生物工业下游技术第七章反胶团萃取法

1、生物工业下游技术第七章反胶团萃取法2 随着基因工程和细胞工程的发展，尽随着基因工程和细胞工程的发展，尽管传统的分离方法管传统的分离方法( (如溶剂萃取技术如溶剂萃取技术) )已在已在抗生素等物质的生产中广泛应用，并显示抗生素等物质的生产中广泛应用，并显示出优良的分离性能，但它却难以应用于蛋出优良的分离性能，但它却难以应用于蛋白质的提取和分离。白质的提取和分离。4 其主要原因有两个：一是被分离对象其主要原因有两个：一是被分离对象蛋白质等在蛋白质等在40-5040-50便不稳定，开始变性，便不稳定，开始变性，而且绝大多数蛋白质都不溶于有机溶剂，而且绝大多数蛋白质都不溶于有机溶剂，若使蛋白质与有机溶

2、剂接触，也会引起若使蛋白质与有机溶剂接触，也会引起蛋白质的变性；二是萃取剂问题，蛋白蛋白质的变性；二是萃取剂问题，蛋白质分子表面带有许多电荷，普通的离子质分子表面带有许多电荷，普通的离子缔合型萃取剂很难奏效。缔合型萃取剂很难奏效。 因此研究和开发易于工业化的、高效的因此研究和开发易于工业化的、高效的生化物质分离方法己成为当务之急。反胶束生化物质分离方法己成为当务之急。反胶束萃取法就是在这一背景下发展起来的一种新萃取法就是在这一背景下发展起来的一种新型分离技术。型分离技术。5 反胶团溶液的概念：反胶团溶液的概念：反胶团溶液是透反胶团溶液是透明的、热力学稳定的系统。反胶团是明的、热力学稳定的系统。

3、反胶团是两两性表面活性剂性表面活性剂分散于分散于非极性有机相非极性有机相中亲中亲水性基团自发形成的水性基团自发形成的内含微小水滴的、内含微小水滴的、空间尺度仅为纳米级的聚集体空间尺度仅为纳米级的聚集体。所以表。所以表面活性剂是反胶束溶液形成的关键。面活性剂是反胶束溶液形成的关键。反胶团萃取具有成本低、溶剂可反复使用、萃取率和反胶团萃取具有成本低、溶剂可反复使用、萃取率和反萃取率都很高等突出的优点；反萃取率都很高等突出的优点；反胶团萃取还有可能解决外源蛋白的降解，即蛋白质反胶团萃取还有可能解决外源蛋白的降解，即蛋白质( (胞内酶胞内酶) )在非细胞环境中迅速失活的问题；在非细胞环境中迅速失活的问

4、题；由于构成反胶团的表面活性剂往往具有溶解细胞的能由于构成反胶团的表面活性剂往往具有溶解细胞的能力，因此可用于直接从整细胞中提取蛋白质和酶。力，因此可用于直接从整细胞中提取蛋白质和酶。 可见，反胶团萃取技术为蛋白质的分离提取开辟了可见，反胶团萃取技术为蛋白质的分离提取开辟了一条具有工业开发前景的新途径。一条具有工业开发前景的新途径。优点：优点：78l具有分子识别并允许选择性透过的半透具有分子识别并允许选择性透过的半透膜功能；膜功能；l在疏水性环境中具有使亲水性大分子保在疏水性环境中具有使亲水性大分子保持活性功能。持活性功能。9l将表面活性剂溶于水中，当其浓度超过将表面活性剂溶于水中，当其浓度超

5、过临界胶团浓度临界胶团浓度(CMC)时，表面活性剂就时，表面活性剂就会在水溶液中聚集在一起而形成聚集体，会在水溶液中聚集在一起而形成聚集体，在通常情况下，这种聚集体是水溶液中在通常情况下，这种聚集体是水溶液中的胶团，称为正常胶团的胶团，称为正常胶团(normal micelle)。l在胶团中，表面活性剂的排列方向是极在胶团中，表面活性剂的排列方向是极性基团在外，与水接触，非极性基团在性基团在外，与水接触，非极性基团在内，形成一个非极性的核心、在此核心内，形成一个非极性的核心、在此核心可以溶解非极性物质。可以溶解非极性物质。10若将表面活性剂溶于非极性的有机溶剂中，并使其浓若将表面活性剂溶于非极

