阿托伐他汀对高同型半胱氨酸血症诱发动脉粥样硬化的干预作用_图文

1、基础研究 阿托伐他汀对高同型半胱氨酸血症 诱发动脉粥样硬化的干预作用鲍晓梅 , 郑宏超(上海市徐汇区中心医院心内科 , 上海 200031摘要目的 :观察阿托伐他汀对动脉粥样硬化斑块的影响 , 并对其作用机制进行初步探讨 。 方法 :20g /LL-蛋氨酸灌胃法建立 ApoE 基因敲除小鼠高同型半胱氨酸血症 (hyperhomocysteinemia ,HHcy 模型 , 按实验分组 , 给予不同 剂量阿托伐他汀治疗 1个月后 ,用高效液相色谱荧光法测定血浆同型半胱氨酸 (Hcy 水平 , 相差显微镜下观察小鼠 主动脉根部病理学形态 , 免疫组织化学法检测主动脉血管平滑肌 SM-actin 的

2、表达 , TUNEL 法检测小鼠主动脉斑 块中的细胞凋亡指数 ,NBT 及光泽精化学发光法检测血管局部活性氧 (reactive oxygen species , OS 水平 , 光泽精 化学发光法检测主动脉血管 NADPH 氧化酶 (NADPH oxidase ,Nox 活性 , Western 印迹法检测 Nox4蛋白表达 。 结果 :ApoE-/-小鼠蛋氨酸喂养 3个月后 , 血浆 Hcy 水平升高 , AS 斑块形成 。 阿托伐他汀治疗 1个月后 , 呈剂量依 赖性地降低小鼠血浆 Hcy 水平 , 延缓 AS 病变的进程 , 减少斑块内凋亡细胞数量 , 降低了血管壁局部 OS水平 ,

3、Nox 活性及 Nox4蛋白表达 (均 P 0. 05 。 结论 :阿托伐他汀治疗后 , HHcy ApoE-/-小鼠 AS 病变进程延缓 , 其作用机制 与其下调 Nox4来源的 OS水平 、 抑制血管内皮细胞凋亡有关 。关键词 :高同型半胱氨酸血症 ; 动脉粥样硬化 ; 阿托伐他汀 ; 凋亡 ; 活性氧 ; NADPH 氧化酶 中图分类号 :972文献标识码 :A文章编号 :1009-7236(2015 01-001-06DOI :1013191/jchj20150001网络出版时间 :2014-9-1810:01网络出版地址 :http :/wwwcnkinet /kcms/doi/10

4、13191/jchj20150001html基金项目 :上海市自然科学基金项目资助 (12Z1429100 作者简介 :鲍晓梅 , 副主任医师 , 博士Email :baoxiaomei_ntsinacnProtective effects of atorvastatin against hyperhomocysteinemia-inducedatherosclerosisBAO Xiao-mei , ZHENG Hong-chao(Department of Cardiology , Central Hospital , Shanghai Xuhui District , Shanghai

5、200031, China AbstractAIM :To study the protective effects of atorvastatin on hyperhomocysteinemia (HHcy -induced atherosclerosis and possible mechanismsMETHODS :Seven-week-old male ApoE-/-mice were fed with 20g /LL-methionine for 3months to establish an atherosclerosis plaque model with HHcyIn the

6、divided groups (without or with atorvastatin pretreatment for 1month , plasma Hcy levels were measured by high-performance liquid chromatographyAortic roots were isolated for morphologic pathology and immunohistochemistry and TUNEL analysis were conducted to investigate the apoptosis index in the le

7、sionAortic OSproduction was measured by nitroblue tetrazolium (NBT formazan and lucigenin-enhanced chemiluminescence , aortic NADPH oxidase activity was evaluated with lucigenin-enhanced chemiluminescence , and NADPH oxidase 4(Nox4 was evaluated with Western blotESULTS:Three-month high methionine di

