免疫组化操作步骤39277_第1页
免疫组化操作步骤39277_第2页
免疫组化操作步骤39277_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、免疫组化操作流程试剂预备1. PBS缓冲液（pH7.27.4）： NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L。2. 0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g。即抗原修复液3.PBST: PBS+吐温-20（1000:1）洗液可全部运用PBST4. 3% 甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。5. 封片剂：中性树脂+二甲苯。操作流程免疫组织化学染色SP法：1. 脱蜡、水化： 脱蜡前，应将切片在60恒温箱中烘烤60120分钟，观看石蜡

2、应溶解。从烤箱拿出切片后尽快置于二甲苯中浸泡30分钟，更换二甲苯后再浸泡30分钟；无水乙醇中浸泡3分钟；95%乙醇中浸泡3分钟；70%乙醇中浸泡3分钟（我用80%）；50%乙醇中浸泡3分钟；自来水中浸泡3分钟；梯度脱蜡2. 抗原修复：（用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片）高压热修复 高压锅里放少许水，用一量杯或容器（大小能容纳玻片架为宜）装抗原修复液放入高压锅里一起煮沸，再放入玻片架，盖上不锈钢高压锅的盖子，将排气阀门套上，待听到阀门冒气时，即可倒计时2min，之后将玻片杯一起放入凉水中，静置15min，平衡至室温。电磁炉1000W 2min。3.丢弃抗原修复液，将玻片浸泡在去离子水中（时间不

3、限）可省略4.用组织笔沿组织边缘画线（可与组织边缘留适当间隙），画完马上放入PBST溶液中浸泡3遍X3min（三个容器，每个容器3min，时间不限制）。5. 3%H2O2滴加在切片上，室温静置15分钟(3%的H2O2用30%的H2O2加双蒸水稀释10倍，现配现用。目的为阻断内源性过氧化物酶)；6. PBST洗3次各3分钟(过三缸)7. 滴加正常山羊血清封闭液,室温30分钟。用与一抗不同源的血清即可，本人用Western-blotting的含胎牛血清封闭液。8. 甩去封闭液（注：不要冲洗），滴加一抗50ul（至少50ul否则易干片），4孵育过夜。4过夜后需在37复温45分钟（未验证：室温静置1小时或者4过夜或者371小时。）。9. PBST洗3次各3分钟；10. 滴加兔或鼠二抗一滴，先滴帮助剂，再滴二抗，之间用PBST洗三次，每次3min，每次室温各静置15分钟；所用试剂盒为中杉金桥的超敏二步法免疫组化检测试剂。11. PBST洗3次各3分钟；12. DAB显色几秒至几分钟，在显微镜下把握染色程度；DAB为福州迈新试剂，先配现用。13. PBST或自来水冲洗10分钟；14. 苏木精复染20秒，自来水分化

人人文库> 全部分类> 应用文书 > 研究报告

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论