诱变育种流程及紫外诱变育种的详细步骤_第1页
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文档简介

1、诱变育种的一般步骤：1.首先是天然菌种的选育：调查研究及查阅充分的资料设计实验方案确定采集样品的生态环境采样确定特定的增殖条件增殖培养确定特殊的选择培养基及可能的定性或半定量快速检出法平板分离原种斜面确定发酵培养基础条件筛选初筛（ 1株 1瓶）复筛（ 1 株 35 瓶）结合初步工艺条件摸索再复筛（ 1 株 35 瓶）35 株单株纯种分离生产性能试验毒性试验菌种鉴定2.诱变菌种：出发菌株 -菌种纯化 (出发菌株性能测定)- 制备斜面孢子 - 制备单孢子悬液 (悬液进行活菌计数 )- 诱变剂处理 (存活菌数的测定并计算存活率 )- 平板分离 (测定变异率 )-挑取变异菌落并移植至斜面上-初筛 (初

2、筛数据分析，生产性状的粗测 )- 斜面传代 -复筛 (复筛数据分析，精确测定生产性状 )- 变异菌株 (菌株参数分析 )-小型或中型投产试验 -大型投产试验。诱变育种应把握的主要原则有以下几点： 1)选择简便有效的诱变剂。在选用理化因素作诱变剂时，在同样效果下，应选用最简便的因素；在同样简便的条件下，应选用最高效的因素。 2)挑选优良的出发菌株。最好采用生产上已发生自变的菌株， 选用对诱变剂敏感的菌株，选取有利于进一步研究或应用性状的菌株。 4)处理单细胞或孢子悬液。单细胞悬液应均匀而分散，孢子、芽孢等应稍加萌发。 5)选用合适的诱变剂量。 一般正变较多出现在低剂量中， 负变较多地出现在高剂量

3、中。 6)选用高效的筛选方法。紫外线诱变育种：紫外线诱变一般采用15W 紫外线杀菌灯，波长为253-265nm灯与处理物的距离为30cm，照射时间依菌种而异，一般为几秒至几十分钟。一般我们常以细胞的死亡率表示，希望照射的剂量死亡率控制在 7080%为宜。被照射的菌悬液细胞数， 细菌为 106 个/ml 左右，霉菌孢子和酵母细胞为106107 个 /ml。由于紫外线穿透力不强，要求照射液不要太深，约厚，同时要用电磁搅拌器或手工进行搅拌，使照射均匀。由于紫外线照射后有光复活效应，所以照射时和照射后的处理应在红灯下进行。具体操作步骤1将细菌培养液以3000rmin 离心 5min，倾去上清液，将菌体

4、打散加入无菌生理盐水再离心洗涤。2将菌悬液放入一已灭菌的， 装有玻璃珠的三角瓶内用手摇动，以打散菌体。将菌液倒入有定性滤纸的漏斗内过滤， 单细胞滤液装入试管内，一般处于浑浊态的细胞液含细胞数可达 108 个 ml 左右，作为待处理菌悬液。3取 24mL 制备的菌液加到直径 9cm 培养皿内，放入一无菌磁力搅拌子，然后置磁力搅拌器上、 15W 紫外线下 30cm 处。在正式照射前，应先开紫外线10min，让紫外灯预热，然后开启皿盖正式在搅拌下照射 1050s。操作均应在红灯下进行，或用黑纸包住，避免白炽光。4取未照射的制备菌液和照射菌液各进行稀释分离，计数活菌细胞数。5取照射菌液2ml 于液体培养基中 (30

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