8、et induced the formation of atherosclerosis plaque in the aorta of ApoE-/-mice accompanied by an increase of Hcy in plasmaAdministration of atorvastatin for 1month reduced plasma Hcy level ,suppressed development of atherosclerosis plaque , inhibited apoptosis in atherosclerosis plaque and NBT forma

9、zan deposit , and decreased OSformation , NADPH oxidase activation and Nox4expression in the vessel wallCONCLUSION :Atorvastatin attenuates HHcy-induced atherosclerosis in ApoE-/-miceIts mechanism may be related to the inhibition of Nox4-derived oxidative stress and the subsequent decrease of apopto

10、sis of endothelial cells1心 脏 杂 志 (Chin Heart J 2015,27(1Key words :hyperhomocysteinemia ; atherosclerosis ; atorvastatin ; apoptosis ; oxidative stress ; NADPH oxidase大量流行病学调查和临床病例研究已证实 1:高同型半胱氨酸血症 (hyperhomocysteinemia , HHcy 是动脉粥样硬化 (atherosclerosis , AS 性心血管疾病 的独立危险因素 。 同型半胱氨酸 (Hcy 不仅对血管 内皮有直接的细胞

11、毒作用 , 还可通过氧化应激导致 内皮功能障碍 , AS 斑块形成 2。 近年来 , 他汀类药 物降低胆固醇以外的作用越来越受到重视 。 他汀类 药物可阻止低密度脂蛋白 (LDL 氧化 , 而且抑制了 平滑肌细胞增殖 , 使斑块趋于稳定 , 减少临床心血管 事件的发生 3。 有研究证明辛伐他汀不仅可减低 大鼠的胆固醇 。 还可作用于血管细胞 NADPH 氧化 酶来增加内皮型一氧化氮合酶表达及 mNA稳定性 , 改善血管内皮舒张功能 4。 阿托伐他汀能通过异 戊二烯通路抑制内皮细胞 NADPH 氧化酶 (NADPH oxidase , Nox 依赖性活性氧 (reactive oxygen sp

12、ecies , OS 形成 , 这被认为是阿托伐他汀的抗氧化应激的 重要途径之一 5。 本研究通过建立载脂蛋白 (Apo E 基因敲除小鼠 HHcy 的动物模型 , 观察阿托伐他汀 干预性治疗 , 对 AS 斑块的影响 ; 并对阿托伐他汀的 作用机制进行初步探讨 。1材料和方法11材 料 清 洁 级 ApoE-/-小 鼠 (雄 性 、 6周 、 C57BL /6J系 :北京实验动物中心 ; L-蛋氨酸 、 NAD-PH 、 光泽精 、 SM-actin , Nox4单克隆抗体 :Sigma 公 司 (美国 ; 阿托伐他汀钙 :辉瑞公司 (美国 ; Hcy 检 测试剂盒 :Drew Scient

13、ific 公司 (英国 ; 细胞凋亡原 位检测试剂盒 (in situ cell death detection kit , POD :oche公司 (美国 ; 苏木素 、 伊红 、 多聚甲醛 :上海试 剂二厂 ; HP标记的抗小鼠二抗 :Santa Cruz 公司 (美国 ; 正常山羊血清封闭液 、 DAB 显色试剂盒 :博 士德公司 。12动物分组及模型建立 所有小鼠在瑞金医院 动物实验中心适应性饲养 1周后 (即 7周龄 开始 实验 。 小鼠共 80只 , 随机分为 4组 , 分别为 :A 组 :对照组 (20只 , 每天 1ml 生理盐水灌胃 , 共 4个 月 ; B 组 :蛋氨酸组

14、(20只 每天 1ml 20g /LL-蛋氨 酸灌胃 , 共 4个月 ; C 组 :低剂量阿托伐他汀组 (20只 每天 1ml 20g /LL-蛋氨酸灌胃 3个月后 , 2mg / (kg d 阿托伐他汀 +20g /LL-蛋氨酸 , 每天 1ml 灌 胃 1个月 ; D 组 :高剂量阿托伐他汀组 (20只 每天 1ml 20g /LL-蛋氨酸灌胃 3个月后 , 4mg /(kg d 阿托伐他汀 +20g /LL-蛋氨酸 , 每天 1ml 灌胃 1个 月 。 各组均以普通饮食饲养 , 饮水不限 。 4个月后 全部处死采血 , 取材 。13标本采集 饲养 4个月后处死动物 , 摘眼球方 式取血

