临床基因扩增实验室建设方案

1、临床基因扩增实验室建立方案1、概述临床基因扩增实验又称PCR实验,是专门用来检验新型冠状病 毒、艾滋病、乙型肝炎、人乳头状瘤病毒等病毒感染性疾病的一种检 测手段。它可以通过将病毒体内所含的基因进展扩增的方法 , 测出一 些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。 由于该检测方法 可以测出普通检验难以检测岀的病毒并具有灵敏度高、 特异性高、 快 捷、对样品要求低等优点 , 因此被临床医生广为认可 , 已广泛应用于医 院的临床诊断和各防疫检测部门的疾病诊断。新型冠状病毒2021-nCoV是人类别离的第七类冠状病毒。该 病毒属于B属，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径 60-140nm

2、 其基因特征与SARS-CoV和MERS-CoV有明显区别。目前 研究显示与蝙蝠SARS样冠状病毒bat-SL-CoVZC45同源性达85% 以上。病毒对紫外线和热敏感， 56 度 30 分钟、乙醚、 75%乙醇、含 氯消毒剂、过氧乙酸和氯仿等脂溶剂均可有效灭活病毒。 基于目前的 流行病学调查和研究结果， 新型冠状病毒潜伏期为 1-14 天，多为 3-7 天；传染源主要是新型冠状病毒感染的患者， 无病症感染者也可能成 为传染源；主要传播途径为经呼吸道飞沫和接触传播， 在相对封闭的 环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况下存在经气溶胶传播的可能， 其他传播途径待明确；人群普遍易感。2021 年 01

3、 月 20 日国家卫健委公告： 将新型冠状病毒感染的肺 炎纳入 ?中华人民共和国传染病防治法 ?规定的乙类传染病， 并采取甲类传染病的预防、控制措施。并纳入 ?中华人民共和国国境卫生检疫法?规定的检疫传染病管理。实验活动暂按第二类病原微生物进展管 理。因此，开展新冠病毒核酸检测需要在法律条规、人员环境、生物 平安与防护以及质量控制等方面满足并符合国家相关技术标准要求。因此对新型冠状病毒检测需要有能保证绝对平安、 配置合理的实验室和非常标准的操作为前提。 近年来对临床基因扩增检验实验室的 建立越来越得到重视 , 因为它对检测结果的可靠性、准确性和平安性 起到至关重要的作用。 本方案主要从临床基因

4、扩增检验实验室的平面 布局, 空调通风系统设计、气流控制和污染的防制几个方面对实验室 设计中的主要特点进展了阐述。 临床基因扩增检验实验室设计的核心 问题是如何防止污染。 因此, 实验室的平面布局、 空调通风系统设计、 气流控制等都是围绕这个核心问题进展的。 下面就对这几个方面分别 进说明。2、PCR实验室平面布局临床基因扩增检验实验室原那么上分为四个单独的工作区域 : 试 剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反响混合物配制和扩增区、扩增 产物分析区，同时为了符合新冠实验检测需要增加独立衣帽间方便更 换防护装备。为防止穿插污染 , 进入各个工作区域必须严格遵循单一 方向进展，即只能在衣帽间更换防护

5、服后从试剂准备区标本制备区 -基因扩增区-扩增产物分析区。各实验区之间的试剂及样品传递应 通过传递窗进展。3、实验室空调通风系统设计及压力控制PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为防止各个实验区域间 穿插污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式。同时，要严格控 制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。4、实验室建立及设备分区名称实验室功能实验室专业要求衣帽间存储防护物质和实验前更换防护 服无特殊要求试剂准备区试剂的分装和扩增反响混合液的 准备，以及离心管、吸头等消耗品 的贮存和准备。应符合生物平安二级实验室防护设备、个 人防护和操作标准的要求样本制备区核酸RNA DNA提取、贮存及制 备

6、工作应符合生物平安二级实验室防护设备、个 人防护和操作标准的要求扩增区cDNA合成、DNA扩增应符合生物平安二级实验室防护设备、个 人防护和操作标准的要求产物分析区基因扩增产物分析应符合生物平安二级实验室防护设备、个 人防护和操作标准的要求4.2、实验室设计要求仅供参考实验室名 称使用面 积5通风要求噪声dB温湿度相对外界大 气压Pa不连续电源大型落地设备平均照 度lx衣帽间10试剂准备 区2012 次 /h< 601827C30%70%缓冲间10 主实验室5有300样本制备 区3012 次 /h< 601827C30%70%缓冲间5 主实验室-5有300扩增区2012 次 /h&

7、lt; 601827C30%70%缓冲间5 主实验室-10有荧光PCR仪有300产物分析 区3012 次 /h< 6018C± 2C50%h 20%缓冲间5 主实验室-15有杂交 仪有300序号设备名称型号配备数量备注1空气消毒机4台需保证标本制备区1台； 有条件PCF每个分区各1台2移动式紫外灯4台需保证四个分区各1台有条件每个缓冲间各 1台3超净工作台1台试剂准备区4微型离心机3台需保证试剂准备区1台，扩增区1台，扩增区1台5振荡器可调速3台需保证试剂准备区1台，标本制备区1台，标本制备区生物平安柜里使用1台6生物平安柜双人，A2、B2均可2台标本制备区，有条件可根据提取通

8、量及检测量 增加至少1台7全自动核酸提取仪1台标本制备区，有条件可根据提取通量及检测量 增加8咼速离心机2台标本制备区，需要保证标本制备区生物平安柜 里使用1台建议采购Eppendof品牌9医用冰箱4台试剂准备区1台，标本制备区2台其中1台 带锁，产物分析区1台 需具备-20度以下10多通道荧光仪96孔4通道具备CY5通道1台扩增区1台，有条件可根据提取通量及检测量增加11移液器100-1000UI20-200ul2-10uI3套试剂准备区，标本制备区及产物分析区 有条件可根据样本数选用八通道排枪12恒温水浴箱2台保证标本制备区1台病毒灭活处理，可使用 恒温箱代替，产物分析区1台13自动手消器

9、3个标本制备间2个，标本制备间缓冲 间1个14医废垃圾桶12个4分区及其缓冲间各1个，而新冠检测还需要保证标本制备区及其缓冲间 多配1个，以区分高压及未高压的医废垃圾15咼压火菌锅2台自动，无需人工排气式；建议保证标本制备区 1台16抽湿机选 用1台根据实际实验室环境选用17耗材无RNA酶话量吸头带滤芯/八连管/EP18移液器10ul/50ul/200ul/1000ul2/1/4/5根据标本量可以对局部量程数量增加5、实验室人员资质及配置经省市临检中心基因检测技术培训合格持岗位合格证；经 过省市疾控或其他相关部门的生物平安培训培训合格和具备 相应的实验技能；经PCR实验室内部的生物平安与操作标准培训与考 核合格。要求具备PCR上岗证：高级职称1人以上、中级职称2人以上、 初级职称要求4人以上，标本接收员1人以上。6、实验室防护物质要求新冠状病毒核