在小鼠中RIP1激酶抑制剂在防止渗透性肾病和对比度剂AKI

1、在小鼠中RIP1激酶抑制剂在防止渗透性肾病和对比度剂AKI显影剂AKI（CIAKI）的病理生理学是不完全的，由于缺乏合适的体内模型显影介质（RCM）的使用，对演示肾功能降低的理解。这里，我们考察CIAKI的体外影响，并引入小鼠缺血和再灌注损伤基（IRI）的方法，它允许感应CIAKI，按标准RCM的单次静脉内应用损伤后用于体内研究。而鼠肾小管细胞和新鲜分离的肾小管能迅速吸收RCM，质膜完整性和细胞活力仍然保留在体外和离体，这表明RCM不诱导凋亡或肾小管细胞的调控坏死。在体内，IRI-基于CIAKI模型表现出临床CIAKI的典型特征，包括RCM诱导渗透性肾病和尿素和肌酸酐的未通过抑制细胞凋亡改变来

2、增加的血清水平。肾脏形态由活体显微镜直接评估显示20分钟未受伤的小鼠和IRI预处理后相似，但不显着，反应RCM从开始起使肾小管及周围毛细血管扩张。Necrostatin-1（NEC-1），受体蛋白1（RIP1）激酶相互作用结构域的特异性抑制剂，防止渗透性肾病和CIAKI，而惰性NEC-1衍生物（NEC-1i）中或泛半胱天冬酶抑制剂（ZVAD）没有作用。此外，NEC-1能防止肾小管周围毛细血管RCM诱导扩张，显示在微血管血流动力学和CIAKI的病理生理学的调节RIP1激酶结构域无关的细胞死亡的新型作用。Necrostatin-1是一种特异性的RIP1抑制剂，抑制TNF-诱导的坏死，EC50为49

3、0 nM。生物活性产品描述Necrostatin-1是一种特异性的RIP1抑制剂，抑制TNF-诱导的坏死，EC50为490 nM。靶点RIP1 1IC50490 nM(EC50)体外研究Necrostatin-1 (1-100 M) 抑制过表达和内源性的RIP1发生自磷酸化。RIP1是初级细胞靶点，负责Necrostatin-1的抗细胞坏死活性。1 Necrostatin-1有效抑制多种类型细胞触发的坏死性细胞死亡。Necrostatin-1作为细胞坏死的小分子抑制剂, 作用于jurkat细胞，抑制RIP激酶的诱导细胞坏死，抑制TNF-诱导的细胞坏死，EC50为490 nM。2体内研究特征Ne

4、crostatin-1是抑制细胞坏死的有力工具。推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性) 激酶实验: RIP1 激酶检测RIP1 的磷酸化需要其激酶活性。FLAG标记的野生型(WT)或RIP1(K45M) 突变体失活激酶的表达结构转染到293T细胞中，在有-32PATP存在时，RIP1激酶实验在30°C下进行30分钟。样品进行SDS-PAGE，通过放射自显影可观察到RIP1带。对放射性带的相对强度进行量化，并显示比率。在激酶反应的同时，珠样本使用anti-RIP1抗体进行Western Blot分析，确保与激酶反应中等量的蛋白。细胞试验: 细胞系Ju

5、rkat, BALB/c 3T3, SV40-转化的MEF, L929浓度0.01-100 M处理时间方法细胞接种在96孔板中（白色板进行发光检测;黑色板进行荧光检测;空白板进行MTT实验）贴壁细胞按每孔5000-10000个细胞的密度接种，悬浮细胞按每孔20,000-50,000个细胞的密度接种，孔中含100 l合适的无酚红培养基。温育后，使用如下方法之一测定细胞存活率。ATP 实验中，使用购买的发光试剂盒，并使用Wallac Victor II酶标仪分析发光值。Sytox实验中,细胞与 1 M Sytox Green试剂在37°C下温育30分钟,然后进行荧光读数。随后，增加5 l

6、 20% Triton X-100溶液到每孔中，产生最大溶解，细胞37°C下温育1小时，然后进行二次读数。Triton处理前和后，计算值的比率。MTT实验，使用CellTiter 96 AQueous 非放射性细胞增殖检测试剂盒。PI排除实验中, 加入2 g/ml PI 到培养基中，立即使用FACSCalibur分析样品。PI-膜联蛋白V 实验中，使用ApoAlert Annexin V-EGFP 凋亡试剂盒。进行DioC6染色, 细胞与40 nM DiOC6 在37°C下温育30分钟, 洗涤一次，使用FACSCalibur分析。ROS分析中, 细胞与5 M Dihydro

7、ethidium在37°C下温育30分钟, 洗涤一次，使用FACSCalibur分析。不同实验动物依据体表面积的等效剂量转换表（数据来源于FDA指南）小鼠大鼠兔豚鼠仓鼠狗猴狒狒重量 (kg)0.020.151.80.40.0810312体表面积 (m2)0.0070.0250.150.050.020.50.240.6Km 系数361285201220动物A (mg/kg) = 动物B (mg/kg) × 动物B的Km系数 动物A的Km系数例如，依据体表面积折算法，将白藜芦醇用于小鼠的剂量22.4 mg/kg 换算成大鼠的剂量，需要将22.4 mg/kg 乘以小鼠的Km系数（

8、3），再除以大鼠的Km系数（6），得到白藜芦醇用于大鼠的等效剂量为11.2 mg/kg。大鼠剂量 (mg/kg) = 小鼠剂量 (22.4 mg/kg) × 小鼠的Km系数(3)= 11.2 mg/kg大鼠的Km系数(6)化学数据分子量259.33化学式C13H13N3OSCAS号4311-88-0稳定性3年 -20粉状6个月-80溶于溶剂别名N/A溶解性 (25°C) *体外DMSO 52 mg/mL (200.51 mM) 水<1 mg/mL (<1 mM) 乙醇<1 mg/mL (<1 mM) * <1 mg/ml 指产品微溶或不溶* 溶解度检测是由Selleck技术部门检测的，可能会和文献中提供的溶解度有所差异，这是由于生产工艺和批次不同产生的正常现象。Chemical Name4-Imidazolidinone, 5-(1H-indol-3-ylmethyl)-3-methyl-2-thioxo-制备储备液1 mg5 mg10 m