不致癌，必须在体内经代谢转化形本身并不致癌，必须在体内经代谢转化形成的代谢产物才具有致癌作用。成的代谢产物才具有致癌作用。 包括包括PAHs、芳香胺类和一些天然物质、芳香胺类和一些天然物质如黄曲霉素如黄曲霉素B1等。等。终致癌物终致癌物近致癌物近致癌物前致癌物前致癌物二、根据致癌物作用模式分类二、根据致癌物作用模式分类36 不直接致癌，必须在体内经代谢转化，

23、其代谢产物才不直接致癌，必须在体内经代谢转化，其代谢产物才具致癌作用的化合物。具致癌作用的化合物。 前致癌物经代谢活化过程形成一种或一系列中间代谢产前致癌物经代谢活化过程形成一种或一系列中间代谢产物，必须经进一步代谢活化，才能形成终致癌物。物，必须经进一步代谢活化，才能形成终致癌物。前致癌物前致癌物 (precarcinogen)近致癌物近致癌物 (proximate carcinogen) 直接致癌物和间接致癌物经代谢活化所形成的直接致癌物和间接致癌物经代谢活化所形成的具有致癌作用的代谢物的统称具有致癌作用的代谢物的统称 。无机致癌物无机致癌物亲电子剂，或通过选择性改变亲电子剂，或通过选择性

24、改变DNA复制保真性，导复制保真性，导致致DNA的改变的改变终致癌物终致癌物 (ultimate carcinogen)37促癌剂促癌剂 本身无致癌性，在给以遗传毒性致癌物后再本身无致癌性，在给以遗传毒性致癌物后再给以促癌剂可增强遗传毒性致癌物的致癌作用，给以促癌剂可增强遗传毒性致癌物的致癌作用，也可促进也可促进“自发性自发性”转化细胞发展成癌。转化细胞发展成癌。 佛波酯佛波酯 (TPA及其衍生物及其衍生物)、苯巴比妥、二丁、苯巴比妥、二丁基羟基甲苯基羟基甲苯 (BHT)、1,8,9-蒽三醇、蒽三醇、DDT、Alkanes及胆盐及胆盐38第五节第五节 化学致癌物筛查的基本方法化学致癌物筛查的基

25、本方法 判别化学致癌物包括：定量构效关系分判别化学致癌物包括：定量构效关系分析、遗传毒性试验、细胞恶性转化试验、析、遗传毒性试验、细胞恶性转化试验、哺乳动物短期致癌试验、哺乳动物长期致哺乳动物短期致癌试验、哺乳动物长期致癌试验和人类流行病调查。癌试验和人类流行病调查。39一、定量构效关系分析一、定量构效关系分析 定量构效关系（定量构效关系（QSAR）是利用理论计算和统）是利用理论计算和统计分析工具来研究化合物结构与其生物学效应之间计分析工具来研究化合物结构与其生物学效应之间的定量关系。的定量关系。 从一种同系物着手，找出该系物质化学结构中从一种同系物着手，找出该系物质化学结构中与致癌性关系最密

26、切的结构成分，以及其他结构成与致癌性关系最密切的结构成分，以及其他结构成分改变时对其致癌性的影响。分改变时对其致癌性的影响。优点：快速、经济、有效优点：快速、经济、有效缺点：分析时没有结合生物学因素缺点：分析时没有结合生物学因素40二、遗传毒性试验二、遗传毒性试验理论依据：大多数致癌物具有致突变性。理论依据：大多数致癌物具有致突变性。优点：方法简单、快速、费用低、无需特殊检优点：方法简单、快速、费用低、无需特殊检测仪器测仪器缺点：无法检出非遗传毒性致癌物缺点：无法检出非遗传毒性致癌物41三、细胞恶性转化试验三、细胞恶性转化试验指外源因素对体外培养细胞所诱发的恶性表型改变。指外源因素对体外培养细

27、胞所诱发的恶性表型改变。1、原代细胞：、原代细胞：SHE细胞等；细胞等；2、细胞系：、细胞系：BALB/c-3T3等；等；3、病毒感染细胞：、病毒感染细胞：RLV/RE等等 观察终点：恶性变的细胞。观察终点：恶性变的细胞。 癌细胞贴壁生长，失去接触抑制能力，排列紊乱，重叠癌细胞贴壁生长，失去接触抑制能力，排列紊乱，重叠生长，交叉排列。正常细胞形成单层细胞。生长，交叉排列。正常细胞形成单层细胞。 42Phase-contrast morphology of the monolayer RAEC at confluence(200).The cell formed a typical cobble

28、stone pattern. 前列腺癌细胞 43细胞选择原则：细胞选择原则：体外容易培养和传代，阴性细胞克隆背景较低；体外容易培养和传代，阴性细胞克隆背景较低；细胞自发突变率低或自发转化能力很弱，动物裸鼠试验呈阴细胞自发突变率低或自发转化能力很弱，动物裸鼠试验呈阴性；性；已获无限生长能力，但仍保持接触抑制而无致瘤性的细胞系。已获无限生长能力，但仍保持接触抑制而无致瘤性的细胞系。优点：既可以筛查遗传毒性致癌物，也可以筛查非遗传毒性致优点：既可以筛查遗传毒性致癌物，也可以筛查非遗传毒性致癌物癌物缺点：测试细胞中代谢酶活性低下，降低了系统对间接致癌物缺点：测试细胞中代谢酶活性低下，降低了系统对间接致