6、性的有机溶剂中，并使其浓度超过临界胶团浓度度超过临界胶团浓度( (CMC) )，便会在有机溶剂内形成便会在有机溶剂内形成聚集体，这种聚集体称为反胶团，其结构示意见图聚集体，这种聚集体称为反胶团，其结构示意见图b。在反胶团中，表面活性剂的非极性基团在外与非极性的在反胶团中，表面活性剂的非极性基团在外与非极性的有机溶剂接触，而极性基团则排列在内形成一个极性核有机溶剂接触，而极性基团则排列在内形成一个极性核( (po1ar core) )。11l此极性核具有溶解极性物质的能力，极此极性核具有溶解极性物质的能力，极性核溶解水后，就形成了性核溶解水后，就形成了“水池水池”(water pool)。当含有

7、此种反胶团的有机溶剂与当含有此种反胶团的有机溶剂与蛋白质的水溶液接触后，蛋白质及其他蛋白质的水溶液接触后，蛋白质及其他亲水物质能够通过螯合作用进入此亲水物质能够通过螯合作用进入此“水水池池”。l由于周围水层和极性基团的保护，保持由于周围水层和极性基团的保护，保持了蛋白质的天然构型，不会造成失活。了蛋白质的天然构型，不会造成失活。蛋白质的溶解过程和溶解后的情况示意蛋白质的溶解过程和溶解后的情况示意于图中。于图中。12bacC增溶、乳化、润增溶、乳化、润 湿、湿、杀菌、去污、起泡和杀菌、去污、起泡和消泡等消泡等二、表面活性剂二、表面活性剂（一）表面活性剂的概念（一）表面活性剂的概念 表面张力表面张

8、力：一种使表面分子具有向内运动的趋势，一种使表面分子具有向内运动的趋势，并使表面自动收缩至最小面积的力并使表面自动收缩至最小面积的力, ,现象见图1。 表面活性：使液体表面张力下降的性质。表面活性：使液体表面张力下降的性质。 表面活性物质：能使液体表面张力下降的物质。表面活性物质：能使液体表面张力下降的物质。 表面活性剂：具有很强的表面活性表面活性剂：具有很强的表面活性、能够显著降能够显著降低液体表面张力的物质。低液体表面张力的物质。图图1 荷叶上的水珠的表面张力作用现象荷叶上的水珠的表面张力作用现象OOOOOOOOWWW（肥皂（肥皂RCOO-）（二）结构特征（二）结构特征亲油的非极亲油的非极

9、性烃链性烃链亲水的极性亲水的极性基团基团双亲性分子结构双亲性分子结构长度不长度不少于少于8个个碳原子碳原子羧酸磺酸羧酸磺酸硫酸及其硫酸及其盐或羟基盐或羟基酰胺基等酰胺基等（三）表面活性剂的分类u阴离子表面活性剂阴离子表面活性剂u阳离子表面活性剂阳离子表面活性剂u两性离子表面活性剂两性离子表面活性剂u非离子表面活性剂非离子表面活性剂1 1阴离子表面活性剂阴离子表面活性剂（1）肥皂类）肥皂类 通式（通式（RCOO）n Mn+（2）硫酸化物）硫酸化物 通式通式ROSO3M+（3）磺酸化物）磺酸化物 通式通式 RSO3M+碱金属皂：碱金属皂：O/W碱土金属皂：碱土金属皂：W/O有机胺皂：三乙醇胺皂有机

