脂质体的制备方法

1、关于脂质体的制备关于脂质体的制备方法方法第一页，共102页幻灯片本节要求本节要求 1. 1. 脂质体的基本概念脂质体的基本概念 2. 2. 脂质体的组成与结构、与胶团的区别脂质体的组成与结构、与胶团的区别 3 3 脂质体的剂型特点和体内作用特点脂质体的剂型特点和体内作用特点 4 4 脂质体的制备方法、质量标准脂质体的制备方法、质量标准第二页，共102页幻灯片Main Contents 脂质体脂质体 脂质体的应用概况脂质体的应用概况 脂质体的组成和结构特点脂质体的组成和结构特点 脂质体的剂型特点脂质体的剂型特点 第三页，共102页幻灯片Microparticles drug delievey s

2、ystems第四页，共102页幻灯片 Macromolecular conjugates 第五页，共102页幻灯片 脂质体脂质体 脂质体（脂质体（liposomesliposomes）是将药物）是将药物 包封于类脂质双分子层内形成的微型泡囊。包封于类脂质双分子层内形成的微型泡囊。 第六页，共102页幻灯片 脂质体的应用概况脂质体的应用概况 19711971年英国莱门等人开始将脂质体用于药物载体。年英国莱门等人开始将脂质体用于药物载体。 我国自我国自8080年代开始进行脂质体的研究工作年代开始进行脂质体的研究工作 第七页，共102页幻灯片抗癌药物脂质体抗癌药物脂质体 20002000年，世界脂质

3、体产品销售额为年，世界脂质体产品销售额为1212亿美元。预测至亿美元。预测至20052005年将达年将达3333亿美元，增长率为亿美元，增长率为175%175%。 国外已上市的脂质体药物品种有两性霉素、多柔比星国外已上市的脂质体药物品种有两性霉素、多柔比星和柔红霉素，均为抗癌药物。抗癌药物脂质体是脂质和柔红霉素，均为抗癌药物。抗癌药物脂质体是脂质体最重要的应用。目前还有约体最重要的应用。目前还有约3030种脂质体抗癌药物正种脂质体抗癌药物正在临床试验或等待批准上市。在临床试验或等待批准上市。第八页，共102页幻灯片脂质体抗癌药物产品及研究进展情况脂质体抗癌药物产品及研究进展情况第九页，共102

4、页幻灯片 对脂质体来说，将对脂质体来说，将靶向因子脂质连接物靶向因子脂质连接物插入含插入含药脂质体的外层脂质分子层中，是一种操作性药脂质体的外层脂质分子层中，是一种操作性强的有效的靶向因子连接手段。强的有效的靶向因子连接手段。脂质体在主动靶向制剂中脂质体在主动靶向制剂中的应用的应用第十页，共102页幻灯片Diagram of synthesize reaction between WGA and PE第十一页，共102页幻灯片Transmission electron photomicrograms of insulin liposomesaconventional liposomes, bW

5、GA modified liposomes 第十二页，共102页幻灯片脂质体在基因治疗中的应用脂质体在基因治疗中的应用 19871987年年FelgnerFelgner等率先用脂质体作为基因转移载体。等率先用脂质体作为基因转移载体。 阳离子脂质体是应用最多的非病毒基因载体阳离子脂质体是应用最多的非病毒基因载体 。它。它们一般由带正电荷的脂类与中性脂类按一定的摩尔们一般由带正电荷的脂类与中性脂类按一定的摩尔比组成。比组成。 阳离子脂质体并不是将阳离子脂质体并不是将 DNA DNA 包裹在其脂质双分子层包裹在其脂质双分子层中中 , , 而是若干阳离子脂质囊泡将而是若干阳离子脂质囊泡将 DNA DN

6、A 链夹在其中链夹在其中 , , 形成片层状结构。形成片层状结构。 第十三页，共102页幻灯片脂质体基因转移示意图脂质体基因转移示意图第十四页，共102页幻灯片 脂质体的组成和结构特点脂质体的组成和结构特点 一一 脂质体的组成脂质体的组成 脂质体是由磷脂、胆固醇等为膜材包合而成。脂质体是由磷脂、胆固醇等为膜材包合而成。这两种成分是形成脂质体双分子层的基础物质，这两种成分是形成脂质体双分子层的基础物质，具有良好的生物相容性。具有良好的生物相容性。1 1磷脂类磷脂类 磷脂类包括卵磷脂、脑磷脂、大豆磷脂及合成磷磷脂类包括卵磷脂、脑磷脂、大豆磷脂及合成磷脂等都可以作为脂质体的双分子层物质基础。脂等都可