29、癌物的检测敏感性。的检测敏感性。44四、哺乳动物短期致癌试验四、哺乳动物短期致癌试验 是指在有限的短时间内完成而不是是指在有限的短时间内完成而不是终生，又指观察的靶器官限定为一个而终生，又指观察的靶器官限定为一个而不是全部器官和组织。不是全部器官和组织。451、小鼠肺肿瘤诱发试验、小鼠肺肿瘤诱发试验 一次或多次给予受试物后，或一次给予一次或多次给予受试物后，或一次给予受试物一至两周后持续多次给予促癌剂，受试物一至两周后持续多次给予促癌剂，16至至30周左右结束试验，如受试物具有诱周左右结束试验，如受试物具有诱发肿瘤作用，可在肺组织发现肿瘤。发肿瘤作用，可在肺组织发现肿瘤。 462、大鼠肝转变灶

30、诱发试验、大鼠肝转变灶诱发试验 肝癌发生过程有几种明显的肝细胞病灶。肝癌发生过程有几种明显的肝细胞病灶。较早发现的是转变灶，进一步发展成为瘤较早发现的是转变灶，进一步发展成为瘤性结节。用酶组织化学和免疫组织化学方性结节。用酶组织化学和免疫组织化学方法将转变灶和结节中的谷氨酰转肽酶和胚法将转变灶和结节中的谷氨酰转肽酶和胚胎型谷胱甘肽转移酶染色，显色表明有肝胎型谷胱甘肽转移酶染色，显色表明有肝癌细胞生化表型的癌前细胞。癌细胞生化表型的癌前细胞。473、小鼠皮肤肿瘤诱发试验、小鼠皮肤肿瘤诱发试验 小鼠皮肤表面涂抹某些致癌物能诱发乳小鼠皮肤表面涂抹某些致癌物能诱发乳头状瘤或癌，皮下注射可诱发肉瘤。一般

31、头状瘤或癌，皮下注射可诱发肉瘤。一般9个月左右结束试验，如在启动后加用佛波个月左右结束试验，如在启动后加用佛波醇酯，则缩短至醇酯，则缩短至20周左右。周左右。484、雌性、雌性SD大鼠乳腺癌诱发试验大鼠乳腺癌诱发试验v 多环烃芳香胺、氯烷、亚硝基脲等能在多环烃芳香胺、氯烷、亚硝基脲等能在9个个月以内诱发乳腺癌。月以内诱发乳腺癌。v 由于肺和肝是最常见的发生肿瘤器官，也由于肺和肝是最常见的发生肿瘤器官，也是许多致癌物的靶器官，因此小鼠肺肿瘤是许多致癌物的靶器官，因此小鼠肺肿瘤和大鼠肝转变灶试验的应用价值较高。和大鼠肝转变灶试验的应用价值较高。49五、哺乳动物长期致癌试验五、哺乳动物长期致癌试验1

32、、动物选择、动物选择v 在致癌试验中选择动物最重要的依据是对诱发肿瘤的易感在致癌试验中选择动物最重要的依据是对诱发肿瘤的易感性。因此，要考虑物种、品系、年龄和性别。性。因此，要考虑物种、品系、年龄和性别。v 物种的选择对受试物有特定的靶器官时尤为重要。如大鼠物种的选择对受试物有特定的靶器官时尤为重要。如大鼠对诱发肝癌敏感，小鼠对诱发肺肿瘤敏感。对诱发肝癌敏感，小鼠对诱发肺肿瘤敏感。v 品系也不同。如同是小鼠，品系也不同。如同是小鼠， A系及亚系诱发肺肿瘤敏感。系及亚系诱发肺肿瘤敏感。v 还应考虑自发肿瘤，应选自发率较低者。还应考虑自发肿瘤，应选自发率较低者。v 年龄多使用断乳或断乳不久的动物，

33、性别一般是雌雄各半。年龄多使用断乳或断乳不久的动物，性别一般是雌雄各半。502、动物数量、动物数量 每组有雌雄各每组有雌雄各50只动物，在出现第一个肿瘤时，每组还只动物，在出现第一个肿瘤时，每组还有不少于有不少于25只动物。当对照组肿瘤自发率较高，而染毒组发只动物。当对照组肿瘤自发率较高，而染毒组发生率较低时，多需动物数则增加。生率较低时，多需动物数则增加。3、染毒方式、染毒方式 多为经口和经呼吸道接触染毒。多为经口和经呼吸道接触染毒。4、剂量设计、剂量设计 一般使用三个剂量。最高剂量应为最大耐受量，理想的一般使用三个剂量。最高剂量应为最大耐受量，理想的最大耐受量不应致死，也不引起可能缩短寿命的毒性表现和最大耐受量不应致死，也不引起可能缩短寿命的毒性表现和病理改变，与对照组相比体重下降不大于病理改变，与对照组相比体重下降不大于10%。 较低剂量为较低剂量为前一级较高剂量的前一级较高剂量的1/3至至1/2，最低剂量最好高于人类实际可能，最低剂量最好高于人类实际可能接触的剂量。接触的剂量。515、试验期限与染毒时间、试验期限与染毒时间 原则上试验期限要求长期或终生。一般情况下小原则上试验期限要求长期或终生。一般情况下小鼠最少鼠最少1.5年，大鼠年，大鼠2年。年。 一般主张一直染毒至试验结束。但也有人认为，一般主张一直染毒至试验结束。但也有人认为，为减少中途非肿瘤死亡