15、, 分离血浆 , 70 低温保存备用 。 摘取主动 脉根部 , 40g /L多聚甲醛再固定 24h 后行石蜡包 埋 , 以备病理学和免疫组织化学检测 。14血清总 Hcy 检测 将血清从 70 冰箱取 出 , 采用高效液相色谱法成批测定血清总 Hcy 浓 度 。 取血清 100l 加入 100g /L三正丁基膦的 N , N-二甲基甲酰胺溶液 10l 混匀 , 冰浴 10min 。 加 入 100g /L三氯乙酸 100l 混匀 , 室温放置 10min , 5000g 离心 5min 。 取上清 25l 加入 12. 5mmol /L硼酸缓冲液 (pH9. 5 62. 5l 、 1. 55m

16、ol /L氢氧化钠 5l 和 ABDF 7. 5l 混匀后 , 60 孵育 1h , 冰水终 止反应 。 3000g 离心 3min , 取上清 10l 作高效液 相色谱分析 。 色谱条件 :色谱柱 :惠普公司 ODS C18 5m 反相分析柱 (250 4mm ID ; 流动相 :V (0. 1 mol /L磷酸二氢钾 , 以正磷酸调至 pH2. 1 V (120 g /L乙腈 =90 10; 流速 :1. 0ml /min; 柱温 :24 ; 检测波长 :激发波长 385nm , 发射波长 515nm 。 按 上述条件 , 将 Hcy 标准样本和血浆样本进行 HPLC 测定 。15病理形态

17、学观察动脉斑块面积半定量分析 将取下来的血管组织 100g /L甲醛固定 , 石蜡包埋 、 切片 、 苏木精 -伊红 (H-E 染色 , 封片 。 放置 Olym-pus 显微镜下进行形态学观察 。 在 10倍物镜下将 完整的动脉横截面 HE 染色图象摄入图象分析软件 Qwin 2. 0, 测定血管壁全层厚度 、 斑块面积并计算斑 块和血管面积的百分比 。 每只小鼠随机选取 3张切 片测定 , 每张切片分别随机测量 4处数值后取均数 。 16组织免疫化学 石蜡切片以二甲苯脱脂和梯 度乙醇脱水 , 采用 S-P 法 (链霉菌抗生物素蛋白 -过 氧化 物 酶 连 接 法 , Streptavidi

18、n Peroxidase conjugate method , 参照 SM-actin 试剂盒说明书进行观察 , 磷酸缓冲液代替一抗为阴性对照 , 显微镜下全自动 图像分析观察 5个高倍视野 , SM-actin 阳性表达 呈棕黄色 。 PCNA 阳性细胞率 =PCNA 阳性细胞数 /总细胞数 。17TUNEL 技术检测小鼠主动脉血管组织中的凋 亡细胞 按细胞凋亡原位检测试剂盒 (oche公司 说明书处理石蜡切片 , 应用 Axioplan 2imaging 显微2心 脏 杂 志 (Chin Heart J 2015, 27(1图象分析系统计数 TUNEL 染色阳性细胞数 , 计算凋亡指数 (

19、apoptosis index ,AI , AI =(阳性细胞数 /总 细胞数 100%。 每张切片数 5个以上高倍视野 ,不少于 500个细胞 。 18NBT 染色法检测血管壁 OS水平 将取下来的血管组织剪成 5mm 长的 血 管 环 ,转 移 至 含 有 10g /L硝基氮蓝四唑 (nitro blue tetrazolium , NBT 的缓冲 液 中 ,37 孵 箱 中 孵 育 , 30min 后 加 入 0. 5mmol /LHCl 终止反应 。 血管环以 40g /L多聚甲醛固定 、 包埋 。 5m 厚度连续切片 , 脱蜡 复水 核 快红复染 脱水 透明 封藏 。 中性树脂封片