7、以作为脂质体的双分子层物质基础。2胆固醇胆固醇 胆固醇与磷脂共同构成脂质体基础物质。胆固醇与磷脂共同构成脂质体基础物质。第十五页，共102页幻灯片磷脂结构通式磷脂结构通式 式中：式中：R1、R2 是疏水链，是疏水链，R由由C12C18，可为饱和烃链或不可为饱和烃链或不饱和烃链；饱和烃链；X为亲水头，为亲水头，X不同，则磷脂命名不同不同，则磷脂命名不同第十六页，共102页幻灯片第十七页，共102页幻灯片第十八页，共102页幻灯片 天然磷脂：天然磷脂： 胆碱胆碱+磷脂酸磷脂酸磷脂酰胆碱磷脂酰胆碱(PC)， 即卵磷脂即卵磷脂 乙醇胺乙醇胺+磷脂酸磷脂酸磷脂酰乙醇胺磷脂酰乙醇胺 (PE)，即脑磷脂，即

8、脑磷脂 丝氨酸丝氨酸+磷脂酸磷脂酸磷脂酰丝氨酸磷脂酰丝氨酸 (PS) 合成磷脂：合成磷脂：二棕榈酰二棕榈酰-DL-磷脂酰胆碱（磷脂酰胆碱（DPPC）二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱（二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱（DMPC）等。等。第十九页，共102页幻灯片胆固醇结构胆固醇结构第二十页，共102页幻灯片 磷脂和胆固醇分子排列示意图磷脂和胆固醇分子排列示意图第二十一页，共102页幻灯片磷脂和胆固醇分子排列磷脂和胆固醇分子排列 把类脂质的醇溶液倒入水面时，醇很快地溶解于水把类脂质的醇溶液倒入水面时，醇很快地溶解于水 而类脂分子则排列在空气一水的界面上而类脂分子则排列在空气一水的界面上 极性部分在水里，亲油的非极性部分则

9、伸向空气中极性部分在水里，亲油的非极性部分则伸向空气中当极性类脂分子被水完全包围时当极性类脂分子被水完全包围时极性基团面向两侧的水相，而非极性的烃链彼此极性基团面向两侧的水相，而非极性的烃链彼此面对面缔合成面对面缔合成双分子层双分子层第二十二页，共102页幻灯片脂质体双分子层脂质体双分子层第二十三页，共102页幻灯片脂质体形成示意图脂质体形成示意图第二十四页，共102页幻灯片 图 9 磷脂在水相中的 3 种结构 第二十五页，共102页幻灯片 脂质体与其包封的药物脂质体与其包封的药物第二十六页，共102页幻灯片 脂质体半球剖面图脂质体半球剖面图第二十七页，共102页幻灯片结构特点结构特点 脂质体

10、结构与由表面活性剂构成的胶团不同，后者脂质体结构与由表面活性剂构成的胶团不同，后者是由单分子层组成，脂质体由双分子层组成。是由单分子层组成，脂质体由双分子层组成。 micelle liposomes bilayer micelle liposomes bilayer第二十八页，共102页幻灯片胶团与脂质体结构胶团与脂质体结构LiposomesMicelles第二十九页，共102页幻灯片脂质体与胶团区别脂质体与胶团区别 脂质体脂质体 胶团胶团组成组成磷脂和胆固醇磷脂和胆固醇表面活性剂表面活性剂结构结构双分子层双分子层单分子层单分子层中心区域中心区域水相，可容纳水相，可容纳亲水性药物亲水性药物疏水

11、区，可容纳疏水区，可容纳疏水性药物疏水性药物第三十页，共102页幻灯片 二二 脂质体的类型脂质体的类型 单室脂质体（单室脂质体（ SUVs ）大单室脂质体（大单室脂质体（LUVs）多室脂质体多室脂质体(MLVs)大多孔脂质体大多孔脂质体(MVVs)按结构按结构脂质体脂质体第三十一页，共102页幻灯片单室脂质体单室脂质体( unilamellar vesicles, ULV) 球径0.020.08m为小单室脂质体(single unilamellar vesicles, SUV)， 0.11m为大单室脂质体(large unilamellar vesicles, LUV) ， 水溶性药物的溶液只

12、被一层类脂质双分子层所包封，脂溶性药物则分散于双分子层中。 凡经超声波分散的脂质体悬液，绝大部分为单室脂质体。第三十二页，共102页幻灯片多室脂质体多室脂质体(multilamellar vesicles, MLV) 球径 15m， 有几层脂质双分子层将包含的药物 (水溶性药物)的水膜隔开，形成不均匀的聚合体， 脂溶性药物则分散于几层分子层中。 第三十三页，共102页幻灯片大多孔脂质体大多孔脂质体(Multivesicular vesicles, MVV) 球径约0.130.06m，单层状， 比单室质体可多包封10倍的药物。第三十四页，共102页幻灯片脂质体分类脂质体分类 按结构按结构第三十五