10、胺皂：三乙醇胺皂硫酸化蓖麻油、硫酸化蓖麻油、月桂醇硫酸钠、月桂醇硫酸钠、十六烷基硫酸钠等十六烷基硫酸钠等阿洛索阿洛索-OT、十二烷基、十二烷基苯磺酸钠苯磺酸钠、甘胆酸钠等、甘胆酸钠等良好的乳化能良好的乳化能力，但易被酸力，但易被酸破坏，一般供破坏，一般供外用外用乳化能力很强，乳化能力很强，较稳定。主要较稳定。主要用作外用软膏用作外用软膏的乳化剂的乳化剂渗透力强，去污力渗透力强，去污力强，为优良洗涤剂强，为优良洗涤剂2 2阳离子表面活性剂阳离子表面活性剂 3 3两性两性离子表面活性剂离子表面活性剂l通式通式RNH3 Xl主要有苯扎氯铵和苯扎主要有苯扎氯铵和苯扎溴铵（新洁尔灭）等。溴铵（新洁尔灭）

11、等。l碱性水溶液中呈阴离子表碱性水溶液中呈阴离子表面活性剂的性质，具有很好面活性剂的性质，具有很好的起泡、去污作用；的起泡、去污作用；l酸性溶液中则呈阳离子表酸性溶液中则呈阳离子表面活性剂的性质，具有很强面活性剂的性质，具有很强的杀菌能力。的杀菌能力。l天然品卵磷脂天然品卵磷脂l合成品氨基酸型与甜菜合成品氨基酸型与甜菜碱型。碱型。u脂肪酸甘油酯脂肪酸甘油酯u脂肪酸山梨坦（司盘、脂肪酸山梨坦（司盘、Span ）u聚山梨酯（吐温、聚山梨酯（吐温、Tween)u聚氧乙烯脂肪酸酯（卖泽、聚氧乙烯脂肪酸酯（卖泽、Myrij）u聚氧乙烯脂肪醇醚（苄泽、聚氧乙烯脂肪醇醚（苄泽、Brij）u聚氧乙烯聚氧乙烯-

12、聚氧丙烯共聚物（泊洛沙姆、聚氧丙烯共聚物（泊洛沙姆、Poloxamer） 商品商品 名为普流罗尼克（名为普流罗尼克（Pluronic） 4 4非离子表面活性剂非离子表面活性剂主要用作主要用作W/O型辅助乳化剂型辅助乳化剂HLB值：值：8.6 W/O型乳化剂型乳化剂HLB值：值：8增溶剂、润湿剂、增溶剂、润湿剂、 O/W型乳化剂型乳化剂HLB值较高，值较高，作增溶剂、作增溶剂、O/W型乳化剂型乳化剂Poloxamer188系系O/W型乳化剂，可型乳化剂，可用于静脉乳剂用于静脉乳剂 20表面活性剂表面活性剂 表面活性剂是由亲水憎油的极性基团和亲油憎水的非极性表面活性剂是由亲水憎油的极性基团和亲油憎

13、水的非极性基团两部分组成的两性分子，可分为阴离子表面活性剂、阳离基团两部分组成的两性分子，可分为阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂和非离子型表面活性剂，它们都可用于形成反胶子表面活性剂和非离子型表面活性剂，它们都可用于形成反胶团。常用的表面活性剂及相应的有机溶剂见表团。常用的表面活性剂及相应的有机溶剂见表21 在反胶束萃取蛋白质的研究中，用得最多的是阴在反胶束萃取蛋白质的研究中，用得最多的是阴离子表面活性剂离子表面活性剂AOT(Aerosol OT)AOT(Aerosol OT)，其化学名为丁二其化学名为丁二酸酸2 2乙基己基酯磺酸钠，结构式见图乙基己基酯磺酸钠，结构式见图22 这种表面活性剂

14、容易获得，其特点是这种表面活性剂容易获得，其特点是具有双链，具有双链，极性基团较小、形成反胶束时不需加助表极性基团较小、形成反胶束时不需加助表面活性剂，并且所形成的反胶束较大，半面活性剂，并且所形成的反胶束较大，半径为径为170170nmnm，有利于大分子蛋白质进入。有利于大分子蛋白质进入。23(1)CTAB(cetyl-methyl-ammonium bromide)溴溴化十六烷基三甲胺化十六烷基三甲胺/十六烷基三甲基胺溴十六烷基三甲基胺溴常使用的阳离子表面活性剂名称和结构如下：常使用的阳离子表面活性剂名称和结构如下：24(2)DDAB (didodecyldimethyl ammonium

