谈疏肝祛淤方对兔膝早中期骨性关节炎软骨的影响

1、谈疏肝祛淤方对兔膝早中期骨性关节炎软骨的影响    摘要：目的探讨以“疏肝郁、祛膝淤”为原则组方的膝舒汤对膝早中期骨性关节炎软骨的影响机理。方法选择成年健康日本大耳白兔30只，雌雄不限，体重2.53.0 kg，随机分出未造模10只为正常组，20只通过结扎股静脉造膜8周后随机分为模型组和中药治疗组，每组10只。中药治疗组以膝舒汤灌胃，模型组以生理盐水灌胃。于实验开始后10，12周两个时相过量麻醉处死，每组每批各5只。打开关节腔进行关节软骨大体观察，然后切取股骨髁下面全层关节软骨，行软骨的组织学观察 。结果中药治疗2周软骨恢复明显，与模型组2周相比明显改善（

2、P0.01），但与正常组同时期相比软骨修复未接近正常（P0.01）；中药治疗4周软骨修复显著，与生理盐水对照4周相比明显改善（P0.01），与正常组同时期相比软骨修复接近正常（P0.05）。结论以“疏肝郁、祛膝淤”为原则组方的膝舒汤能明显促进软骨的修复，使软骨层次恢复正常，细胞核浓缩得以恢复，软骨陷窝结构恢复清晰。 关键词：  膝； 骨性关节炎； 中医药疗法； 软骨； 膝舒汤膝骨性关节炎（Knee osteroarthritis  KOA ）是一种多发于老年人的慢性进行性骨关节疾病，主要病变为膝关节软骨退行性变和继发性骨质增生，本病晚期治疗效果不佳，给患者的生活质量带来极大

3、的影响，故早中期的治疗显得尤为重要。根据全国名老中医朱少廷教授的经验，作者在临床实践中应用以“疏肝郁、祛膝淤”原则组方的膝舒汤（组成：柴胡、当归、白芍、茯苓、丹皮、羌活、防风、桃仁、红花、牛膝、木瓜、蜈蚣等）治疗中老年骨性关节炎，取得良好疗效1。为进一步探讨本治法的作用机理进行此实验研究。实验采用结扎兔股静脉造成骨内高压，从而造成兔膝早中期骨性关节炎模型，观察膝舒汤对兔膝早中期骨性关节炎的疗效，探讨其治疗机制。1  材料1.1  动物成年健康日本大耳白兔30只，雌雄不限，体重2.53.0 kg，由广西中医学院动物实验中心提供。1.2  药品膝舒汤浓缩液：纯中药制剂

4、，主要组成：柴胡、当归、白芍、茯苓、丹皮、羌活、防风、桃仁、红花、牛膝、木瓜、蜈蚣等。由广西中医学院第一附属医院制剂室提供，每10 ml相当生药12 g。生理盐水，广西南宁百会药业集团有限公司生产，批号0608012。青霉素钠，华北制药股份有限公司生产，批号X0601318。20%乌拉坦，中国医药集团上海化学试剂公司，批号20031216。1.3  仪器切开包，灌胃器，切片机，显微光镜，组织脱水机，组织包埋机， 漂烘处理仪，恒温培养箱，石蜡切片机， Olympus 摄影显微镜 ， Olympus CH-2 光学显微镜等。2  方法2.1  动物分组 日本大耳白兔3

5、0只，随机分出未造模10只为正常组，20只造模8周后随机分为模型组和中药治疗组，每组10只。2.2  造模原理  结扎股静脉，造成静脉瘀滞，骨内压升高，使其形成膝早中期骨关节炎模型。2.3  造模方法  20%乌拉坦4 ml/kg体重，行耳缘静脉麻醉。将大耳白兔仰卧固定在兔台上，以右腹股沟中点以下约1.0 cm为中心，作0.5 cm的纵行切口，分离股静脉，分别在远、近端双重结扎股静脉，在两道结扎线间将股静脉剪断，逐层缝合皮下组织及皮肤。术后青霉素肌注抗炎3 d，分笼饲养，1周后拆线。造模8周后开始治疗。2.4  给药  根据Meeh-

6、Rubner公式计算兔的给药剂量，中药治疗组予膝舒汤，1剂/d，相当于生药12 g·kg-1·d-1，配成30 ml，分早晚两次灌胃；模型组给予生理盐水30 ml，分早晚两次灌胃。2.5  取材  于实验开始后10，12周分批予过量麻醉处死，每组每批各5只。打开关节腔进行大体观察。然后切取股骨髁下面全层关节软骨。2.6  病理切片制作及染色  石蜡切片制作：取材后的标本经4 %多聚甲醛溶液固定2448 h，递增浓度乙醇脱水，石蜡包埋，间断连续切片（切片方向：与软骨表面垂直），厚3 m。苏木精-伊红(HE)染色，光镜下组织学观察。2.7

7、  结果评分股骨髁下面关节软骨组织学观察采用Mankin评分2。2.8  统计学处理所有实验数据采用SPPS10.0软件进行分析，以±s表示，采用t检验。3  结果3.1  关节软骨大体观察正常组：两个时相取材时观察白兔关节软骨外观均呈淡蓝色，色泽明亮，边缘规整，无裂纹及软化。模型对照组：第1次取材，白兔关节软骨失去原有光泽，变暗淡，触之较软，滑膜稍充血，轻度增生，粘连轻；第2次取材，白兔关节软骨失去原有光泽，变暗，触之软，滑膜充血轻，增生不明显，粘连轻。中药治疗组：第1次取材时关节软骨有光泽，色淡，触之稍软，滑膜无充血，轻度增生，粘连轻；第2

8、次取材时观察白兔关节软骨外观呈淡蓝色，色泽亮，边缘规整，无裂纹。3.2  关节软骨病理学评价见表12。表1  实验开始8周后继续以下处理2周的结果及Mankin评分值（略）中药（灌服2周）治疗组与生理盐水（灌服2周）模型对照组比较，P0.01，与正常组比较，P0.01；n=5表2  实验开始8周后继续以下处理4周的结果及Mankin评分值（略）中药（灌服4周）治疗组与生理盐水（灌服4周）模型对照组比较，P0.01，与未造模空白组比较，P0.05；n=5    中药灌服2周软骨恢复明显，与模型生理盐水灌服2周相比明显改善，P 0.01，说明两组间有显著性差异；但与正常组同时期相比软骨修复未接近正常，P0.01，说明两组间有显著性差异。    中药灌服4周软骨修复显著，表层软骨细胞多，软骨面平整，层次清晰，潮线清楚明显，软骨细胞馅窝清晰，细胞饱满，细胞核大，胞浆丰富，基质呈酸性（见图1）。模型组生理盐水灌服4周，软骨表面有破坏，凹凸不平，表层软骨细胞少，细胞层次不清，软骨细胞馅窝不清晰，胞浆少，基质偏碱性（见图2）。正常组表层软骨细胞多，排列均匀，软骨面平整，层次清晰，软骨细胞馅窝不清晰，细胞饱满，细胞核大，胞浆丰富，基质偏碱性（见图3）。中药灌服4周与模型组生理盐水灌服4周相比软骨明显改善（P