13、页，共102页幻灯片 单室和多室脂质体示意图单室和多室脂质体示意图第三十六页，共102页幻灯片脂质体电镜照片脂质体电镜照片第三十七页，共102页幻灯片纳米脂质体呈蓝色乳光纳米脂质体呈蓝色乳光 第三十八页，共102页幻灯片 二二 脂质体的类型脂质体的类型按性能按性能热敏脂质体热敏脂质体pH敏感脂质体敏感脂质体超声波敏感脂质体超声波敏感脂质体光敏脂质体光敏脂质体磁性脂质体磁性脂质体特殊性能脂质体特殊性能脂质体脂质体脂质体一般脂质体一般脂质体SUVs LUVs MLVs MVVs第三十九页，共102页幻灯片二二 脂质体的类型脂质体的类型 脂质体脂质体按荷电性按荷电性中性脂质体中性脂质体负电性脂质体负

14、电性脂质体正电性脂质体正电性脂质体第四十页，共102页幻灯片三三 脂质体的理化性质脂质体的理化性质 （一）相变温度（一）相变温度 脂质体膜的性质与介质温度关系密切。当温度升高时，脂质体膜的性质与介质温度关系密切。当温度升高时，磷脂分子中酰基侧链从磷脂分子中酰基侧链从有序排列变成无序排列有序排列变成无序排列，从而引起，从而引起膜性质的变化：膜性质的变化： 由胶晶态变成液晶态，膜的横切面增加，双分子层厚度减由胶晶态变成液晶态，膜的横切面增加，双分子层厚度减少，膜流动性增加，少，膜流动性增加， 发生这种转变时的温度称为相变温度。发生这种转变时的温度称为相变温度。 每种磷脂有其特有的相变温度。每种磷脂

15、有其特有的相变温度。第四十一页，共102页幻灯片三三 脂质体的理化性质脂质体的理化性质 膜的流动性是脂质体的重要性质，流动性与药物膜的流动性是脂质体的重要性质，流动性与药物释放密切相关。释放密切相关。 胆固醇被称为膜流动性调节剂，因为低于相变温胆固醇被称为膜流动性调节剂，因为低于相变温度时，胆固醇的存在增加了膜的无序性，增加膜度时，胆固醇的存在增加了膜的无序性，增加膜的流动性；的流动性； 相变温度以上时，胆固醇减少膜酰基侧链的无序相变温度以上时，胆固醇减少膜酰基侧链的无序性，减少膜的流动性。性，减少膜的流动性。第四十二页，共102页幻灯片 （二）脂质体的荷电性（二）脂质体的荷电性 荷电磷脂制备

16、的脂质体荷电。荷电磷脂制备的脂质体荷电。 含磷脂酸（含磷脂酸（PA）和磷脂酰丝氨酸（和磷脂酰丝氨酸（PS）的脂质体荷负电，的脂质体荷负电， 含碱基（胺基）磷脂的脂质体荷正电，含碱基（胺基）磷脂的脂质体荷正电， 不含离子的脂质体电中性。不含离子的脂质体电中性。按荷电性按荷电性分类？分类？第四十三页，共102页幻灯片 （二）脂质体的荷电性（二）脂质体的荷电性 阳离子脂质体阳离子脂质体作为药物的载体比传统脂质体有利，作为药物的载体比传统脂质体有利， 它与带负电的细胞表面有很强的亲合作用，它与带负电的细胞表面有很强的亲合作用， 有利于药物的被吸收。有利于药物的被吸收。 阳离子脂质体是应用最多的非病毒基

17、因载体阳离子脂质体是应用最多的非病毒基因载体 第四十四页，共102页幻灯片 （二）脂质体的荷电性（二）脂质体的荷电性 某些阳离子脂质体能专一性靶向肺等器官的内皮细胞。某些阳离子脂质体能专一性靶向肺等器官的内皮细胞。 药物和阳离子脂质体相互作用时，不仅同样可包埋于脂药物和阳离子脂质体相互作用时，不仅同样可包埋于脂质体的囊泡内，质体的囊泡内， 此外也可由于阳离子脂质体表面的正电荷与带负电此外也可由于阳离子脂质体表面的正电荷与带负电荷的药物分子产生静电吸附作用，荷的药物分子产生静电吸附作用， 多肽类药物分子中的疏水结构可插入脂质体的脂双层、多肽类药物分子中的疏水结构可插入脂质体的脂双层、形成稳定结构