15、 bromide)溴化十二烷基二甲铵溴化十二烷基二甲铵25(3) TOMAC (triomethyl-ammonium chloride)氯化三氯化三辛基甲铵辛基甲铵将阳离子表面活性将阳离子表面活性剂如剂如CTABCTAB溶于有机溶于有机溶剂形成反胶团时，溶剂形成反胶团时，与与AOTAOT不同，还需不同，还需加入一定量的助溶加入一定量的助溶剂剂( (助表面活性剂助表面活性剂) )。这是因为它们在结这是因为它们在结构上的差异造成的。构上的差异造成的。26l1.反胶团的物理化学特征反胶团的物理化学特征27临界胶团浓度临界胶团浓度(Critical Micelle Concentration CMC

16、)临界胶团浓度临界胶团浓度, ,是胶团形成时所需表面活性剂的最低是胶团形成时所需表面活性剂的最低浓度，用浓度，用CMC来表示，这是体系特性，与表面活性剂来表示，这是体系特性，与表面活性剂的化学结构、溶剂、温度和压力等因素有关。的化学结构、溶剂、温度和压力等因素有关。CMC的数值可通过测定各种物理性质的突变的数值可通过测定各种物理性质的突变( (如表面如表面张力、渗透压等张力、渗透压等) )来确定。来确定。由于实验方法不同，所得的由于实验方法不同，所得的CMC值往往难于完全一致，值往往难于完全一致，但是突变点总是落在一个很窄的浓度范围内，故用但是突变点总是落在一个很窄的浓度范围内，故用CMC范围

17、来表示更为方便。范围来表示更为方便。28lWC水水/C表表W W越大，表示反胶团的半径越大。越大，表示反胶团的半径越大。29l注入法：将含有蛋白质的水溶液直接注入到含注入法：将含有蛋白质的水溶液直接注入到含有表面活性剂的非极性有机溶剂中，然后进行有表面活性剂的非极性有机溶剂中，然后进行搅拌直到形成透明的溶液。过程快，较好的控搅拌直到形成透明的溶液。过程快，较好的控制反胶团的直径和含水量。制反胶团的直径和含水量。l相转移法：将含有蛋白质的水相与含有表面活相转移法：将含有蛋白质的水相与含有表面活性剂的有机相接触，在缓慢的搅拌一部分蛋白性剂的有机相接触，在缓慢的搅拌一部分蛋白质转入有机相。过程较慢，

18、可在有机溶剂相中质转入有机相。过程较慢，可在有机溶剂相中获得较高的蛋白质溶液。获得较高的蛋白质溶液。l溶解法：将含有反胶团的有机溶剂与蛋白质粉溶解法：将含有反胶团的有机溶剂与蛋白质粉末一起搅拌，使蛋白质进入反胶团。对非水溶末一起搅拌，使蛋白质进入反胶团。对非水溶性蛋白质可用此法。性蛋白质可用此法。3031bacC是有机相是有机相水相间的分配萃取，水相间的分配萃取，是从主体水相向溶解于有机溶是从主体水相向溶解于有机溶剂相中纳米级、均一且稳定的、剂相中纳米级、均一且稳定的、分散的反胶团微水相中的分配。分散的反胶团微水相中的分配。32bc特点：特点：萃取进入有机相的生物大分子萃取进入有机相的生物大分

