胎盘生长因子定量检测试剂盒说明书

1、深圳市科润达生物工程有限公司Shenzhen Kerunda Biotech Co.,Ltd胎盘生长因子定量检测试剂盒说明书（ PLGF ELISA 试剂盒： EIA452996T ）1、简介PLGF 酶免试剂盒可用于血清中人胎盘生长因子的定量检测。 此试剂盒仅供体外诊断用。血管生成和血管转化是胎盘正常发育过程中的重要步骤。 血管生成和血管转化不正常是造成先兆性子痫妊娠和宫内胎儿生长迟缓的重要原因。 胎盘生长因子是 VEGF 家族中一员，主要由胎盘分泌，它是一种有效的血管生成因子。PLGF 相应的受体（可溶性的fms 样酪氨酸激酶 1）也具有促血管生成的性质。2、实验原理PLGF ELISA

2、试剂盒是一种固相的酶联免疫试剂盒，采用三明治夹心法的原理。包被板的微孔中包被了能识别PLGF 分子上独特抗原位点的单克隆抗体。将含有一定量 PLGF 的病人样品加入到微孔中温育，之后洗板，洗板后加入对 PLGF具有特异性的生物素标记多克隆抗体。温育后洗板除去未结合的酶复合物。过氧化酶的结合量与样品中PLGF 的浓度成正比。加入底物液后，溶液所显示的颜色与样品中 PLGF 的浓度成正比。3、试剂盒成分1）包被板， 12*8 （可拆），96 孔，包被了抗 PLGF 抗体（单克隆）2）零标准品， 1 支， 1ml ，即用， 0pg/ml ，内含 0.35 的 proclin 防腐剂。3）标准品 1-

3、5，5 支，1ml ，即用，浓度： 25；50 ；125 ； 500 ；1000pg/ml ，内含 0.35 的 proclin 防腐剂。4）质控品， 2 支，1ml ，即用，质控品的浓度值及可允许范围请见试剂瓶标签或质控单。内含 0.35 的 proclin 防腐剂。5）检测缓冲液， 1 支， 30ml ，即用，内含 0.35 的 proclin 防腐剂。6）酶联物， 1 支， 14ml ，即用，生物素标记的羊抗人PLGF抗体，内含0.35的 proclin 防腐剂。7）酶复合物， 1 支， 14ml ，即用，内含链酶素辣根过氧酶复合物，内含 0.01% 的 methylisothiazol

4、one 和 0.02% bromonitrodioxane 防腐剂。8）底物液， 1 支， 14ml ，即用，内含 TMB 底物液。9）终止液， 1 支， 14ml ，即用，内含 0.5M 的 H2SO4 。避免接触终止液，以免刺激或着烧皮肤。10 ）洗涤液， 1 支， 30ml （40 倍浓缩），见试剂准备。注意：用于样品稀释的零标准品视需要而定。4、实验所需器材但试剂盒不提供1）可在 450nm 处读数的酶标仪2）可校准的精密移液器3）吸水纸4）蒸馏水深圳市科润达生物工程有限公司Shenzhen Kerunda Biotech Co.,Ltd5、样品此实验中要使用到血清，不要使用溶血、黄疸

5、血或脂血样品。请注意：含叠氮钠的样品不能用于此实验中。5.1 样品的采集血清：静脉穿刺采集全血，待其凝血，在室温下用离心获取血清。未完全凝血前请勿离心，接受了抗凝剂治疗的病人样品可能需要更长的凝血时间。5.2 样品的储存实验开始前， 应当将样品用盖子盖好， 2-8环境下可稳定存放 48 个小时。如果实验前想要将样品存放更长的时间，则应将样品冻存于 -20 的环境下。解冻的样品在实验前应反复倒置几次。5.3 样品的稀释在首次实验时，如果血清样品中 PLGF 的浓度高于最高标准品中 PLGF 的浓度，则应将此样品用零标准品稀释 10 或 100 倍，并按实验步骤重新检测。在计算浓度时应当将此稀释因

6、子考虑进去。例如：1）1：10 的比例稀释： 10 l 的血清 +90 l 零标准品（充分混合）2）按 1：100 的比例稀释： 10 l 已稀释好的 a ）+90 l 零标准品（充分混合）6、实验步骤为了保证检测条件的一致性，所有的标准品、样品和质控品都必须做双份检测。每次实验都含有一条标准曲线。1）将实验所需数目的板条置于板架上。2）将标准品、质控品和样品分别 25ul 加入到相应的微孔中。3）将 250ul 检测缓冲液加入到相应的微孔中。4）室温温育 30min （无需盖板）。5）弃取孔内反应液，用稀释好的洗涤液洗板3 次（每孔 400ul ），最后在吸水纸上拍干。注意：洗板步骤是否正确

7、明显影响实验的灵敏度和精密度。6）在每一微孔中加入 100ul 酶联物。7）室温温育 60min （无需盖板）8）弃取孔内反应液，用稀释好的洗涤液洗板3 次（每孔 400ul ），最后在吸水纸上拍干。9）在每一微孔中加入 100ul 酶复合物。10）室温温育 30min11）弃取孔内反应液，用稀释好的洗涤液洗板3 次（每孔 400ul ），最后在吸水纸上拍干。12）在每一微孔中加入 100ul 底物液。13）室温温育 30min14）在每一微孔中加入 100ul 终止液终止酶促反应。15）加终止液后 10min 钟内 450nm 处读取 OD 值。7、结果计算1) 计算每个标准品、质控品和病人

8、样本的平均吸光度值。2) 用吸光度值作为纵坐标（ y），浓度值作为横坐标（ x），以每个标准品的吸光度值对其相应的浓度值进行标绘，作一条标准曲线。 深圳市科润达生物工程有限公司Shenzhen Kerunda Biotech Co.,Ltd3) 用每一样品的平均吸光度值在标准曲线上确定其相应的浓度。4) 自动计算方法： IFU（说明书）上的结果是用四参数曲线自动计算出来的。其它的归纳方法可能会得出稍微不同的结果。5) 样品的浓度可直接从标准曲线上读取。样品中 PLGF 浓度高于最高标准品的必须用进行进一步的稀释。在计算样品浓度时就应当把此稀释因子考虑进去。8、期望值强烈建议每个实验室都确立自己

9、的正常值及范围。用DRG PLGF ELISA 试剂盒进行的一项研究中，得到如下健康人群的正常值（5% -95% ）。人群数量PLGF （pg/ml ）未孕成年妇女6520.3 -85.9男性9916.7 -63.1正常孕妇体内的 PLGF 水平比较平稳，在 28 到 32 周达到最高水平，之后便逐渐下降（ 5%-95% ）。妊娠中毒孕妇的中值与正常值相比，其结果明显下降：人群数量PLGF 中值（ pg/ml ）5% -95%PLGF （pg/ml ）健康孕妇5920733 -918健康孕妇（孕周27-32 周）17537.95161 -950妊娠中毒孕妇3433.0812 -13927-32 周）妊娠中毒孕妇（孕1377.1413.97 -268周为了确定先兆性子痫妊娠的可能性，建议在20-22 孕周检测 PLGF 水平。如果血清 PLGF 浓度在 20 -22 周内低于 100pg/ml ，则孕期产生先兆性子痫妊娠的可能性越大。妊娠早期 PLGF 水平的检测也逐渐作为先兆性子痫妊娠的一个指标 （15-16 周时， PLGF 水平低于 50pg/ml ），但