20、、 干燥 ,放置显微镜下观察 。 计算 NBT 染色阳性面积占 整个血管壁面积的百分率 , 并取平均数 。19光泽精化学发光法检测血管环 OS水平 新 鲜摘取的主动脉 , 剪成 1cm 长的血管环 , 放入新鲜 配置的 Krebs 液 (pH 7. 4 中 37 孵育 30min 后上 机检测 。 96孔检测板每孔加入 200l Krebs 液 , 将主动脉环放入其中 , 再加入 1mmol /L光泽精母液 1l , 稀释至工作浓度为 5mol /L, 每个样品检测 20次 , 每次 10s , 检测平均光强度 。 对照组光强度定为 1, 而其它各组的光强度值均为相对对照组来说的相 对值 。1

21、10光泽精化学发光法检测血管环 NADPH 氧化 酶活性 新鲜摘取的主动脉 , 剪成 1cm 长的血管 环 ,放入新鲜配置的 Krebs 液 (pH 7. 4 中 37 孵育 30min 后上机检测 , 96孔检测板每孔加入 200l Krebs 液 , 将主动脉环放入其中 , 加入 1mmol /L光泽 精母液 1l , 稀释至工作浓度为 5mol /L, 再加入 20mmol /LNADPH 母液 1l , 稀释至工作浓度为 100mol /L。 每个样品检测 20次 , 每次 10s , 检测 平均光强度 。 对照组光强度定为 1, 而其它各组的 光强度值均为相对对照组来说的相对值 。

22、111Western 印迹法 采用 SDS-PAGE 法 (十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝 胶 电 泳 检 测 动 脉 血 管 NOX4蛋白表达 。 制备十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶 , 蛋白变性后上样 ,100V 、 120mA 电泳分离 样品蛋白 , 转膜 , 封闭 , 一抗 (1 1500 40 孵育过 夜 , 二抗 (1 2000 室温孵育 2h 。 ECL 显影 , 曝光 。 -actin 的表达水平作为内参 。 112统计学处理 采用 SPSS 13. 0统计软件对实验数据进行分析 ,计量资料以 s 表示 , 组间比较 采用单因素方差分析 (ANOVA 。 计数资料以百分率表示 ,

23、组间比较采用 2检验 。 以 P 0. 05为差异 有统计学意义 。 2结果21各组 ApoE-/-小鼠血清 Hcy 浓度比较 实验结束后 , 比较各组血浆 Hcy 水平 , 结果发现 B 组 Hcy 水平较 A 组明显上升 (P 0. 05 , 经不同剂量阿托 伐他汀干预后 , 血浆 Hcy 水平有一定程度下降 , 但 C 组小鼠血浆 Hcy 浓度与 B 组相比 , 差异无统计学意 义 。 D 组小鼠血浆 Hcy 浓度降低 , 与 B 组相比差异 有显著性意义 (P 0. 05 , 高剂量阿托伐他汀组降 低血清 Hcy 的作用显著强于低剂量组 (P 0. 05 , 见表 1。表 1各组小鼠血

24、清 Hcy 浓度 、 主动脉根部斑块面积 、S-M -actin 的表达 、 凋亡指数变化( s 组别 n Hcy 浓度(mol /L 斑块面积 (mm 2 SM-actin 表达率 (% 凋亡指数(% A 组 203 7007 001216 3918 08B 组 2056 7a 247 007a 634 64a 241 58a C 组 2046 5205 009ac462 54ac146 43ac D 组2035 5ace167 008ace 314 24ace66 20ace与 A 组比较 ,a P 0.05; 与 B 组比较 , c P 0.05; 与 C 组比较 , e P 0.05。