19、子被表面活性分子所屏蔽，避免了与有机被表面活性分子所屏蔽，避免了与有机溶剂相直接接触而引起的变性、失活；溶剂相直接接触而引起的变性、失活；同时反胶团微水相体积最多仅占有机相同时反胶团微水相体积最多仅占有机相的几个百分点，是一个浓缩的过程。的几个百分点，是一个浓缩的过程。33反胶团的溶解作用反胶团的溶解作用 由于反胶团内存在微水池，故可溶解氨基酸、肽由于反胶团内存在微水池，故可溶解氨基酸、肽和蛋白质等生物分子，为生物分子提供易于生存的亲和蛋白质等生物分子，为生物分子提供易于生存的亲水微环境。因此，反胶团萃取可用于氨基酸、肽和蛋水微环境。因此，反胶团萃取可用于氨基酸、肽和蛋白质等生物分子的分离纯化

20、，特别是蛋白质类生物大白质等生物分子的分离纯化，特别是蛋白质类生物大分子。分子。34( (a)a)为水壳模型，蛋白质位于水池的中心，周围为水壳模型，蛋白质位于水池的中心，周围存在的水层将其与反胶团壁存在的水层将其与反胶团壁( (表面活性剂表面活性剂) )隔开；隔开；( (b)b)蛋白质分子表面存在强烈疏水区域，该疏水蛋白质分子表面存在强烈疏水区域，该疏水区域直接与有机相接触；区域直接与有机相接触；( (c)c)蛋白质吸附于反胶团内壁；蛋白质吸附于反胶团内壁；( (d)d)蛋白质的疏水区与几个反胶团的表面活性剂蛋白质的疏水区与几个反胶团的表面活性剂疏水尾发生相互作用，被几个小反胶团所疏水尾发生相

21、互作用，被几个小反胶团所“溶溶解解”。35l表面性质不同的蛋白质可能以不同的形表面性质不同的蛋白质可能以不同的形式溶解于反胶团相式溶解于反胶团相，但对于亲水性蛋白但对于亲水性蛋白质，目前普遍接受的是水壳模型。质，目前普遍接受的是水壳模型。bcda反胶团的溶解作用反胶团的溶解作用37l反胶团有哪些有用的特征可用于生物物反胶团有哪些有用的特征可用于生物物质的分离？质的分离？l将反胶团萃取技术与其他蛋白质分离技将反胶团萃取技术与其他蛋白质分离技术相比较，指出它们各自的适用场合？术相比较，指出它们各自的适用场合？ l影响反胶束萃取蛋白质的主要因素？影响反胶束萃取蛋白质的主要因素？ 38l胱氨酸是白色六

22、角形板状晶体或结晶粉胱氨酸是白色六角形板状晶体或结晶粉末，不溶于乙醇、乙醚，难溶于水。易末，不溶于乙醇、乙醚，难溶于水。易溶于酸、碱溶液，但在热碱溶液中可被溶于酸、碱溶液，但在热碱溶液中可被分解。分解。 l胱氨酸比半胱氨酸稳定，在体内转变成胱氨酸比半胱氨酸稳定，在体内转变成半胱氨酸后参与蛋白质合成和各种代谢半胱氨酸后参与蛋白质合成和各种代谢过程，有促进毛发生长和防止皮肤老化过程，有促进毛发生长和防止皮肤老化等作用。等作用。39l临床上用于治疗膀胱炎、各种秃发症、肝炎、临床上用于治疗膀胱炎、各种秃发症、肝炎、神经痛、中毒性病症、放射损伤以及各种原因神经痛、中毒性病症、放射损伤以及各种原因引起的巨

23、细胞减少症，并是治疗一些药物中毒引起的巨细胞减少症，并是治疗一些药物中毒等的特效药。在食品工业、生化及营养学研究等的特效药。在食品工业、生化及营养学研究领域也有广泛的应用。领域也有广泛的应用。l胱氨酸存在于人发、猪毛、羊毛、马毛、羽毛胱氨酸存在于人发、猪毛、羊毛、马毛、羽毛及动物角等的蛋白质中，其中人发含量最高，及动物角等的蛋白质中，其中人发含量最高，达。胱氨酸是氨基酸中最难溶于水的一种，达。胱氨酸是氨基酸中最难溶于水的一种，因此可利用这种特性，通过酸性水解，从废杂因此可利用这种特性，通过酸性水解，从废杂猪毛、人发、鸡毛、羊毛等角蛋白中，分离提猪毛、人发、鸡毛、羊毛等角蛋白中，分离提取胱氨酸。

