第十章巴比妥及苯并二氮杂卓类镇痛催眠药物的分析

1、CCCONONCOR1R2R3543216HH结构CCCONONC OH5C2H5C2HH巴比妥CCCONONCOH5C2HH苯巴比妥CCCONONC ONaCH2CHCH2CHCH3C3H7H司可巴比妥钠硫喷妥钠HCCCONONC SNaC2H5CH3CH2CH2CHCH3物理性质 1. 白色结晶或结晶性粉未，具有固定的熔点。 2. 游离巴比妥类药物微溶或极微溶于水，易溶于乙醇及有机溶剂；其钠盐则易溶于水，而不溶于有机溶剂。 化学性质 巴比妥类药物分子结构中都有1,3-二酰亚胺基团，能发生酮式和烯醇式的互变异构，在水溶液中可以发生二级电离。因此，本类药物的水溶液显弱酸性（pKa为7.3-8.

2、4），可与强碱形成水溶性的盐类。 1. 弱酸性CCCONONCOHR1R2HCCCONONCOR1R2HHCCCONONCOR1R2HCCCONONCOR1R2+ H+ H+pK1=8+ H+ H+pK2=12与强碱的成盐反应：CO NHCNCOOHR1R2+ N aOHCO NHCNCOONaR1R2+ H2O2. 水解反应巴比妥类药物 + NaOHNH3CONHCNCOOHR1R2+ 5NaOH+ 2Na2CO3COONaR1R2+2NH3 二银盐白色可溶性一银盐取代的巴比妥类药物，3323AgNO CONa AgNO55（1） 与银盐的反应 3、与重金属离子的反应CONCNCOCR1R2

3、ONaAg+NaHCO3NaNO3+CONHCNCOCR1R2ONa+ AgNO3+ Na2CO3NaNO3+CONCNCOCR1R2OAgAgAgNO3+CONCNCOCR1R2ONaAg（2）与铜盐的反应 巴比妥类药物 +紫色或紫色 铜吡啶试液吡啶硫喷妥钠 +绿色铜吡啶试液吡啶CR1R2COCONHNHCO水吡啶CR1R2COCONNHC OHCR1R2COCONNHCO-+H+部分离子化N+CuSO42NNCu2+SO42-CR1R2COCONNHC O-2+NNCu2+CR1R2COCONNHCOCR1R2COCONNHCOCuNN有色配位化合物有色配位化合物（3）与钴盐的反应紫堇色钴

4、盐巴比妥类药物碱性 反应条件：无水; 所用试剂均应不含水分碱性：异丙胺CO NHCONHCOR1R22+Co2+4(CH3)2CHNH2+CoR2R1CO NHCONCOR2R1NCONHCOCONHCH(CH3)2NHCH(CH3)2(CH3)2CHN+H32（4）与汞盐的反应巴比妥类药物+汞盐白色可溶于氨试液）4、 与香草醛（vanillin）的反应 棕红色香草醛巴比妥类药物浓硫酸紫色-蓝色乙醇5、 紫外吸收光谱特征H2SO4溶液溶液(0.05mol/L)pH9.9缓冲溶液缓冲溶液NaOH溶液溶液(0.1mol/L) (pH 13)巴比妥类药物的紫外吸收光谱巴比妥类药物的紫外吸收光谱Anm

5、硫喷妥的紫外吸收光谱硫喷妥的紫外吸收光谱HCl 溶液溶液 (0.1mol/L) NaOH 溶液溶液 (0.1mol/L) 巴比妥类药物的紫外吸收光谱特征和其电离的程度有关 5,5-取代的巴比妥类药物 在pH=2的酸性溶液中，因不电离，几乎无明显的紫外吸收。 在pH=10的碱性溶液中，发生一级电离于240 nm处有最大吸收。 在pH=13的强碱性溶液中，发生二级电离，最大吸收红移至255 nm处。硫代巴比妥类药物在酸性或碱性溶液中，均有较明显的紫外吸收。 6、薄层色谱行为特征 对照品对照鉴别（1）与银盐的反应；（2）铜盐反应二、鉴别试验（一）、丙二酰脲类反应（二）、特殊取代基及元素的反应1. 硫

6、元素的反应 （黑色）白色硫喷妥钠PbS PbNaOH2 司可巴比妥可使溴试液或碘试液褪色2. 不饱和烃取代基的反应 与溴试液或碘试液的反应 与KMnO4的反应可还原紫色的KMnO4为棕色的MnO2 与NaNO2H2SO4反应 苯巴比妥与甲醛H2SO4反应生成玫瑰红色 苯巴比妥与NaNO2H2SO4反应生成橙黄色橙红色 与甲醛H2SO4反应硝化反应3.芳香取代基的反应黄色苯巴比妥423SOHKNO（三）、特征熔点行为巴比妥类的钠盐酸 游离巴比妥类药物 过滤 洗涤 干燥 测熔点苯巴比妥钠的鉴别 取本品约0.5 g，加水5 ml溶解后，加稍过量稀盐酸，即析出白色结晶性沉淀，滤过；沉淀用水洗净，在10