25、 22各组 ApoE-/-小鼠主动脉根部斑块形态改变B 组小鼠主动脉根部斑块面积较 A 组显著增加 ,阿托伐他汀干预 1个月后 ,C 组和 D 组主动脉根部 斑块面积与 B 组相比显著减少 , 其中 D 组减少更明 显 (P 0. 05 , 见表 1, 图 1 。图 1各组 ApoE-/-小鼠主动脉斑块面积比较 ( 400A :对照组 ; B :蛋氨酸组 ; C :低剂量阿托伐他汀组 ; D :高剂量阿托伐他汀组 。3心 脏 杂 志 (Chin Heart J 2015,27(123各组小鼠主动脉根部 SM-actin 的表达 组织免疫化学结果显示 ,SM-actin 阳性细胞率在 B 组增加

26、至 (63 6 %。 经不同剂量阿托伐他汀干预后 , 主动脉根部血管壁 SM-actin 阳性细胞率均显 著下降 , 其中 D 组抑制作用更强 (P 0. 05 , 见表 1, 图 2 。图 2各组 ApoE-/-小鼠主动脉根部 SM-actin 表达 ( 400 A :对照组 ; B :蛋氨酸组 ; C :低剂量阿托伐他汀组 ; D :高剂量阿托伐他汀组 。24各组小鼠主动脉血管壁中的凋亡细胞比较 TUNEL 技术检测小鼠主动脉血管壁中的凋亡细胞 , 结果显示 :A 组为 (1. 8 0. 8 %。 B 组增加至 (24 6 %。 经不同剂量阿托伐他汀干预后 , C 组与 D 组主动脉根部血

27、管壁凋亡细胞数均显著下降 (与 B 组 比较 , 均 P 0. 05 。 D 组与 C 组相比 , 降低更明显 (P 0. 05 , 见表 1, 图 3 。图 3各组 ApoE-/-小鼠主动脉壁凋亡细胞的表达 ( 400A :对照组 ; B :蛋氨酸组 ; C :低剂量阿托伐他汀组 ; D :高剂量阿托伐他汀组 。25各组小鼠主动脉血管壁 OS水平比较 NBT法检测主动脉血管壁 OS水平 , 结果显示 :A 组 NBT 染色阳性面积占整个血管壁面积的百分率为 (3. 5 0. 8 %, B 组增加至 (31. 7 4. 0 %, 且在血管壁全 层均有分布 , 见表 2, 图 4。 经不同剂量阿

28、托伐他汀 干预后 , 主动脉根部血管壁 NBT 染色阳性面积明显 下降 , 与 B 组比较 , P 0. 05。 D 组与 C 组相比 , NBT 染色阳性面积降低更明显 (P 0. 05 。表 2各组小鼠主动脉血管壁 NBT 染色率 、 血管环 OS水平 、NADPH 氧化酶活性 、 Nox4蛋白表达( s 组别 NBT 染色率(% OSNADPH 氧化酶活性 Nox4蛋白表达 A 组35 08100 000100 000100 000B 组 317 40a 551 048a 486 072a 221 016a C 组 166 47ac364 068ac312 051ac191 024ac

29、D 组 102 17ace 227 041ace 206 069ace114 019ace与 A 组比较 ,a P 0.05; 与 B 组比较 , c P 0.05; 与 C 组比较 , e P 0.05 。 图 4各组 ApoE-/-小鼠主动脉根部 NBT 蓝色沉积 ( 400A :对照组 ; B :蛋氨酸组 ; C :低剂量阿托伐他汀组 ; D :高剂量阿托伐他汀组 。4心 脏 杂 志 (Chin Heart J 2015,27(126各组小鼠主动脉血管环 OS水平比较 光泽精化学发光法检测血管环 OS水平 , 结果显示 :B 组 血管环 OS水平是 A 组的 (5. 51 0. 48 倍

