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文档简介

1、实验报告三（2015.5.17）贴壁细胞培养姓名：王亚斌 班级：生物技术12（1）班 学号： 成绩优秀良好中等及格不及格 一、实验目的初步掌握贴壁细胞培养的基本操作过程，为生物技术在医学上的应用打下基础。2、 实验器材倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml 玻璃吸管、酒精 灯等三、方法步骤、观察内容1.用倒置显微镜观察细胞，评估细胞(喉癌)生长状态以及确认无细菌和真菌污染。弃旧培养液：吸除或倒掉培养皿中的旧培养基。 2. 漂洗：每个培养皿加1mL PBS清洗单层细胞，漂洗贴壁细胞一次后倒掉。 3. 消化：每个dish加入1mL消化液（0.25%胰蛋白酶或0.025EDTA混合液1:

2、1），轻轻摇动培养皿，经消化液铺满所有细胞表面，在倒置显微镜下待1/2细胞变圆后加适量完全培养液终止。 4. 离心：1000rpm、5分钟离心沉淀细胞，去除培养基（含胰酶及EDTA）。5. 计数：离心前先滴好计数板待计数，计算细胞的浓度（个/ml）。取对数生长期于10cm dish的肿瘤细胞按上述操作消化计数后以2.5105/孔（5105/孔）密度铺于6孔板，再用完全培养液补至2 ml/孔。四、观察结果试验中所添加的防己诺林碱浓度分别为0um/ml 2um/ml 4um/ml 6um/ml 8um/ml 10um/ml，下图是各个梯度细胞存亡情况：0um/ml 2um/ml4um/ml 8um/ml10um/ml由上图可以看出，随着防己诺林碱浓度的升高，细胞数目在逐渐地减少，当防己诺林碱浓度在8um/ml的时候细胞形态发生明显变化，从圆球形变为梭形，而且数量有明显的减少，可以看出在这个浓度下细胞开始发生凋亡。5、 分析讨论本次试验在在不同浓度防己诺林碱作用相同时间下，细胞数目和形态有明显不同。防己诺林碱浓度越高，细胞数目越少，形态也发生变化。说明一定浓度的防己诺林碱可以起到抑制细胞的繁殖和数目的增长，而达到8um/ml及更高时，细胞开始发生凋亡，10um/ml浓度时，细胞的增殖受到了明显的抑制。由此推测防己诺林碱可抑制喉癌细胞增值作用，且浓度越高抑制作用越强。高浓

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