18、。形成稳定结构。第四十五页，共102页幻灯片 脂质体的剂型特点脂质体的剂型特点1 1 脂质体具有生物相容性脂质体具有生物相容性第四十六页，共102页幻灯片 脂质体的剂型特点脂质体的剂型特点 2. 制备工艺简单，适宜工业大生产。制备工艺简单，适宜工业大生产。第四十七页，共102页幻灯片 脂质体的剂型特点脂质体的剂型特点3 3 同时装载水溶性和脂溶性药物同时装载水溶性和脂溶性药物第四十八页，共102页幻灯片 脂质体的剂型特点脂质体的剂型特点 4 药物以非共价键结合的方式被包裹，有利于药物释药物以非共价键结合的方式被包裹，有利于药物释放。放。 5 脂质体的物理化学稳定性较差。脂质体的物理化学稳定性较

19、差。第四十九页，共102页幻灯片 脂质体的体内作用特点脂质体的体内作用特点 1. 体内分布靶向性被动靶向主动靶向第五十页，共102页幻灯片 脂质体易于连接靶向因子脂质体易于连接靶向因子脂质体主动靶向性脂质体主动靶向性第五十一页，共102页幻灯片2药物作用延效性 许多药物在体内由于被迅速代谢或排泄而使其体内许多药物在体内由于被迅速代谢或排泄而使其体内作用时间短。作用时间短。 将药物包封成脂质体，可减少肾排泄和代谢而延将药物包封成脂质体，可减少肾排泄和代谢而延长药物在血液中的滞留时间，使药物在体内缓慢长药物在血液中的滞留时间，使药物在体内缓慢释放，从而延长药物的作用时间。释放，从而延长药物的作用时

20、间。 第五十二页，共102页幻灯片3. 生物相容性 因脂质体是类似生物膜结构的泡囊，具有很好的细胞亲和因脂质体是类似生物膜结构的泡囊，具有很好的细胞亲和性与组织相容性。性与组织相容性。 它可长时间吸附于靶细胞周围，使药物能充分向靶细胞渗它可长时间吸附于靶细胞周围，使药物能充分向靶细胞渗透。透。 脂质体也可通过融合进入细胞内脂质体也可通过融合进入细胞内 第五十三页，共102页幻灯片4降低药物毒性 药物被脂质体包封后，主要被单核药物被脂质体包封后，主要被单核巨噬细胞系巨噬细胞系统的巨噬细胞所吞噬而摄取，且在肝、脾和骨髓统的巨噬细胞所吞噬而摄取，且在肝、脾和骨髓等单核等单核- -巨噬细胞较丰富的器官

21、中浓集，而使药物巨噬细胞较丰富的器官中浓集，而使药物在心、肾中累积量比游离药物低得多。在心、肾中累积量比游离药物低得多。第五十四页，共102页幻灯片4降低药物毒性 如果将对心、肾有毒性的药物或对正常细胞有毒性如果将对心、肾有毒性的药物或对正常细胞有毒性的抗癌药物包封成脂质体，就可明显降低药物的毒的抗癌药物包封成脂质体，就可明显降低药物的毒性。性。 两性霉素两性霉素B B对多数哺乳动物的毒性较大，制成两性对多数哺乳动物的毒性较大，制成两性霉素霉素B B脂质体，可使其毒性大大降低而不影响抗脂质体，可使其毒性大大降低而不影响抗真菌活性。真菌活性。第五十五页，共102页幻灯片5提高药物稳定性 一些不稳

22、定的药物被脂质体包封后可受到脂质体双层膜一些不稳定的药物被脂质体包封后可受到脂质体双层膜的保护。的保护。 如青霉素如青霉素G G或或V V的钾盐是对酸不稳定的抗生素，口服易被胃的钾盐是对酸不稳定的抗生素，口服易被胃酸破坏，制成脂质体则可减少胃酸对其的破坏，提高口服酸破坏，制成脂质体则可减少胃酸对其的破坏，提高口服的吸收效果。的吸收效果。 第五十六页，共102页幻灯片 脂质体的制备技术脂质体的制备技术 注入法注入法 薄膜分散法薄膜分散法 超声波分散法超声波分散法 逆相蒸发法逆相蒸发法 冷冻干燥法冷冻干燥法第五十七页，共102页幻灯片1注入法注入法 将磷脂与胆固醇等类脂质及脂溶性药物其溶于有机溶将

23、磷脂与胆固醇等类脂质及脂溶性药物其溶于有机溶剂中（一般多采用乙醚），剂中（一般多采用乙醚）， 然后将此药液经注射器缓缓注入加热至然后将此药液经注射器缓缓注入加热至50（并用磁力（并用磁力搅拌）的磷酸盐缓冲液（或含有水溶性药物）中，搅拌）的磷酸盐缓冲液（或含有水溶性药物）中， 加完后，不断搅拌至乙醚除尽为止，加完后，不断搅拌至乙醚除尽为止， 即制得大多孔脂质体，其粒径较大，不适宜静脉注射。即制得大多孔脂质体，其粒径较大，不适宜静脉注射。 再将脂质体混悬液通过高压乳匀机二次，则所得的成再将脂质体混悬液通过高压乳匀机二次，则所得的成品。品。第五十八页，共102页幻灯片 将磷脂，胆固醇等类脂质及脂溶性