30、 。 经不同剂量阿托伐他汀干预后 ,C 组与 D 组主动脉血管环 OS水平均显著下降 (与 B 组比较 , 均 P 0. 05 , 且D 组与 C 组相比 , OS水平降低更明显 (P 0. 05 ,详见表 2。27各组小鼠主动脉血管环 Nox 活性比较 光泽 精化学发光法检测血管环 Nox 活性 , 结果显示 :B 组 血管环 Nox 是 A 组的 (4. 86 0. 72 倍 。 经不同剂量阿托伐他汀干预后 ,C 组与 D 组主动脉血管环 Nox 活性均显著下降 (与 B 组比较 , 均 P 0. 05 , 且 D 组与 C 组相比 , Nox 活性降低更明显 (P 0. 05 (表 2

31、。 28各组小鼠主动脉 Nox4蛋白表达 B 组小鼠主动脉 Nox4蛋 白 表 达 水 平 较 A 组 显 著 增 高 (P 0. 05 , 阿托伐他汀干预后 , 主动脉 Nox4蛋白表达水 平均有所下降 ,D 组 Nox 表达水平的降低有统计学 意义 (P 0. 05 (表 2、 图 5 。图 5Western blot 检验小鼠主动脉 Nox4蛋白表达A :对照组 ; B :蛋氨酸组 ; C :低剂量阿托伐他汀组 ; D :高剂量阿托伐他汀组 。3讨论自从发现 AS 血管壁及斑块中存在凋亡现象 , 大量研究证实 6:细胞凋亡是 AS 产生和发展的重要因 素 , 并参与影响斑块稳定性 。 A

32、S 斑块内细胞增殖与 凋亡伴随斑块发生发展的全过程 。 AS 早期 、 中期细 胞增殖大于凋亡 ; 后期则相反 。 细胞凋亡在斑块易 损性中发挥了重要作用 。 内皮细胞 、 平滑肌细胞凋 亡 ,细胞外基质合成减少 , 纤维帽胶原修复障碍 , 斑 块易于破裂 。 凋亡物质还可促进炎细胞趋化并激 活 , 分泌各种炎症和细胞因子 , 进一步吸引和激活炎 细胞 , 诱导平滑肌细胞迁移 、 增殖 , 并可作为凝血酶 产生的底物 , 诱发血栓形成 。 这说明细胞凋亡会促进 AS 形成及增加斑块易损性 7。高血糖 、 血管紧张 、 氧化的 LDL 、 脂蛋白 ( Lp ( 以及炎性因子等多种因素均可诱导血管

33、壁 内皮细胞及平滑肌细胞等发生凋亡 , 而氧化应激是其诱导各种血管壁细胞凋亡的主要机制 8。 本研究 通过 NBT 法及光泽精化学发光法检测了血管局部 OS水平 。 NBT 法作用原理为 OS中的 O 2极不稳定 , 生成的 O 2在有氧条件下很快发生再氧化 , 将氧 化型 NBT (黄色 还原为蓝色的甲腙 。 蓝色愈深 , 说明生 成 的 O 2越 多 。 我 们 的 结 果 显 示 ,蛋 氨 酸 组 ApoE-/-小鼠血管局部蓝色结晶显著增多 , 阿托伐他 汀组蓝色结晶减少 。 光泽精 , 又称硝酸双 -N-甲基丫啶翁 , 是一种带正电的发光剂 , 单价还原后生成光泽精自由基 , 再与 O

34、 2反应 , 生成不稳定的中间物光泽 精二恶二酮 , 由此分解成电激发状态 (N-甲基丫啶酮 , 通过释放光子 , 恢复到基态 。 光泽精作为探针 ,可特异性地检测细胞内 O 2, 其发光强度与 O 2水平 成正相关 。 我们的结果显示 , 蛋氨酸组 ApoE-/-小鼠 血管环发光强度明显增强 , 阿托伐他汀组较之减弱 。 这两项 试 验 均 表 明 , 蛋 氨 酸 饮 食 诱 导 产 生 HHcy ApoE-/-小鼠 , 并通过氧化应激损伤 , 导致 AS 形成 , 阿托伐他汀的抗动脉硬化作用可能与其参与下调血 管局部 O 2水平有关 。细胞膜上的 Nox 被认为是催化生成 O 2的主要 途