7、5干燥后，依法测定，熔点为174-178。（四）、吸收光谱特性 红外分光光度法（一）、苯巴比妥的特殊杂质检查 酸度 乙醇溶液的澄清度 中性或碱性物质 有关物质（二）、司可巴比妥钠的特殊杂质检查 溶液的澄清度 中性或碱性物质 终点指示：电位法指示（Ag电极为指示电极，饱和甘汞电极为参比电极）；或自身指示 （一）、银量法原理 ：适当碱性溶液中，药物与银离子定量反应，可采用银量法进行本类药物及其制剂的含量测定，反应摩尔比（11）。溶剂系统：甲醇+3%无水碳酸钠四、含量测定 苯巴比妥：苯巴比妥： 取本品约0.2 g，精密称定，加甲醇40 ml使溶解，再加新制的3无水碳酸钠溶液15 m1，照电位滴定法，

8、用硝酸银滴定液（0.1 mol/L）滴定。每1 ml 硝酸银滴定液（0.1 mo1/L）相当于23.22 mg的C12H12N2O3。 测定方法与计算测定方法与计算原料药：直接滴定法 %100smTVF百分含量注意事项注意事项（1）无水碳酸钠应新鲜配制（2）AgNO3滴定液应新鲜配制（3）银电极使用前应进行处理原理：凡取代基中含有双键的巴比妥类药物，其不饱和键可与溴定量地发生加成反应，故可采用溴量法进行测定。如司可巴比妥钠及其胶囊的测定二、溴量法 I22Na2S2O32NaINa2S4O6KBrO35KBr6HCl3Br26KCl3H2O +Br2（定量过量）CO NHCNCOCHCH2CH2

9、CH3(CH2)2CHCH3ONaCO NHCNCOCHCH2CH2CH3(CH2)2CHCH3ONaBrBrBr22KI2KBrI2司可巴比妥钠： 取本品约0.1g，精密称定，置250ml碘瓶中，加水10m1，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.1mol/L）25ml，再加盐酸5m1，立即密塞并振摇1min，在暗处静置15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10m1，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml溴滴定液（0.05mo1/L）相当于13.01mg的C12H17N2NaO3。测定方法与

10、计算测定方法与计算原料药：剩余滴定法 %1000smFVVT）（百分含量注意事项（1）操作中要防止溴和碘的逸失（2）平行条件进行空白试验可减少溴和碘逸失带来的误差。1.在水醇混合溶剂中的滴定法 弱酸性 pKa7.38.4 异戊水醇溶解麝香草酚酞NaOH淡蓝色（三）、酸碱滴定法此法终点判断较困难 取本品约取本品约0.5 g0.5 g，精密称定，加乙醇，精密称定，加乙醇20 m120 m1溶解后，加麝香草溶解后，加麝香草酚酞指示液酚酞指示液6 6滴，用氢氧化钠滴定液（滴，用氢氧化钠滴定液（0.1 mo1/L0.1 mo1/L）滴定，并将滴）滴定，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每定结果用空白试验

11、校正，即得。每l mll ml氢氧化钠滴定液（氢氧化钠滴定液（0.1 0.1 mol/Lmol/L）相当于）相当于22.63 mg22.63 mg的的C C1111H H1818N N2 2O O3 3。 异戊巴比妥的含量测定 溶 剂：二甲基甲酰胺 滴定剂：甲醇钠（钾） 指示剂：麝香草酚蓝 3、 非水溶液滴定法2、在胶束水溶液中进行的滴定法 溶 剂：表面活性剂-溴化十六烷基三甲基苄胺水溶液 滴定剂：氢氧化钠滴定液 指示剂：麝香草酚肽 (四)、紫外分光光度法紫外分光光度法1. 直接紫外分光光度法 本法是将样品溶解后，根据溶液的pH值选用其相应的max处进行直接测定。单组分定量方法： 取装量差异项

12、下的内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于硫喷妥钠0.25g），置500ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，量取此溶液用0.4%NaOH溶液定量稀释制成每1ml中约含5g的溶液；另取硫喷妥对照品，精密称定，加0.4%NaOH溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含5g的溶液。照分光光度法，在304nm的波长处分别测定A，根据每支的平均装量计算。每1mg硫喷妥相当于1.091mg的C11H17N2NaO2S。 如注射用硫喷妥钠的含量测定2. 2. 经提取分离后的紫外分光光度法经提取分离后的紫外分光光度法 根据巴比妥类药物具有弱酸性，在氯仿等有机溶剂中易溶，而其钠盐在水中易溶的特点，本法可消除干扰物质