24、药物溶于氯将磷脂，胆固醇等类脂质及脂溶性药物溶于氯仿（或其他有机溶剂中）然后将氯仿溶液在一仿（或其他有机溶剂中）然后将氯仿溶液在一玻璃瓶中旋转蒸发，在瓶内壁上形成一薄膜；玻璃瓶中旋转蒸发，在瓶内壁上形成一薄膜； 将水溶性药物溶于磷酸盐缓冲液中，加入烧瓶中将水溶性药物溶于磷酸盐缓冲液中，加入烧瓶中不断搅拌，即得脂质体。不断搅拌，即得脂质体。 2薄膜分散法薄膜分散法第五十九页，共102页幻灯片2薄膜分散法薄膜分散法 1 多用于脂溶性药物脂质体的制备多用于脂溶性药物脂质体的制备 2 制备方法简单，脂溶性药物包封率较高制备方法简单，脂溶性药物包封率较高 3 多室脂质体，粒径较大，若需减小粒径，多室脂质

25、体，粒径较大，若需减小粒径， 需经超声或高压乳匀处理需经超声或高压乳匀处理第六十页，共102页幻灯片 将水溶性药物溶于磷酸盐缓冲液将水溶性药物溶于磷酸盐缓冲液 磷脂，胆固醇与脂溶性药物共溶于有机溶剂的溶液，磷脂，胆固醇与脂溶性药物共溶于有机溶剂的溶液， 混合，搅拌，蒸发除去有机溶剂混合，搅拌，蒸发除去有机溶剂 残液以超声波处理，然后分离出脂质体再混悬于磷酸盐缓残液以超声波处理，然后分离出脂质体再混悬于磷酸盐缓冲液中，制成脂质体的混悬型注射剂。冲液中，制成脂质体的混悬型注射剂。 经超声波处理大多为单室脂质体经超声波处理大多为单室脂质体3超声波分散法超声波分散法第六十一页，共102页幻灯片4逆相蒸

26、发法逆相蒸发法 将水溶性药物溶于磷酸盐缓冲液将水溶性药物溶于磷酸盐缓冲液 磷脂，胆固醇与脂溶性药物共溶于有机溶剂的溶液，磷脂，胆固醇与脂溶性药物共溶于有机溶剂的溶液， 混合，超声处理直至形成稳定的混合，超声处理直至形成稳定的W/O乳剂乳剂 减压蒸发除去有机溶剂减压蒸发除去有机溶剂 达到胶态后，加入磷酸盐缓冲液，旋转使器壁上凝胶脱落，达到胶态后，加入磷酸盐缓冲液，旋转使器壁上凝胶脱落，继续减压蒸发除去有机溶剂继续减压蒸发除去有机溶剂 脂质体水性混悬液脂质体水性混悬液第六十二页，共102页幻灯片4逆相蒸发法逆相蒸发法磷脂磷脂胆固醇胆固醇脂溶性药物脂溶性药物有机溶剂有机溶剂水溶性药物水溶性药物磷酸盐

27、缓冲液磷酸盐缓冲液混合混合第六十三页，共102页幻灯片4逆相蒸发法逆相蒸发法W/O乳剂乳剂第六十四页，共102页幻灯片4逆相蒸发法逆相蒸发法W/O乳剂乳剂有机溶剂有机溶剂第六十五页，共102页幻灯片4逆相蒸发法逆相蒸发法凝胶凝胶磷酸盐磷酸盐缓冲液缓冲液有机溶剂有机溶剂第六十六页，共102页幻灯片4逆相蒸发法逆相蒸发法Liposomes第六十七页，共102页幻灯片4逆相蒸发法逆相蒸发法 本法特点是包封的药物量大，本法特点是包封的药物量大， 体积包封率可大于超声波分散法体积包封率可大于超声波分散法3030倍，倍， 适合于包封水溶性药物及大分子生物活性物质如各种抗生适合于包封水溶性药物及大分子生物活

28、性物质如各种抗生素、胰岛素、免疫球蛋白、碱性磷脂酶、核酸等素、胰岛素、免疫球蛋白、碱性磷脂酶、核酸等。 第六十八页，共102页幻灯片5冷冻干燥法冷冻干燥法 脂质体亦可用冷冻干燥法制备，对遇热不稳定的药脂质体亦可用冷冻干燥法制备，对遇热不稳定的药物尤为适宜。先按上述方法制成脂质体悬液后分装物尤为适宜。先按上述方法制成脂质体悬液后分装于小瓶中，冷冻干燥制成冻干燥制剂，惟全部操作于小瓶中，冷冻干燥制成冻干燥制剂，惟全部操作应在无条件菌条件下进行。应在无条件菌条件下进行。第六十九页，共102页幻灯片5冷冻干燥法冷冻干燥法 Payne用冷冻干燥法制备前体脂质体，它为一干燥且具有良用冷冻干燥法制备前体脂质