35、径 , 而血管内皮细胞及斑块内的巨噬细胞则是血 管壁中 O 2最重要的来源 。 在给兔喂高胆固醇食物后 ,其血管细胞 Nox 活性明显升高 , 同时主动脉内 O 2持续增加 , 给予超氧化物歧化酶 (SOD 、 过氧化 氢酶 (CAT 或丙丁酚抗氧化治疗可逆转上述变化 。用敲除 P47phox 的 ApoE 缺乏小鼠作实验 , 同样显示其主 AS 病变显著减轻 ,表明 Nox 产生的 OS在致 AS 中 起 着 重 要 作 用 9。 在 高 蛋 氨 酸 饮 食 诱 导 的HHcy 大鼠模型中 , 可检测到明显增高的 O 2水平和 Nox 活性 , 同时主动脉 Nox 的亚基 p22phox 的

36、表达明显增高 。 给予 Nox 的抑制剂 apocynin ,不仅能减少 O 2产生 , 还能恢复 HHcy 大鼠内皮依赖性的血管舒 张功能 ,而 p22phox siNA转染的人内皮细胞或平 滑肌细胞可消除 Hcy 诱导的 O 2形成 10。 这表明 HHcy 可通过 Nox 来源的 O 2损伤内皮功能 , 并导致导致 AS 形成 。 本研究以光泽精为指示剂 , NADPH 为底物 , 化学发光法检测了 HHcy ApoE-/-小鼠主动脉环 Nox 活性 , 同样证实了 HHcy 水平与 Nox 活性呈 正相关 , 而阿托伐他汀在降低血浆 Hcy 水平的同时 , 可抑制 Nox 的激活 。3

37、羟基 3甲基戊二酰辅酶 A (HMG-coA 还原酶抑制剂 他汀类药物是脂质代谢的限速酶 。 其不仅 有显著调脂的作用 , 还能够抑制细胞膜上鸟苷酸结 合调节蛋白的 hoA和 ac1通过异戊二烯化激活 。 ac1是 Nox 必须的组成部分之一 , 参与 Nox 的活 化 。 有研究发现他汀类药物能通过异戊二烯通路抑制 ac1及 Nox 活化 , 发挥抗氧化作用 11。 在血管 紧张 诱发的 C57BL /6小鼠高血压模型及高脂饮食5心 脏 杂 志 (Chin Heart J 2015,27(1 6 诱发的 ApoE-/ 小鼠 AS 模型中， 阿托伐他汀均能抑 制 OS 的产生， 下调主动脉 N

38、ox4 mNA 的表达及 ac1 向细胞膜转移。 在 Nox1 缺陷小鼠模型中， 阿 12 托伐他汀上述作用明显减弱 。 在既往离体细胞 ： 阿托伐他汀抑制 Hcy 诱导的 血管内皮 细 胞 及 内 皮 祖 细 胞 OS 产 生， 涉及抑制 实验中我们发现 Nox 活性及下调 Nox4 表达。 本次研究证实阿托伐 他汀降 低 HHcy ApoE-/ 小 鼠 血 管 局 部 Nox 活 性， Nox4 蛋白的表达。 综上所述， 我们认为阿托伐他汀可能通过减少 HHcy ApoE-/ 小鼠主动脉壁细胞凋亡， 抑制平滑肌 细胞增殖， 来延缓 HHcy ApoE-/ 小鼠 AS 病变进程。 而阿托伐他

39、汀抑制血管壁 Nox 来源的 OS 引起的 氧化应激反应是其主要保护机制之一 。 参考文献： 1 Homocysteine Studies Collaboration Homocysteine and risk of ischemic heart disease and stroke： a metaanalysisJ JAMA， 2002 ， 288 （ 16 ） ： 2015 2022 2 Moat SJ，Lang D，Mcdowell IF，et al Folate，homocysteine，endothelial function and caldiovascular disease J

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