医用生物蛋白胶项目简介.doc

1、医用生物蛋白胶项目简介 山西志成生物技术有限公司 联系：杨先生一、项目背景医用生物蛋白胶（BFG），又称纤维蛋白封闭剂、纤维蛋白粘合剂（Fibrin Adhesive）。是一种新型安全、可靠的生物止血材料，广泛运用于各种外科手术，有效起到止血、促愈合、防止粘连等作用，20世纪40年代，以纤维蛋白原粉为原料，进行了组织粘合的早期实验。70年代，随着分离、提纯技术的完善，纤维蛋白胶初步在临床进行了实验性试用。直至80年代，由奥地利Immuno公司将其商品化，在欧洲市场迅速推广。在亚洲，生物纤维蛋白胶也得到医学界人士的青睐，日本多家公司生产了此项产品。我国于80年代初由上海

2、学者研制出由人血提取的医用纤维蛋白粘合剂并进行临床应用，由于人血来源受限，形成商品化有困难。1994年，我国学者以哺乳动物血液作为原料，研制出新一代生物止血材料纤维蛋白胶。原料来源丰富，经过处理既降低了成本，排除了人体血源性疾病的感染机会，先后有广州倍绣、上海利康瑞、上海松力生物技术有限公司等国内动物血FS以医疗器械形式上市；经国内医学界试用取得良好的效果，为生物止血材料的推广应用提供了条件。本产品由主体胶、主体胶溶解液和催化剂、催化剂溶解液组成。 主胶体纤维蛋白原和凝血酶是从哺乳动物血中提纯，猪血深加工综合利用项目的一个生物高科技产品。二、技术研究1、猪血采集和检测  &

3、#160;   猪血采集应在国家定点的规模化屠宰场，并符合中华人民共和国国务院令第525号生猪屠宰管理条例的有关要求。为控制采血过程中的污染和保证血液质量，对采血环境应有一定的洁净度要求，同时应采用封闭方式采集于无菌容器中。应固定采集量（即每一容器收集多少头猪的血液）及采集时间（即每一容器的收集时间）。对于已采血的每批生猪，应出据屠宰场的宰后检疫证明；如检疫不合格需对相应批号产品进行处理（提出具体处理措施）。应对采集的混合后血液/血浆进行蛋白量、微生物指标等检测，并建议做有代表性的人畜共患病原的检测（如乙型脑炎病毒、戊型肝炎病毒、猪链球菌等）。2、主胶的制备猪血浆的预处理：

4、新鲜猪血浆于 - 20冷冻1周以上,自然解冻,绸布过滤去除絮状物,得滤液,备用。纤维蛋白原的分离: 采用冻融法从猪血中提取纤维蛋白原。确定提取条件为:将抗凝血浆在-20温度下冷冻12h,经4解冻,低温离心收集纤维蛋白原样品。,然后加 0.3%TNBP 和 1%Tween-80,24 26 6h 保温灭活病毒 , 样品中纤维蛋白原含量达82.6%,提取率达91.0%,再经分离去除残余的 TNBP及 Tween-80 而得到纯化并经病毒灭活的纤原 ,加适量保护剂澄清和除菌过滤 ,分装冰冻干燥，干热灭活。 凝血酶的分离: a.取冷冻血浆加入血浆体积 8%,12%和 16%的1 mol/L BaCl2

5、溶液,均搅拌20min,压滤,取滤饼分别用pH7.4,0.02mol/L Tris-HCl缓冲液洗涤2次,再分别用pH7.4,0.02 mol/L Tris-HCI400 mL解吸附,3 000 r/min离心20 min,取上清;向上清液中加入固体硫酸铵至 35%饱和度,静置2 h后3 000 r/min离心20 min,上清液中再加入固体硫酸铵至65%饱和度,静置4 h,3 000 r/min离心20 min,沉淀用生理盐水(10 mg/mL)溶解后流水透析过夜。用碱性碘化汞钾试液检测透析内液,待铵离子为阴性后终止透析,收集得凝血酶原溶液。b. 凝血酶原的激活 加入 CaCl2至终浓度,于

6、37激活1 h,测定凝血酶活性。c.凝血酶粗酶液的制备 按最佳激活条件(Ca2+0.05 mol/L,37,30 min) ,分别将上述制备的溶液激活,用相对分子质量截留量10 000的超滤器超滤。待超滤液中加入0.1 mol/L AgNO3溶液不出现絮状沉淀时停止超滤,收集浓缩液,测定蛋白质浓度、酶活性,计算产量。 d.凝血酶分离与纯化将c项由冷冻血浆制备的凝血酶粗酶液上样到用pH5.5,0.01 mol/L醋酸铵缓冲液平衡好的CM-Sepharose Fast Flow离子交换柱,用同样缓冲液洗脱23柱体积后,用含00.6 mol/L NaCl 的上述缓冲液进行直线梯度洗脱,收集凝血活性组