29、体，它为一干燥且具有良好流动性的颗粒，一旦加水水合，即可分散成等胀的多层好流动性的颗粒，一旦加水水合，即可分散成等胀的多层脂质体混悬液，适用于静脉给药或用于其它给药途径。脂质体混悬液，适用于静脉给药或用于其它给药途径。 另一方法为将脂质吸附于极细的水溶性载体，如粉末氯化另一方法为将脂质吸附于极细的水溶性载体，如粉末氯化钠、山梨醇或其它的聚合糖类，即可形成高度分散的前体钠、山梨醇或其它的聚合糖类，即可形成高度分散的前体脂质体。与水接触时，脂质溶胀而载体迅速溶解，脂质在脂质体。与水接触时，脂质溶胀而载体迅速溶解，脂质在水相中形成脂质体。水相中形成脂质体。第七十页，共102页幻灯片 脂质体的质量评价

30、脂质体的质量评价 1 大小与形态观察大小与形态观察 脂质体的粒径对其性质影响很大，因而测定粒径非常脂质体的粒径对其性质影响很大，因而测定粒径非常重要。常用方法包括：重要。常用方法包括： 电镜法：电镜法： 热力学光散射法：热力学光散射法：Zetasizer 3000SH激光测粒仪激光测粒仪（Malvern Instruments Ltd）第七十一页，共102页幻灯片 2 主药含量测定和释放度测定主药含量测定和释放度测定 透析管法和离心法透析管法和离心法等可用来测定释放度。等可用来测定释放度。 3 包封率测定包封率测定 脂质体包封率的测定方法很多，有离心法、透析法、脂质体包封率的测定方法很多，有离

31、心法、透析法、凝胶柱层析法、导数光谱法等。其中凝胶柱层析法，凝胶柱层析法、导数光谱法等。其中凝胶柱层析法，具有分子筛作用，能使混合物依据分子大小不同而分具有分子筛作用，能使混合物依据分子大小不同而分离，广泛用于脂质体的分离及包封率的测定。离，广泛用于脂质体的分离及包封率的测定。第七十二页，共102页幻灯片凝胶柱层析法凝胶柱层析法 用于分离脂质体时，脂质体粒子将首先流出，随后游离用于分离脂质体时，脂质体粒子将首先流出，随后游离药物也会被洗脱下来，药物也会被洗脱下来， 因此，游离药物在凝胶柱上保留时间越长，流出越慢，越因此，游离药物在凝胶柱上保留时间越长，流出越慢，越有利于与脂质体粒子的分离。有利

32、于与脂质体粒子的分离。第七十三页，共102页幻灯片 三种凝胶流出曲线图三种凝胶流出曲线图 (n=3 )第七十四页，共102页幻灯片 游离药物在游离药物在Sephadex G-50（100300）柱上柱上的保留时间较长，从第六流份开始大量流出，而在的保留时间较长，从第六流份开始大量流出，而在Sephadex G-50（50100）和和Sephadex LH-20上均从第三流份开始大量流出。上均从第三流份开始大量流出。 经三种凝胶的洗脱曲线测定，可初步选定用经三种凝胶的洗脱曲线测定，可初步选定用Sephadex G-50（100300）测定包封率，洗脱测定包封率，洗脱体积可初步定为体积可初步定为1

33、0ml。第七十五页，共102页幻灯片包封率计算：包封率计算：100%WWWQ100%WW%Q总游总W总包w或重量包封率重量包封率Qw 是指包入脂质体内的药物量与投料量的重量百是指包入脂质体内的药物量与投料量的重量百分比。分比。 式中式中W总总、W包包和和W游游分别表示投料量、包封于脂质体的分别表示投料量、包封于脂质体的药量及未包入脂质体的药量。药量及未包入脂质体的药量。 第七十六页，共102页幻灯片2) 体积包封率体积包封率Qv100%VVW总类v是指制剂中某类粒子体积是指制剂中某类粒子体积V类类与总体粒子与总体粒子总总体积百分比，体积百分比，式中式中V总总和和V类类分别为脂质体制剂中总体粒子