13、对巴比妥类药物测定的影响。取钠盐加水溶解，加酸酸化，用氯仿提取后再加碱反提。排除辅料或杂质的干扰。 测定方法测定方法- -取两份相等的供试溶液，分别制成两种不同的化学环取两份相等的供试溶液，分别制成两种不同的化学环境（如在其一中加酸、碱或缓冲液改变溶液的境（如在其一中加酸、碱或缓冲液改变溶液的pHpH，或在其一中，或在其一中加能与供试品发生某种化学反应的试剂），然后将两者分别稀加能与供试品发生某种化学反应的试剂），然后将两者分别稀释至同样浓度，一份置样品池中，另一份置参比池中，于适当释至同样浓度，一份置样品池中，另一份置参比池中，于适当波长处，测其吸收度的差值（波长处，测其吸收度的差值（ A

14、A值）。值）。3. 差示分光光度法（A法）ClAAAAAAAAAyxyxzyzx)( )()(参比样品 供试品在两种不同的化学环境中分别以供试品在两种不同的化学环境中分别以x x、y y 表示，干扰物表示，干扰物用用 z z 表示表示3. 定量依据CA 即，吸收度差值（即，吸收度差值（ A A）仅与待测组分的浓度有关，而与干扰）仅与待测组分的浓度有关，而与干扰组分无关，即干扰组分的干扰被消除。组分无关，即干扰组分的干扰被消除。 可用对照法或标准曲线法定量 保留了通常的分光光度法简易快速、直接读数的优点，又无需事先分离，并能消除干扰。特点应用（1）于波长240 nm处，测定pH10和pH2两种溶

15、液的吸收度之差（2）于波长260 nm处，测定pH10和强碱溶液的吸收度之差差示分光光度法测定血清苯巴比妥浓度苯巴比妥紫外吸收光谱和差示光谱 .PB 碱液(pH 13)的吸收光谱 .PB 碱液(pH 10)吸收光谱 .差示光谱a. PB 碱液(pH 10)的吸收光谱b. PB 酸液(pH 2)吸收光谱c. 差示光谱样品制备：各精取空白血清0 .1 ml 于离心管，分别加入不同浓度的苯巴比妥标准溶液使血清浓度分别为5 .0、10 .0、20 .0、40 .0、60 .0、100 .0、140 .0 g ml-1 ，混匀。每份用二氯甲烷萃取两次。向萃取液中加入0 .45 molL-1氢氧化钠溶液4

16、 ml，混匀，离心，抽取氢氧化钠层供测定。再取血清0.1mL置10mL具塞试管中，氯仿同法萃取，萃取液中加入NH4Cl溶液为参比，在261nm处测吸收度；A=A1-A2，以浓度为横坐标，A为纵坐标绘制标准曲线 HPLC法同时测定人血清中苯巴比妥、苯妥英和卡马西平的浓度色谱条件：色谱柱 AgilentZORBAX SB- C18柱( 250 4.6mm ,5m) , 流动相为甲醇水乙腈(454510 ） 流速1.0ml/min, 柱温30, 检测波长254nm。血样处理：取内标溶液100L，60水浴氮气吹干，加200L待测血清, 加提取液（氯仿：乙酸乙醋=50：50）2ml, 旋涡混合5min,

17、 以4000转/分离心10min, 用吸管吸取上层水层, 弃去。用移液管移取有机相置带盖尖底塑料离心管中, 于60水浴中氮气吹干, 用流动相200L溶解, 取20L进样测定方法验证：标准曲线与线性、精密度（RSD 3%) 、方法回收率、提取回收率（大于87%）、稳定性等均符合中国药典的要求474849关键：关键：石英纤维上吸附剂石英纤维上吸附剂原则：原则：目标化合物是非极性时选目标化合物是非极性时选择非极性涂层；目标化合物是极择非极性涂层；目标化合物是极性时选择极性涂层。性时选择极性涂层。NN12345671,4-苯并二氮杂卓89药物结构：NNNCH3OCl氯氮卓HNNClH3CO地西泮NNO

18、2NOH硝西泮硝西泮NNNNClH3C阿普唑仑阿普唑仑 1. 苯并二氮杂卓母核 弱碱性 2. 结构中的环一般比较稳定，但在酸性溶液中可水解，形成相应的二苯甲酮衍生物。 3.不同pH条件下离子状态不同，UV不同 1. 1. 沉淀反应沉淀反应 氯氮卓氯氮卓 橙红色橙红色沉淀沉淀 阿普唑仑阿普唑仑 盐酸氟西泮盐酸氟西泮 KBiIKBiI4 4 也生成也生成橙红色橙红色沉淀沉淀 氯硝西泮氯硝西泮 放置后，沉淀颜色变深，放置后，沉淀颜色变深， 因此可以相互区别。因此可以相互区别。二、鉴别试验阿普唑仑阿普唑仑 + + 遇硅钨酸遇硅钨酸 白色沉淀，药典中用于鉴别。白色沉淀，药典中用于鉴别。 ( (一一) )化学鉴别试验化学鉴别试验XXC氧瓶燃烧法破坏 地西泮地西泮 黄绿色黄绿色 黄色黄色 氯氮卓氯氮卓 黄色黄色 紫色紫色 艾司唑仑艾司唑仑 + H+ H2 2S