24、取胱氨酸。 常规提取工艺常规提取工艺 上清液（回收氨基酸） 废杂毛（猪毛、人发等） 清洗 干燥废杂毛 水解 水解液 中和 胱氨酸粗品 提纯 沉淀物（粗品） 滤液（弃去） 结晶 精制 干燥 精品 41l清洗：清洗：除去废杂毛内混杂的泥沙、石块、除去废杂毛内混杂的泥沙、石块、草木、铁杂物等，用草木、铁杂物等，用6060C C左右的热水，左右的热水，加少量洗涤剂，搅拌洗涤加少量洗涤剂，搅拌洗涤4 46 6分钟，洗分钟，洗去吸附在杂毛上的油脂，然后捞出，再去吸附在杂毛上的油脂，然后捞出，再用清水冲洗干净，滤干，放在通风处晒用清水冲洗干净，滤干，放在通风处晒干或烘干备用。干或烘干备用。42l按废杂毛的量

25、，先量取按废杂毛的量，先量取2 2倍倍3030工业盐酸，加工业盐酸，加入到玻璃钢或搪瓷水解罐中，通蒸气加热到入到玻璃钢或搪瓷水解罐中，通蒸气加热到70708080，立即投入已清洗晒干的废杂毛适量，立即投入已清洗晒干的废杂毛适量，继续加热，间隙搅拌，使温度均匀。继续加热，间隙搅拌，使温度均匀。l升温到升温到100100C C时开始记温，每隔半小时记温时开始记温，每隔半小时记温1 1次，在次，在1 1小时内升温至小时内升温至110110左右左右( (即罐温即罐温) )，以后继续维持罐压千帕以后继续维持罐压千帕( (气压气压490490千帕千帕) )，水解，水解1313个小时左右个小时左右( (用玻

26、璃钢盘管加热，水解时间用玻璃钢盘管加热，水解时间可缩短为可缩短为6 67 7小时小时) )，水解期间要有回流装置，水解期间要有回流装置，保证水解酸度，使水解更完全。水解时间可从保证水解酸度，使水解更完全。水解时间可从水解罐内溶液温度达水解罐内溶液温度达100100C C时计算起。时计算起。水解：水解：43l水解完全后，停止回流水解完全后，停止回流( (回收的盐酸可重回收的盐酸可重用用) )，立即趁热过滤。这时过滤很困难，立即趁热过滤。这时过滤很困难，应先用玻璃布抽滤除去大的黑腐质，然应先用玻璃布抽滤除去大的黑腐质，然后再用双层纱布抽滤，将滤液移到中和后再用双层纱布抽滤，将滤液移到中和锅或缸中，

27、滤液用锅或缸中，滤液用1:11:1的盐酸冲洗的盐酸冲洗2 23 3次，次，冲洗液一并倒入中和锅或缸内，准备中冲洗液一并倒入中和锅或缸内，准备中和。和。 44l将过滤好的滤液趁热在搅拌下加入浓度将过滤好的滤液趁热在搅拌下加入浓度30304040氢氧化钠氢氧化钠( (工业烧碱工业烧碱) )溶液，溶液，当中和到当中和到pHpH值达时，停止加碱液，然后值达时，停止加碱液，然后改用醋酸钠饱和溶液中和到改用醋酸钠饱和溶液中和到pHpH值为左右，值为左右，停止搅拌，静置停止搅拌，静置10101212小时，用涤纶布小时，用涤纶布过滤沉淀物，甩干或吊干过滤沉淀物，甩干或吊干( (抽滤液可供回抽滤液可供回收谷氨酸