34、的体积和某类粒分别为脂质体制剂中总体粒子的体积和某类粒子的体积。子的体积。Qv测定方法有凝胶过滤法和显微镜法等。测定方法有凝胶过滤法和显微镜法等。 第七十七页，共102页幻灯片3) 药脂包封比（药脂包封比（Ew）类脂脂W类脂游总W或WW%E100%WWW%EEw是指一定重量的类脂（包括是指一定重量的类脂（包括PC、CH等）所包封药物重量的百等）所包封药物重量的百分比，分比，式中式中W类脂类脂处方类脂总量处方类脂总量W包包包封药物重量。包封药物重量。第七十八页，共102页幻灯片4 渗漏率测定渗漏率测定100%WWWQ%100%WWW%Q包贮包包始游总游渗或渗漏率表示脂质体贮存期间包封率的变化情况

35、，定义为贮渗漏率表示脂质体贮存期间包封率的变化情况，定义为贮存期包封量的减少与刚制备脂质体的包封量之比存期包封量的减少与刚制备脂质体的包封量之比式中式中Q渗渗渗漏率；渗漏率；W总游总游定期测得游离药物量；定期测得游离药物量；W始游始游制备当时测得游离药物量；制备当时测得游离药物量；W包包制备当时包封量；制备当时包封量；W贮贮定期测得包封量。定期测得包封量。第七十九页，共102页幻灯片4 渗漏率测定渗漏率测定 渗漏率渗漏率测定方法是一定条件下贮存（灭菌）脂质体，测定方法是一定条件下贮存（灭菌）脂质体，定期（时）取样定期（时）取样 用测定包封率的方法（主要用凝胶柱层析）测定脂质体用测定包封率的方法

36、（主要用凝胶柱层析）测定脂质体包封量或游离药物量包封量或游离药物量 与开始包封或游离药物量比较，再由式计算渗漏率。与开始包封或游离药物量比较，再由式计算渗漏率。第八十页，共102页幻灯片5药物体内分布 通常可以小鼠为受试对象，通常可以小鼠为受试对象， 将脂质体静注给药，测定不同时间血药浓度，将脂质体静注给药，测定不同时间血药浓度， 并定时处死剖取脏器组织，捣碎分离取样，并定时处死剖取脏器组织，捣碎分离取样， 以同剂量药物作对照，比较各种组织的滞留量，进行以同剂量药物作对照，比较各种组织的滞留量，进行动力学处理，以评价脂质体在动物体内的分布。动力学处理，以评价脂质体在动物体内的分布。 第八十一页

37、，共102页幻灯片5药物体内分布 脂质体以静脉给药时，能选择地集中于单核脂质体以静脉给药时，能选择地集中于单核- -巨噬细胞巨噬细胞系统，系统，7070-89-89集中于肝、脾。集中于肝、脾。 如卡氮芥脂质体注射液在小鼠尾静脉注射后卡氮芥主如卡氮芥脂质体注射液在小鼠尾静脉注射后卡氮芥主要被肝、脾摄取，要被肝、脾摄取，4040minmin在肝中达峰值，在肝中达峰值，8 8h h仍保持较高仍保持较高的滞留量，较同一时间的卡氮芥水溶液摄取量提高的滞留量，较同一时间的卡氮芥水溶液摄取量提高1010倍。倍。 第八十二页，共102页幻灯片 脂质体的作用机制和给药途径脂质体的作用机制和给药途径 ( (一一)

38、 )脂质体与细胞的相互作用脂质体与细胞的相互作用 脂质体属胶体系统，具有靶向和缓释作用，从而可提脂质体属胶体系统，具有靶向和缓释作用，从而可提高药物药效，降低不良反应。高药物药效，降低不良反应。 脂质体与细胞膜的组成相似，能显著增强细胞摄取，脂质体与细胞膜的组成相似，能显著增强细胞摄取，延缓和克服耐药性。延缓和克服耐药性。 脂质体在体内细胞水平上的作用机制有吸附、脂交换、脂质体在体内细胞水平上的作用机制有吸附、脂交换、内吞、融合等内吞、融合等 第八十三页，共102页幻灯片( (一一) )脂质体与细胞的相互作用脂质体与细胞的相互作用 1 1吸附吸附 吸附是脂质体作用的开始，是普通物理吸附，吸附是

39、脂质体作用的开始，是普通物理吸附， 受粒子大小、密度和表面电荷等因素的影响。受粒子大小、密度和表面电荷等因素的影响。 如脂粒与细胞表面电荷相反，吸附作用大。如脂粒与细胞表面电荷相反，吸附作用大。第八十四页，共102页幻灯片( (一一) )脂质体与细胞的相互作用脂质体与细胞的相互作用 2 2脂交换脂交换 脂质体的脂类与细胞膜上脂类发生交换。脂质体的脂类与细胞膜上脂类发生交换。 其交换过程包括：脂质体先被细胞其交换过程包括：脂质体先被细胞吸附吸附，然后在细胞表，然后在细胞表面蛋白的介导下，特异性交换脂类的极性基团或非特异面蛋白的介导下，特异性交换脂类的极性基团或非特异性地交换酰基链。性地交换酰基链