7、份即为凝血酶精品,测定蛋白质含量和活性。生产过程采用两步病毒灭活，安全可靠，经澄清和除菌过滤分装冻干制成。3、检测 因子活性测定:用含 0.1%牛纤原和 0.4%的白蛋白的 NaCl2柠檬酸盐缓冲液稀释样品 ,然后用高活性的凝血酶和高岭土悬液使溶液凝固 ,加入 5%单氯乙酸溶液来测定凝块的稳定性 ,用标准血浆代替样品 ,以后一个出现不溶凝块的稀释倍数为准 ,并定为 100%(U/ml) 。纤原与凝血酶成胶速度测定取等量溶解后的冻干人纤原和凝血酶溶液 ,在 37 充分混匀 ,记录其凝固时间 ,应在 10s内凝结。FS抗张强度测定:取溶解后的冻干人纤原和凝血酶溶液各100 l,均匀混合后喷在被剪去

8、皮肤的小白鼠背部 ,并迅速粘合皮肤 ,分别测定40 和 120min的拉力。FS弹力测定:取重溶后冻干人纤原和凝血酶溶液于玻璃上 ,涂成1cm2正方形胶块 ,待 10min用小镊子夹住凝胶块中部轻轻上提 ,测定其最大被拉伸的高度(mm) 。其他质量标准参照«中华人民共和国药典»人源纤维蛋白胶质量标准本产品经过灭菌消毒，冻干制成，不含致热源。主体胶主要含纤维蛋白原、XIII因子，其溶解液为磷酸盐缓冲液；催化剂主要含凝血酶，其溶解液为氯化钙溶液。4主要设备自动平衡离心机、不锈钢料桶、不锈钢反应罐、洗瓶分装机、制水设备、真空干燥设备等。三、临床应用医用生物蛋白胶是模拟人体自身凝血

9、反应最后阶段而起作用的一种现代生物工程产品，当各成分混合后，凝血酶将纤维蛋白原水解成纤维蛋白单体，并在 XIII因子、Ca2 的作用下聚集形成稳定的纤维蛋白多聚体。从而在外科手术中产生生物止血、封闭组织创面的作用，纤维蛋白网提供基质和间皮趋化活性物质，纤维母细胞长入，新生的毛细血管形成，肉芽组织生成，促进创伤愈合。 主要功能 ：1.封闭： 封闭组织创面，减少渗出，减少术后引流量，缩短引流时间。2.生物止血： 手术野弥漫性渗血和静脉性出血的辅助止血，尤其当常规方法（如缝合、结扎或电凝）无效或无法实施时。3.粘合作用： 充填粘合实质性脏器裂口，粘合管腔及神经的显微吻合口。4.促进创伤组织愈合：维蛋

10、白网提供基质和间皮趋化活性物质，纤维母细胞长入，新生的毛细血管形成，肉芽组织生成，促进创伤愈合。5.防止组织粘连： 封闭隔离膜性组织创面，减少渗出和炎性反应，促进膜的再生与修复，防止膜性粘连。6.缓释剂： 与抗肿瘤药、抗生素等合用，可在局部缓慢释放，维持局部药物有效浓度，延长药物作用时间。 应用范围 ：医用生物胶在普外科、妇科、心脑外科、神经外科、骨科、整形外科等领域都有应用，常规手术、各种腔镜手术以及内窥镜治疗。 安全性：医用生物蛋白胶是从经严格检疫的哺乳动物的血液中提取制成的，具有良好的组织相容性和完全的降解吸收性，可避免传播HIV、肝炎等人类血源性疾病的危险，常规局部使用，所以产品安全性

11、强。医用生物胶在止血方面与化学胶相比具有六大优势：产品绿色环保；良好的生物相溶性；不受人体正常凝血机制的影响；溶解快捷起效迅速；产品质量安全可靠；完全彻底匀速降解。纤维蛋白胶临床应用以来，由于这种材料既有止血作用，又促进了伤口愈合，是一种新型止血剂，得到了越来越多的临床医师的重视和使用。据了解，目前，国内外已有数百万例病人受益于纤维蛋白胶。医用生物蛋白胶具有卓越的快速止血、封闭创面、促进创伤愈合、防止术后膜性粘连、减小疤痕形成等功效。四、项目前景本项目建设一个拥有1000m2符合GMP标准的生产车间，预计建成后的生产规模为每年生产50万套产品。 是猪血深加工综合利用项目的一个产品，该产品为生物工程产品，利用现代生物工程技术，从猪血浆中提取具有止血、促进愈合、防止粘连等功能的相应蛋白质成份，经冷冻干燥后制成。如果可以广泛的应用，可减少中国250万人次献血；据初步统计，我国有县级以上医院2万多家，平均年手术量在4000万台左右，如果按总手术量的5%使用医用生物胶量计算，年需求量大约在200万套（生物胶由其主体部分和相关附件组成），市场销售额达8亿元，但目前市场销售量仅为20万套左右。所以