28、或制备化学酱油收谷氨酸或制备化学酱油) )，即得粗品。，即得粗品。中和时温度应保持在中和时温度应保持在5050左右，而且要左右，而且要在半小时内完成。在半小时内完成。 中和：中和：45l称取适量的胱氨酸粗品，加入粗品量称取适量的胱氨酸粗品，加入粗品量131314 14 的工业盐酸的工业盐酸( (浓度为浓度为3030) )，搅拌，搅拌3030分钟左右，分钟左右，等粗品全部溶解后，再加入活性炭粉等粗品全部溶解后，再加入活性炭粉( (按每按每100100千克粗品加千克粗品加4 45 5千克活性炭粉投料千克活性炭粉投料) )，加热到，加热到909098 98 ，在此温度下恒温搅拌，在此温度下恒温搅拌2

29、 23 3小时。小时。然后过滤脱色液然后过滤脱色液( (回收活性炭粉，再生后可重回收活性炭粉，再生后可重用用) )，滤液加热到，滤液加热到80808585，在搅拌下加入浓，在搅拌下加入浓度度3030氢氧化钠溶液，调节氢氧化钠溶液，调节pHpH值至时，停止加值至时，停止加碱液，静置，使结晶沉淀完全。虹吸上清液碱液，静置，使结晶沉淀完全。虹吸上清液( (可供回收胱氨酸和酪氨酸可供回收胱氨酸和酪氨酸) )，底部沉淀滤干后，底部沉淀滤干后可离心甩干或直接用吊包吊干，即得灰白色的可离心甩干或直接用吊包吊干，即得灰白色的提纯胱氨酸粗品。提纯胱氨酸粗品。提纯：提纯：46l称取适量胱氨酸提纯后的粗品，加入称取

30、适量胱氨酸提纯后的粗品，加入5 5倍量的倍量的1 1：1212的盐酸，加热到的盐酸，加热到4040时，加入时，加入5 5骨炭粉骨炭粉( (按按粗品量加粗品量加) )，升温到，升温到6060，保温搅拌，保温搅拌1 1小时。然小时。然后用布氏漏斗过滤，滤液再经后用布氏漏斗过滤，滤液再经3 3号重熔漏斗过号重熔漏斗过滤，滤液应无色透明，如仍带色，再进行脱色滤，滤液应无色透明，如仍带色，再进行脱色处理。处理。l将滤液移入搪瓷缸中，搅拌下加入将滤液移入搪瓷缸中，搅拌下加入1010氨水调氨水调节溶液节溶液pHpH值至，静置值至，静置5 56 6天，即有胱氨酸精品天，即有胱氨酸精品析出，过滤出结晶，用无离子

31、水洗至无氯离子，析出，过滤出结晶，用无离子水洗至无氯离子，用吊布吊干后放入搪瓷盘中在烘箱内烘干用吊布吊干后放入搪瓷盘中在烘箱内烘干( (保保持温度在持温度在60 60 左右左右) )或真空干燥，即得产品。或真空干燥，即得产品。精制、干燥精制、干燥 ：4748l(1)外观：产品为白色有光泽的六角外观：产品为白色有光泽的六角形片状结晶粉末，在水中微溶，不形片状结晶粉末，在水中微溶，不溶于酸和有机溶剂，能溶于无机酸溶于酸和有机溶剂，能溶于无机酸中。中。l(2)熔点：产品的熔点为熔点：产品的熔点为258261。49l(3)比旋光度：比旋光度：产品在产品在25的比旋光度的比旋光度应为一应为一195C一一

32、213C。将样品放在。将样品放在105恒温烘箱中干燥恒温烘箱中干燥2小时以上，然后小时以上，然后精确称样精确称样2克，加克，加1摩尔升盐酸，将其摩尔升盐酸，将其溶解成溶解成50毫升的溶液，按中国药典附录毫升的溶液，按中国药典附录所载方法测定。所载方法测定。l比旋光度计算公式：比旋光度计算公式： 25 180a aD = + 1.99（25t） L*d5051l平面偏振光通过含有某些光学活性的化合物溶平面偏振光通过含有某些光学活性的化合物溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的平面向左液时，能引起旋光现象，使偏振光的平面向左或向右旋转。旋转的度数，称为旋光度。或向右旋转。旋转的度数，称为旋光度。l药典