40、。 交换仅发生在脂质体双分子层中外部单分子层和细胞质交换仅发生在脂质体双分子层中外部单分子层和细胞质膜外部的单分子层之间，而膜外部的单分子层之间，而脂质体内药物并未进入细胞脂质体内药物并未进入细胞。脂质体可与血浆中各种组织细胞相互作用进行脂交换。脂质体可与血浆中各种组织细胞相互作用进行脂交换。第八十五页，共102页幻灯片( (一一) )脂质体与细胞的相互作用脂质体与细胞的相互作用 3 3内吞内吞 内吞作用内吞作用( (endocytosis)endocytosis)是脂质体的主要作用机制。是脂质体的主要作用机制。 脂质体被单核脂质体被单核巨噬细胞系统细胞，特别是巨噬细胞作为巨噬细胞系统细胞，特

41、别是巨噬细胞作为外来异物吞噬，称内吞作用。外来异物吞噬，称内吞作用。 通过内吞，脂质体能特异地将药物浓集于作用的细胞通过内吞，脂质体能特异地将药物浓集于作用的细胞房室内房室内，也可使不能通过浆膜的药物达到溶酶体内。，也可使不能通过浆膜的药物达到溶酶体内。被动靶向被动靶向第八十六页，共102页幻灯片( (一一) )脂质体与细胞的相互作用脂质体与细胞的相互作用 4 4融合融合 融合融合( (fusion)fusion)指脂质体的膜材与细胞膜的构成物相似指脂质体的膜材与细胞膜的构成物相似而融合进入细胞内，然后经溶酶体消化释放药物。而融合进入细胞内，然后经溶酶体消化释放药物。 体外证明脂质体可以将生物

42、活性大分子如酶、体外证明脂质体可以将生物活性大分子如酶、DNADNA、环磷环磷酸腺苷酸腺苷( (cAMP)cAMP)、mRNAmRNA或毒素以细胞融合方式传递到培养或毒素以细胞融合方式传递到培养细胞内。细胞内。第八十七页，共102页幻灯片( (一一) )脂质体与细胞的相互作用脂质体与细胞的相互作用 4融合 对产生耐药的菌株或癌细胞群，用脂质体载药可显著提对产生耐药的菌株或癌细胞群，用脂质体载药可显著提高抗菌或抗癌效果；高抗菌或抗癌效果； 大分子药物被包封于脂质体往往可以提高口服药效；溶大分子药物被包封于脂质体往往可以提高口服药效；溶酶体膜的通透性有限，可阻止大分子药物释放至细胞内酶体膜的通透性

43、有限，可阻止大分子药物释放至细胞内其它部位，而脂质体载大分子药物由于融合作用则往往其它部位，而脂质体载大分子药物由于融合作用则往往不受限制。不受限制。第八十八页，共102页幻灯片细胞膜对脂质体的吸附和融合细胞膜对脂质体的吸附和融合a a 吸附吸附 b b 融合融合第八十九页，共102页幻灯片脂质体的吸附和内吞脂质体的吸附和内吞第九十页，共102页幻灯片(二)给药途径 脂质体在体内可完全生物降解，一般无毒。脂质体在体内可完全生物降解，一般无毒。 脂质体在体内的作用受给药途径的影响。脂质体在体内的作用受给药途径的影响。 用不同的方法，可制备成各种大小和具有不同表面性用不同的方法，可制备成各种大小和

44、具有不同表面性质的脂质体，因而脂质体可适用于多种给药途径。质的脂质体，因而脂质体可适用于多种给药途径。 第九十一页，共102页幻灯片(二)给药途径 1 1静脉注射静脉注射 这是脂质体常见的给药途径。这是脂质体常见的给药途径。 脂质体静脉注射后迅速从血液循环中消除，其消除率脂质体静脉注射后迅速从血液循环中消除，其消除率与脂质体大小及表面所带电荷有关。与脂质体大小及表面所带电荷有关。 大的脂质体比小的消除快。大的脂质体比小的消除快。 第九十二页，共102页幻灯片(二)给药途径 2肌内和皮下注射 脂质体经肌内或皮下注射后，一般缓慢从注射部位消除，脂质体经肌内或皮下注射后，一般缓慢从注射部位消除， 随后吸收进入淋巴管，随后吸收进入淋巴管， 最后进入血液循环并广泛分布于肝、脾的单核最后进入血液循环并广泛分布于肝、脾的单核巨噬细胞巨噬细胞系统细胞中。系统细胞中。 第九十三页，共102页幻灯片(二)给药途径 2肌内