青梅茎中岩白菜素的提取工艺研究

1、青梅茎中岩白菜素的提取工艺研究                   作者：莫峥嵘 蔡仁文 李玖慧 陈光英 韩长日【摘要】  目的研究青梅茎中提取岩白菜素的最佳工艺。方法以岩白菜素含量为指标，比较冷浸提取、超声提取、回流提取3种方法提取物中岩白菜素含量。并以正交实验确定回流提取的最佳工艺。结果3种提取方法中回流提取的提取物中岩白菜素含量最高，正交实验优化条件为：料液比为1：15，提取时间为1.5 h，提取次数

2、1次。结论在此最佳参数组合下，岩白菜素的含量为0.23%。 【关键词】  青梅； 岩白菜素； 提取工艺Abstract：ObjectiveTo study the best extraction technology of bergenin from the stem of Vatica Mangachpoi Blanco growing in Hainan.MethodsThe cold-soaked extracting,ultrasonic extraction and heat reflux extraction technologies were respectively

3、used for extraction of bergenin. According to the orthogonal design,the optimum reflux extraction was sought through experimental investigation.ResultsThe optimum parameters of extracting bergenin were as follows:extracting for 1.5 hours,one time,and 1:15 of the ratio of material and solvent.Conclus

4、ionThe yielding content of bergenin was 0.23% at the condition of optimum parameters.Key words： Vatica mangachpoi Blanco;   Bergenin;   Extraction technology   青梅Vatica mangachpoi Blanco系龙脑香科(Diptercocarpaceae)青梅属(Vatica genus)植物，主要分布于海南保亭、三亚、东方、白沙、乐东、万宁和琼中等地1。在民间，海南青梅叶

5、长期用作杀菌消毒、治疗肝炎及提取中药龙脑香。   通过对青梅茎的有效成分的提取、分离、纯化及结构鉴定，确定青梅中含有岩白菜素(bergenin ) 2。岩白菜素主要作用是止咳祛痰，但近年的药理实验发现岩白菜素还具有抗炎、护肝、抗溃疡、提高免疫等作用3。陈光英等4用高效液相色谱法测定青梅茎皮中岩白菜素的含量，其含量为0.8%。   由于青梅茎中含有大量的岩白菜素，而青梅茎中岩白菜素的提取工艺研究还未见报道，因此，为了充分利用青梅药用植物，本实验拟对青梅茎岩白菜素的提取工艺进行实验和比较，以期优化、筛选出理想的提取工艺。1  器材 

6、60; 大连依利特公司UV230紫外检测器，P230高压恒流泵（双泵），EC2000工作站；日本SHIMADZU十万分之一天平；甲醇为色谱纯, 水为重蒸水, 其余试剂为分析纯；岩白菜素标准品（购自芜湖尔塔医药科技有限公司）；青梅药材采自海南万宁，经海南师范大学生命科学学院钟琼芯副教授鉴定为龙脑香科青梅属植物Vatica mangachpoi Blanco，样本保存在海南师范大学热带药用植物化学重点实验室内。2  方法2.1  色谱条件4色谱柱：Kromasil C18 (250 mm×4.6 mm，5 m)；流动相：A：0.5% 冰乙酸水溶液（V/V），B：甲醇。

7、梯度洗脱，洗脱条件0 min(A:80,B:20 V/V)；10 min(A:65,B:35 V/V)；25 min(A:64,B:36 V/V)；30 min(A:0,B:100 V/V)；42 min(A:20, B:80 V/V)；流速：0. 4 ml· min-1；检测波长274 nm；柱温：30 ；进样量：10 l。在此色谱条件下，青梅茎中岩白菜素样品与岩白菜素对照品相比较，保留时间基本一致，在274 nm波长处其它色谱峰干扰小，青梅茎岩白菜素得到较好的分离而且含量较高，见图1和图2。图1  岩白菜素对照品的HPLC图谱（略）2.2  标准曲线的绘制精密

8、称取干燥至恒重的岩白菜素对照品10 mg , 置于25 ml 容量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成浓度为0.4 mg·ml-1 的储备液。以此为母液配制浓度为0.2 mg·ml-1溶液；再以0.2 mg·ml-1为母液，配制浓度为0.1 mg·ml-1的溶液；依次类推，配制成浓度分别为0.05 ，0.02 5，0.012 5 mg·ml-1的标液4。精密吸取不同浓度的对照品溶液各10l，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，对照品进样质量为横坐标，进行回归分析，则回归方程为Y3961.7X-103.4，R2=0.999 1，结果表明，在0.1

9、254 g之间，峰面积与进样量之间的线性关系良好。该定量分析方法可用于青梅茎提取液中岩白菜素含量的检测分析。图2  青梅茎岩白菜素样品的HPLC图谱（略）2.3  不同提取方法提取物中岩白菜素的含量比较5称取青梅茎粗粉1.0 g 3份，分别加15倍量95的乙醇，用冷浸提取法冷浸两次，1天/次；超声提取法提取两次，20 min/次；回流提取法提取两次，1.5 h/次。分别合并两次提取液，过滤，浓缩定容置10 ml容量瓶,备用。按“2.1”项色谱条件测定岩白菜素含量，结果表明，用回流提取法得到的提取物岩白菜素含量最高。所以以下实验选择回流提取法进行提取条件优化筛选。2.4

10、60; 回流提取法提取条件优化筛选68         表1  回流提取法多因素正交实验设计（略）表2  L9(34) 回流提取法多因素正交实验结果统计（略）以正交实验法优选了乙醇回流提取青梅茎中岩白菜素的提取工艺，结果表明，各因素对提取效果的影响主次关系为提取料液比(A) 提取次数（B）提取时间（C），确定最佳提取工艺为：提取料液比1:15， 提取次数1，提取时间1.5 h。2.5  最佳工艺验证称取青梅茎粗粉1.0 g，平行3份。按上述正交实验法优选的最佳工艺条件进行实验。结果见表

11、3。表3  最佳工艺条件验证（略）3次重复最佳工艺验证表明，本工艺设计合理，稳定可行。3  结论   本实验确定了回流提取法提取青梅茎岩白菜素的工艺条件。单因素实验最佳条件为：60%乙醇为提取溶剂、提取料液比为1:15，提取次数为1，提取时间为1h。正交实验最佳工艺为：提取料液比1:15，提取次数1，提取时间1.5 h。在优化条件筛选时，以正交实验结果为准。   青梅茎中岩白菜素的含量为0.23%，而青梅茎皮中岩白菜素的含量为0.8%，主要是由于青梅茎比青梅茎皮含有较多的纤维素所致。【参考文献】  1 吴德邻. 海南及广东沿海岛屿植物名录M.北京：科学出版社,1994 ,58.2 莫峥嵘，陈光英，韩长日，等.青梅茎的化学成分研究（）J.中山大学学报（自然科学版），2007， 46(2)：126.3 孙 敏，师 冰，徐榕雪.岩白菜素提取工艺制剂及质量标准研究综述J.云南中医中药杂志， 2005，26(5)：56.4 陈光英，蔡宝华，吴晓鹏，等.HPLC法测定青梅茎皮中岩白菜素J.中草药，2008，39(5):776.5 张师愚，王永平，张 晨，等.