自身抗体的检测及应用

1、自身抗体的检测及应用自身抗体的检测及应用 自身抗体自身抗体 【概念概念】 由各种原因造成的机体由各种原因造成的机体B细胞产生针细胞产生针对自身组织成分的抗体，称为自身抗体。对自身组织成分的抗体，称为自身抗体。 自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志，每每 种自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体谱种自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体谱。自身抗体的意义自身抗体的意义 自身免疫性疾病的诊断；自身免疫性疾病的诊断； 疾病活动性的判断；疾病活动性的判断； 疗效的观察及预后；疗效的观察及预后； 指导临床用药等；指导临床用药等； 进行不同疾病的鉴别诊断。进行不同疾病的鉴别诊断

2、。自身抗体的检测方法自身抗体的检测方法 (1) 间接免疫荧光法间接免疫荧光法(IFT): 检测检测ANA的金标的金标 准，具有很高的敏感性和特异性。准，具有很高的敏感性和特异性。 将稀释的血清与生物载片（反应区内固定将稀释的血清与生物载片（反应区内固定有包被基质的生物薄片）温育，如果样本有包被基质的生物薄片）温育，如果样本是阳性的，特异性是阳性的，特异性IgG、IgA和和 IgM抗体与抗体与相应的核抗原结合。在第二次温育时，荧相应的核抗原结合。在第二次温育时，荧光素标记的抗人抗体与结合在生物基质上光素标记的抗人抗体与结合在生物基质上的抗体反应，形成荧光显微镜下所观察到的抗体反应，形成荧光显微镜

3、下所观察到的特异性荧光模式。的特异性荧光模式。（2）免疫印记法：）免疫印记法：将经亲和层析纯化的抗原包将经亲和层析纯化的抗原包被在固定的位置被在固定的位置，每一种抗原只对应一条条带每一种抗原只对应一条条带，不会产生非特异性反应条带不会产生非特异性反应条带，结果灵敏度高结果灵敏度高、特异好特异好，判断实验结果简单判断实验结果简单，每个反应区均有每个反应区均有质控带，可以显示操作是正确质控带，可以显示操作是正确，阴性与阳性的阴性与阳性的结果明显结果明显，容易判断容易判断，条带显色与抗体滴度相条带显色与抗体滴度相关关 。（3）酶联免疫吸附测定法（）酶联免疫吸附测定法（ELISA）：）：该法检该法检测

4、自身抗体快速、敏感及特异性高，但对抗原测自身抗体快速、敏感及特异性高，但对抗原的要求很高，必须使用高质量的纯化抗原，由的要求很高，必须使用高质量的纯化抗原，由于一种抗原只能检测一种抗体，多种抗体的检于一种抗原只能检测一种抗体，多种抗体的检测就必须多种单独的抗原，因此该法在临床免测就必须多种单独的抗原，因此该法在临床免疫实验室的应用受到一定限制疫实验室的应用受到一定限制 。 自身抗体检测常用方法学自身抗体检测常用方法学 间接免疫荧光法：解决有与无的问题 免疫印迹法：解决有什么的问题 酶联免疫吸附试验：解决有多少的问题2022-3-3抗核抗体（ANA）【定义定义】 ANA是抗核酸和核蛋白抗体的总称

5、，泛指抗各种细胞核成分的抗体。【分类分类】 (1)抗核蛋白抗体 (2)抗DNA抗体(包括抗dsDNA和抗ssDNA) (3)抗可提取性核抗原(ENA)抗体 抗核抗体（ANA） 检测方法：间接免疫荧光法（检测总抗） 根据荧光显微镜下细胞的形态确定核型(颗粒型，均质型等)，用荧光强度判定抗体滴度(1:100，1:320，1:1000，1:3200等) 优点：敏感性高 缺点：操作复杂，对人员要求高，各实验室标准有差异 抗核抗体（ANA）均质型均质型与与AHA（抗组蛋白抗体（抗组蛋白抗体）、抗、抗DNA有关，引起有关，引起LE形成主要见于形成主要见于SLE、药物性狼疮、药物性狼疮核膜型核膜型 与抗与抗

6、ds-DNA有关，有关， 多见于多见于SLE，特别是有肾炎者，特别是有肾炎者抗核抗体（ANA）核点型核点型 与抗与抗ENA有关，应进一有关，应进一步查特异性抗体步查特异性抗体核仁型核仁型多见于系统性硬皮病多见于系统性硬皮病特异性抗体检测 检测除ANA以外其他项目。其中抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)和抗双链DNA抗体(抗dsDNA)是用间接免疫荧光法。而其他特异性抗体(包括抗Sm抗体，抗着丝点抗体，抗SSA抗体等)均采用免疫印迹法。抗ENA抗体谱是以核内可提取核抗原为靶抗原的自身抗体的总称，它主要包括抗Sm、抗RNP、抗SSA、抗SSB、抗Jo-1、抗Scl-70、抗组蛋白抗体、抗核小体抗体、

7、抗核糖体P-蛋白抗体、抗着丝点抗体,抗dsDNA。 不同的自身免疫性疾病可以产生不同的抗ENA抗体，ENA抗体的检测对自身免疫性疾病的诊断和鉴别具有重要意义。标志抗体相关疾病抗Sm抗体系统性红斑狼疮（SLE）抗dsDNA抗体系统性红斑狼疮（SLE）高滴度抗RNP抗体混合性结缔组织病（MCTD）抗SSA/SSB抗体干燥综合征（SS）抗着丝点抗体进行性系统性硬化症局限型抗Scl-70抗体进行性系统性硬化症弥漫型抗Jo-1抗体多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM）抗肾小球基底膜抗体（GBM）肺出血肾炎综合征（Goodpasture）抗平滑肌抗体（ASMA）型自身免疫性肝病抗肝肾微粒体抗体（LKM-1） 型

8、自身免疫性肝病抗可溶性肝抗原抗体（SLA） 型自身免疫性肝病抗线粒体抗体2型（AMA-2）原发性胆汁性肝硬化（PBC）抗角蛋白抗体（AKA）类风湿性关节炎（RA） 欧蒙印迹法试剂盒用于体外定性检测血清或血浆中的人抗nRNP、Sm、SS-A（天然SS-A和Ro-52）、SS-B、Scl-70、Jo-1、CENP B、dsDNA、核小体、组蛋白和核糖体P蛋白等14种不同抗原lgG类抗体。自身抗体检测结果正确解读检测方法局限性：假阳性，假阴性临床意义局限性：非特异性，生理性，疾病前期临床表现阳性，实验室检查阴性实验室检查阳性，临床表现阴性“自相矛盾”的结果ANA (间接免疫荧光法)阳性，靶抗原阴性A

9、NA (间接免疫荧光法)阴性，靶抗原阳性（膜条法），占10%，为客观存在ANCA：荧光法阴性，但靶抗原阳性（5%） 指标阴性是否意味着疾病的排除？ 指标阳性意味着什么？ANA阳性 可见于多种临床情况，出了风湿病外，也可见于正常人或非风湿病。(1)健康人:年龄越大,阳性率越高(60岁的阳性率为20%-25%),但为低滴度。(2)有SLE家族史的一级亲属,有近50%为阳性(3)肺疾病、肝病、血液病、慢性感染等。注意：正常人中一般ANA滴度较低。ANA阳性 ANA阳性的意义需结合临床资料综合分析,阳性并不能确定某种临床诊断,反之,ANA阴性也不能排除自身免疫性疾病。 但是临床上如果ANA滴度1:1000肯定可以考虑为结缔组织病或自身免疫性疾病，具体是哪一种疾病，要结合其他临床病史、症状体征和实