33、系用钠光谱的药典系用钠光谱的D线线(589.3nm)测定旋光度，测定旋光度，测定管长度为测定管长度为1dm，测定温度为，测定温度为20。 l测定旋光度时，将测定管用供试液体或溶液测定旋光度时，将测定管用供试液体或溶液（取固体供试品，按各药品项下的方法制成）（取固体供试品，按各药品项下的方法制成）冲洗数次，缓缓注入供试液体或溶液适量置于冲洗数次，缓缓注入供试液体或溶液适量置于旋光计内检测读数，即得供试液的旋光度。使旋光计内检测读数，即得供试液的旋光度。使偏振光向右旋转者（顺时针方向）为右旋，以偏振光向右旋转者（顺时针方向）为右旋，以“”符号表示；使偏振光向左旋转者符号表示；使偏振光向左旋转者(反

34、时反时针方向针方向)为左旋，以为左旋，以“”符号表示。符号表示。52l(4)干燥失重干燥失重：将样品放入将样品放入105恒温恒温箱中干燥至恒重，失重不得超过。箱中干燥至恒重，失重不得超过。l(5)澄明度澄明度：精确称取克样品，加精确称取克样品，加13盐酸溶液盐酸溶液10毫升，振荡溶解，溶液毫升，振荡溶解，溶液应无色透明或几乎透明。应无色透明或几乎透明。 5354l(6)氯化物测定：氯化物测定：精确称取样品，加精确称取样品，加1molL硝酸硝酸10mL，使之溶解，再加水，使之溶解，再加水稀释至稀释至50mL。用。用10mL移液管吸取移液管吸取10mL该溶液于一烧杯中，再加蒸馏水该溶液于一烧杯中，

35、再加蒸馏水40mL，1mol/L硝酸硝酸1mL，1molL硝酸银溶液硝酸银溶液1mL，摇匀。，摇匀。l另外取氯化物标准液另外取氯化物标准液(1mL含氯离子，按含氯离子，按上法同样处理，前者的浑浊度不应大于上法同样处理，前者的浑浊度不应大于后者，即含氯量后者，即含氯量。 55l(7)残渣测定：残渣测定：分别精确称取样品分别精确称取样品4克、克、2克各置于恒重的白磁坩锅或白金坩锅中，克各置于恒重的白磁坩锅或白金坩锅中，在在600800高温电炉中炭化，冷却后高温电炉中炭化，冷却后即可测出残渣重量即可测出残渣重量(0.001)。 56l (8)重金属检测：重金属检测：取上述取上述4g样品灼样品灼烧后的

36、残渣置于烧杯中，加烧后的残渣置于烧杯中，加12mL2molL盐酸和的盐酸和的1molL硝硝酸，在水浴上蒸干，再加酸，在水浴上蒸干，再加1 1molL稀醋酸稀醋酸2mL、蒸馏水、蒸馏水8mL，然后移，然后移入入50mL纳氏比色管中，加纳氏比色管中，加1molL硫化氢溶液硫化氢溶液10mL，加水至刻度，摇，加水至刻度，摇匀，在暗处放置匀，在暗处放置10分钟以上，与标分钟以上，与标准铅溶液比较，铅含量不应高于。准铅溶液比较，铅含量不应高于。 57l (9)铁盐检验：铁盐检验：取上述取上述2克样品灼烧克样品灼烧遗留的残渣于烧杯中，加遗留的残渣于烧杯中，加2摩尔升摩尔升盐酸盐酸12毫升、毫升、1摩尔升硝酸毫升，摩尔升硝酸毫升，在水浴中蒸干，再加在水浴中蒸干，再加12盐酸盐酸5毫升、毫升、蒸馏水蒸馏水10毫升，然后移入毫升，然后移入50毫升纳毫升纳氏比色管中，加氏比色管中，加10硫氰酸铵溶液硫氰酸铵溶液2毫升，如显色，即与同样处理后的毫升，如显色，即与同样处理后的6毫升标准液比较，不得更深毫升标准液比较，不得更深(0.001)。 58l(1